植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)李永吉李永吉12101705121017051212青年農(nóng)場(chǎng)主班青年農(nóng)場(chǎng)主班第一部分：培養(yǎng)基母液的配制第一部分：培養(yǎng)基母液的配制通過配制母液過程了解植物外植體立體培養(yǎng)所需各種營養(yǎng)成分及激素種類，掌握培養(yǎng)基母液配制的方法。之所以要配制培養(yǎng)基母液，是因?yàn)榭紤]到在配制培養(yǎng)基時(shí)使用更方便、操作更簡化、用量更準(zhǔn)確，減少每次配藥稱量各種化學(xué)成分所花費(fèi)的時(shí)間和誤差，所以我們?cè)谂渲婆囵B(yǎng)基之前將配制培養(yǎng)基所需無機(jī)大量元素、

2、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物、激素成分分別配制成比需要量大若干倍的濃縮母液，置于冰箱保存。當(dāng)配制培養(yǎng)基時(shí)，按預(yù)先計(jì)算好的量分別量取各種母液即可。實(shí)驗(yàn)所需用具器材有：電子天平（檢測(cè)靈敏度0.0001g）、pH計(jì)、托盤電子秤（檢測(cè)靈敏度0.01g）、冰箱、燒杯（1000mL、500mL、250mL、50mL）、量筒（2000mL、1000mL、100mL、50mL）、試劑瓶（1000mL、250mL、150mL）、藥匙、玻璃棒實(shí)驗(yàn)所需藥品試劑有：

3、蒸餾水、1NHCl、1NNaOH、95%酒精、各種所需化學(xué)藥品（分析純）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、無機(jī)大量元素母液的配制（無機(jī)大量元素母液的配制（20倍）倍）按培養(yǎng)基配方所需量，將各種化合物稱量擴(kuò)大20倍，用托盤電子秤稱取，并用200mL蒸餾水溶解于250mL燒杯中，如溶解緩慢，可稍加熱。CaCl2單獨(dú)用100mL純水溶解。溶解后將以上溶液倒入容量瓶中定容至1000mL。倒入試劑瓶中并貼好標(biāo)簽，保存于冰箱冷藏。MS無機(jī)大量元素母液配制2、無

4、機(jī)微量元素母液配制無機(jī)微量元素母液配制按培養(yǎng)基配方所需量，將各種化合物稱量擴(kuò)大200倍，用托盤電子秤稱取，并用200mL蒸餾水溶解于250mL燒杯中，。溶解后將以上溶液倒入容量瓶中定容至500mL。倒入試劑瓶貼好標(biāo)簽，保存于冰箱。母液名稱化合物名稱配方規(guī)定量（gL）貯備液的倍數(shù)配制母液稱取量g母液體積mL配一升培養(yǎng)基時(shí)取母液量mLNH4NO31.6533KNO31.938CaCl20.3326.64MgSO4.7H2O0.377.4大量

5、元素KH2PO40.17203.41000505、激素母液配制激素母液配制各類激素用量最小，為了方便和準(zhǔn)確，也配制成母液。母液濃度依據(jù)需要和習(xí)慣靈活確定。各類激素均不能直接用蒸餾水溶解，而要用各種不同溶劑先洗滌后再用蒸餾水定容。一般的，NAA、IAA、IBA等生長素是醇溶性的，均可用少量95%酒精先溶解后再用蒸餾水定容，而KT、6BA、ZT等細(xì)胞分裂素可先用少量1NNaOH溶解后再用蒸餾水定容。冰箱保存。激素NAA（0.2mgmL）先少

6、量95%乙醇引溶，后加水定容6BA(2mgmL)先少量濃HCl引溶，后加水定容第二部分：培養(yǎng)基的配制和滅菌第二部分：培養(yǎng)基的配制和滅菌培養(yǎng)基是影響植物組織培養(yǎng)成功與否的最重要因素之一，除了培養(yǎng)材料本身的因素外，培養(yǎng)基的種類、成分等直接影響培養(yǎng)材料的脫分化、繼代增值和再分化。我們通過配制MS培養(yǎng)基以及滅菌操作掌握其配制方法，滅菌方法和操作過程以及高壓滅菌鍋的使用方法。培養(yǎng)基是根據(jù)植物生長發(fā)育的需要進(jìn)行設(shè)計(jì)和配制的，配制號(hào)的培養(yǎng)基由于含有豐

7、富的營養(yǎng)物質(zhì)，有利于微生物的生長繁殖，因此配制好的培養(yǎng)基要立即進(jìn)行滅菌。采用高壓滅菌鍋對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌主要原理是在高溫下使微生物的蛋白質(zhì)變性，從而達(dá)到殺滅微生物的目的。此部分實(shí)驗(yàn)的用具有：電磁爐、不銹鋼湯鍋（3L）、燒杯、鑰匙、托盤電子稱、培養(yǎng)瓶、記號(hào)筆、量桶、移液管、吸球、玻璃棒、PH計(jì)。所需實(shí)驗(yàn)藥品有：大量元素、微量元素等母液，蔗糖、瓊脂粉、0.1molLHCl、0.1molLNaOH。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：（1）培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的