當前雞重要呼吸道傳染病(ai、nd、ib)的危害及防控策略

1、當前雞重要呼吸道傳染?。ˋI、ND、IB）的危害及防控策略韋 平廣西大學2014.3.24.成都.,Guangxi UniversitySince 1928,冬春季常見呼吸道疾病,1、禽流感2、新城疫3、傳染性支氣管炎4、傳染性喉氣管炎5、傳染性鼻炎6、支原體感染7、大腸桿菌病,,病毒性感染（大多為原發(fā)感染）,,大多為 繼發(fā)感染,Guangxi UniversitySince 1928,,生物安全,病毒性感

2、染,細菌性感染,,Fig. 1. Pyramid structure for the factors associated the health of bird,細菌性感染,病毒性感染,E.coli, Mg, ICSalmonella,IBV, NDV,ILTV, AIV,免疫抑制性疾病,免疫抑制性疾病,MDV, IBDV,CIAV, REV,ALV, ReoV,冬春季發(fā)病嚴重的主要原因,1、需要保暖 → 室內通風不良 →

3、空氣廢氣濃度高 → 呼吸道上皮受到損害 → 易被病原感染；2、室內雞密度高、通風不良 → 空氣病原濃度高 → 易被病原感染；3、冬春氣候應激因素多 → 機體抵抗力下降；4、冬春傳統(tǒng)節(jié)日多、新年生產開始 → 雞的飼養(yǎng)量大、交 易量大、流通頻繁 → 傳染病易于傳播和擴散。,Guangxi UniversitySince 1928,疾病防治原則,1、雛雞保暖同時，注意通風換氣；（定期換氣）2、

4、要控制呼吸道疾病，首先要做好病毒性疾病的 預防免疫；3、盡量避免或降低應激的發(fā)生和不利影響；4、預防（免疫、應激前給藥）為主，治療為輔；5、藥物治療前先做藥敏試驗。,Guangxi UniversitySince 1928,雛雞的溫 度,溫度要求： 第1-5天 35°C， 以后每周降低2-3°C，直至維持在保溫后期的28°C或者以上。 目觀以雞群均

5、勻分散、表現(xiàn)活潑為宜。房間內溫度分布均勻 煤爐的位置及距離：雞舍的中央全天保持恒定 特別要注意夜間和中午的溫度注意防止熱源廢氣直接排放在雞舍內或者倒流,Guangxi UniversitySince 1928,濕 度,保溫膜： 最多四周，至少天花板不能用墊 料： 干爽不結塊（但是不起飛塵），厚度5-10 cm 刨花＞木糠＞谷殼＞稻草（切短成15-20c

6、m長）,Guangxi UniversitySince 1928,密 度,以均勻分散，活動沒有多少限制為宜注意及時擴群 純土雞：12-14天 快大（土2、土3）品種：7天飼養(yǎng)后期： 大部分時間在運動場 --種樹、遮陰網(wǎng) --要有足夠的水、料桶,Guangxi UniversitySince 1928,空氣的衛(wèi)生,1、廢氣：　H2S和N

7、H4 （糞便、潮濕）、　CO 、 CO2 （煤氣）等。 2、病原：　消毒不全、鄰近大雞：MDV、IBV、NDV， 糞便：E.coli , 沙門氏菌 密度大： E.coli、葡萄球菌等。３、塵埃：（墊料干燥）　 E.coli , 沙門氏菌等病原附著物。,Guangxi UniversitySince 1928,,,,,,,,,,,1.流行與歷史 又名真性雞瘟、歐洲雞瘟，國際獸疫局（OIE）列為A

8、類傳染病。 定義：具有危害嚴重，傳播迅速和穿越國界的，有產生嚴重的社會、經濟或公共衛(wèi)生后果和在動物及動物產品的國際貿易 中重要的傳染病。 各國政府需要經常向OIE報告A類傳染病，發(fā)生疫情后必24-48小時內報告OIE。附：OIE認定的List A and List B diseases(Table 1,2).,禽流感 (Avian Influenza, AI),Guangxi UniversitySince 19

9、28,國 外 禽 流 感 動 態(tài)：1878 首次發(fā)現(xiàn)于意大利 (雞)1975，1985 Australia(H7N7 ) 1979 England 1983-1984 USA Pennsylvania（H5N2 ）1983-1984 Ireland 1993,1994,1995 Mexico(H5N2) 1994 Pakistan, Australia (H7N3) 2003-現(xiàn)在

10、亞洲各國的H5N1、H5N2,Guangxi UniversitySince 1928,2. 病 原 屬正粘病毒的A型流感病毒 (Fig.1)，病毒株之間毒力相差很大。從引起隱性感染到致死性疾病均有。 亞型很多, HA1~16, NA1~9。2.1 高致病力禽流感病毒（ HPAIV）的界定標準美國動物健康協(xié)會(AHA)、家禽及其它鳥類傳染病委員

11、會 (CTDP),Guangxi UniversitySince 1928,① 皮下接種1:10稀釋的病毒尿囊液( 0.2ml／胚) 的1一6周齡的易感雞，在10天內死亡6、 7、 8／8羽； ② 病毒的血凝素（H）抗原為5、7，雖未達到 標準①，但具備HPAIV血凝素裂解位點的氨 基酸序列特 征； ③ 雖不屬于H5或H7亞型，但攻毒后使1／5羽 的易感雞死亡，而且在不加胰

12、酶時可在細胞 培養(yǎng)上生長。,Guangxi UniversitySince 1928,2.2 病毒保存宿主 ①自由飛翔的鳥類：遷徙的水禽（特別是野鴨） 及濱鳥； ②野鳥群中60％的青年鳥被感染并排泄病毒長達 30天； ③ 感染后未撲殺的帶毒的禽鳥。,Guangxi UniversitySince 1928,2.3 抗原

13、變異 抗原飄變(drift)：病毒受免疫選擇壓的作用，HA 或NA 編碼基因發(fā)生位點突變所致。 抗原移位(shift)：當2個病毒同時感染1個細胞時， 病毒間核酸片段發(fā)生交換重組，產 生一個新的病毒。,Guangx

14、i UniversitySince 1928,2.4 細菌的并發(fā)感染 細菌分泌的蛋白酶可幫助AIV中、弱毒株 HA的裂解，從而使之感染力提高，毒力增強。背景：AIV 對細胞感染之先決條件：HA0 HA1和HA2 控制細菌的并發(fā)、繼發(fā)感染,,蛋白酶裂解,Guangxi UniversitySince 1928,3．臨床

15、表現(xiàn)3.1 癥狀與病變(Fig.2 ) 為一種感染或疾病綜合征。表現(xiàn)： 亞臨床感染 溫和的上呼吸道疾病 減蛋（1％一30％） 急性致死性的疾病,Guangxi UniversitySince 1928,3.2．經濟損失包括：①撲滅疾病的費用（檢測、防疫、免疫）； ②因采取撲殺政策而支付給養(yǎng)禽主的賠

16、償金； ③患病禽生產性能（增重、產蛋等）的下降； ④死亡（0一100％不等）。,Guangxi UniversitySince 1928,4．撲滅AI的措施 包括：①嚴格的檢疫； ②對疫區(qū)所有禽群進行 HPAIV感染的 流行 病學、血清學、病毒學調查； ③環(huán)境消毒，消除污染源；

17、 ④強化生物安全（biosecurity）的教育； ⑤對受威脅的地區(qū)使用滅活油乳劑苗。,Guangxi UniversitySince 1928,OIE A 類疾病,共15個其中列入的禽病是:(1)高致病性禽流感 (2)新城疫,Guangxi UniversitySince 1928,OIE B類疾病,其中列入的禽病12個(1)傳染性囊病(I

18、BD) (2)馬立氏病(MD) (3)禽支原體病(MG) (4)禽衣原體病 (ACH)(5)雞傷寒和雞白痢(FT+PD) (6)禽傳染性支氣管炎IB)(7)禽傳染性喉氣管炎(ILT) (8)禽結核(ATB)(9)鴨病毒肝炎(DVH) (10)鴨病毒腸炎(DVE)(11)禽霍亂(FC) (12)家禽腸炎沙門氏菌感染,Guangxi UniversitySin

19、ce 1928,,,,流感病毒的基因組是分節(jié)段的，有大小不同的8個片段，總長為13.6 KB，編碼不同的病毒蛋白。目前已鑒定出10種蛋白質即PB1、PB2、PA、HA、NP、NA、M1、M2、NS1、NS2，,,,,,,,,,抗原性,細胞受體,跨種傳播能力,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,關于支氣管分叉及末端堵塞的病變,H9：★ ★ ★ ★IB： ★ ★ ★ILT： ★

20、 ★ND： ★,Guangxi UniversitySince 1928,禽流感的免疫,雛雞的免疫3周齡內免疫主要依賴母源抗體（種雞的免疫）3周齡以后：依賴出殼后免疫，至少需要免疫后2 周的時間第一次免疫：10~12d齡（夏季）、5-7d齡（冬春）， 第二次免疫：一免30d后H5、H9均要免疫,Guangxi UniversitySince 1928,種雞的免疫

21、,一般開產前免疫4次： 第三次免疫：90-100d，H5 第四次免疫：開產前10d，H5＋H9 生產高峰后：補一次H5＋H9,Guangxi UniversitySince 1928,雞的新城疫,Guangxi UniversitySince 1928,歷史背景,新城疫于1926年首次暴發(fā)于印度尼西亞的爪哇和英國的紐卡斯爾。1926

22、年以前，在中歐即有類似于我們現(xiàn)在所確定的ND報告。Levine引證Ochi和Hashimotoin的報告認為朝鮮早在1924年就可能已有此病。Macpherson認為1896年蘇格蘭Western Isles所有雞的死亡是由ND引起。,Guangxi UniversitySince 1928,為了避免與其他疾病的描述性名詞相混淆，Doyle就臨時命名為“Newcastle disease”，其病毒即為NDV。雖然近年來該病毒

23、的同義名—禽副粘病毒1型（APMV-1）逐漸普及，但80多年來，仍然沒有找到比其更好的名稱。,Guangxi UniversitySince 1928,新城疫仍是許多國家禽最主要的疾病之一。屬A類傳染?。∣IE），也是國際家禽及其產品貿易中嚴格控制的疾病之一。禽Ⅰ型副粘病毒（APMV-1）長期以來一直是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要病原之一。,Guangxi UniversitySince 1928,上一世紀九十年代之前，APMV-1主要引起

24、雞的新城疫和鴿的Ⅰ型副粘病毒病等。 長期以來，人們一直認為水禽（如鵝和鴨）對APMV-1的抵抗力最強，即使強毒感染也不表現(xiàn)明顯的臨床癥狀。,Guangxi UniversitySince 1928,但1997年，王永坤等首次報道江蘇的鵝群發(fā)病。最近國內還有鴨子發(fā)病的報道。韋 平等從9種臨床發(fā)病的禽/鳥類分離到APMV-1。由此可見，APMV-1感染并致病的宿主范圍有擴大的趨勢。,Guangxi UniversityS

25、ince 1928,病原學,,禽Ⅰ型副粘病毒(APMV-1): 單股負鏈、不分節(jié)段的RNA病毒。 ICTV（2002年）將其歸屬于:Mononegavirales Paramyxoviridae Paramyxovirinae Pneumovirinae Respirovirus

26、 Pneumovirus Rubulovirus Metapneumovirus Morbillivirus Henipavirus “TPMV-like Viruses” Avulavirus（Avian Rubulovirus ）禽腮腺炎

27、病毒屬 Avian parainfluenza virus type 1～9 (APMV-1～APMV-9) Type species: Newcastle disease virus (NDV),該屬共有9個血清型即禽副流感病毒(avian parainfluenza virus)血清1～9型(但簡寫仍沿用原來的禽副粘病毒即APMV-1～APMV-9)。NDV屬APM

28、V-1，也是屬的代表種 。,Guangxi UniversitySince 1928,新城疫病毒粒子,新城疫病毒結構,,病毒毒力、抗原,,病毒感染、抗原,Guangxi UniversitySince 1928,NDV對理化因素的抵抗力相當強，能在環(huán)境中頑強生存。新城疫暴發(fā)后2~8周，仍能從雞舍、蛋殼、羽毛等物質中分離到病毒。物理或化學因素的處理，例如熱、射線（光和紫外線）、pH效應和各種化學藥物均能破壞病毒的感染性。,Guangx

29、i UniversitySince 1928,NDV能凝集人、兩棲類、爬行類和禽類紅細胞。所有毒株都可凝集人、小鼠和豚鼠紅細胞，但凝集牛、山羊、綿羊、豬和馬紅細胞的能力則隨毒株而異。NDV依靠其HN蛋白結合于紅細胞表面的含唾液酸的受體，凝集成較大顆粒。這一特性能被特異性抗血清所抑制，成為病毒鑒定的有效方法 。,Guangxi UniversitySince 1928,禽I型副粘病毒（APMV-1）為有囊膜的RNA病毒，基因組不分節(jié)

30、段，單股負鏈。病毒至少含6種結構蛋白（L、P、NP、M、F、HN），均由病毒基因組編碼，還有一種來源于宿主肌動蛋白（非結構蛋白“V”）。,Guangxi UniversitySince 1928,這些基因組的排列序列為3’-NP-P-M-F-HN-L-5’，其中三種與病毒的囊膜有關：即固定在病毒囊膜表面的血凝素-神經氨酸酶糖蛋白（HN）、融合蛋白（F），以及襯于囊膜內面的非糖基化膜蛋白（M）；,Guangxi UniversityS

31、ince 1928,另外3種：核衣殼蛋白NP、磷蛋白（P）、及大分子量蛋白（L）圍繞著病毒RNA形成核衣殼。目前研究證明，與APMV-1感染宿主范圍和毒力密切相關的主要是HN蛋白和F蛋白。,Guangxi UniversitySince 1928,新城疫病毒基因組結構,Guangxi UniversitySince 1928,F蛋白的生物學功能,F蛋白是使病毒脂蛋白囊膜與宿主細胞表面包膜融合的主要因子，同時也是決定APMV-1毒

32、力的主要決定因素。副粘病毒粒子吸附到宿主細胞后，在表面糖蛋白F的參與下將核衣殼送入胞漿中。,Guangxi UniversitySince 1928,激活融合（F）蛋白活性的先決條件是一個特異的裂解修飾過程。所有F蛋白首先是以無活性前體F0的形式存在，其在復制時需裂解成F1和F2后，病毒才具有感染性。這種翻譯后的裂解是由宿主細胞蛋白酶調理的。若裂解失敗，則產生非感染性的病毒顆粒。,Guangxi UniversitySince 19

33、28,HN蛋白的生物學功能,HN蛋白主要負責病毒粒子趨向細胞，并與細胞受體（細胞膜上寡糖鏈末端的神經氨酸）的結合，并使之破壞。HN與受體的結合還使F蛋白充分接近宿主細胞，從而促進病毒與細胞的融合。,Guangxi UniversitySince 1928,隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)APMV-1的變異主要發(fā)生在F基因和HN基因。對不同毒株F基因的序列分析表明，不同毒株F基因的序列有差異，而這種差異與毒株間的親源關系有關，即親源關系越近

34、差異越小，反之差異越大。,Guangxi UniversitySince 1928,不同來源和不同毒力株APMV-1 F蛋白的差異主要集中在信號肽區(qū)（1位~25位殘基）和裂解位點區(qū)（112位~117位殘基）。,Guangxi UniversitySince 1928,,,,,,,,NP蛋白的生物學功能,NP上分布了三類活性位點: P蛋白結合位點、 NP-NP相互結合位點、 病毒基因組RNA結合位點。NP在

35、病毒復制方面具有幾種功能： 包裹基因組RNA，使之免受核酸酶分解； 在RNA轉錄和復制過程中，與RNA多聚酶作用； 在組裝病毒粒子時和M蛋白作用。,Guangxi UniversitySince 1928,致病機理,不同NDV毒株的致病性差異很大，影響病毒毒力的主要因素是F蛋白的前體F0能否被宿主細胞的蛋白酶有效地裂解。病毒的其它成分也與毒力有一定關系。,Guangxi UniversitySin

36、ce 1928,通過對大量NDV毒株的分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)0在裂解部位的氨基酸序列呈現(xiàn)明顯的規(guī)律性： 強毒株為RRQK/RR↓F， 弱毒株為GK/RQGR↓L。對強毒株來說，由于裂解部位的堿性氨基酸數(shù)目較多，F(xiàn)0能夠被很多組織細胞的蛋白酶所識別，因此融合活性高。,Guangxi UniversitySince 1928,而NDV弱毒株的F0在裂解部位由中性氨基酸替代了堿性氨基酸（尤其是112和115位氨基酸），不能被

37、大多數(shù)細胞內的蛋白酶所識別，僅能被上呼吸道或雞胚尿囊液中分泌到細胞外的胰酶樣蛋白酶（trysine-like proteinase）修飾，因此膜融合活性低。,Guangxi UniversitySince 1928,在體外細胞培養(yǎng)物中，NDV弱毒株的F0不能被切割，因而不能產生融合性致病作用；加入外源性胰蛋白酶后，即可表現(xiàn)出致病性。,Guangxi UniversitySince 1928,流行病學,ND在世界上曾有過三次大流行：

38、第一次是于1926年起源于東南亞，經亞洲向歐洲緩慢運動，經30年時間傳播到世界各地；第二次大流行于60年代末起源于中東，至1973年就已波及大多數(shù)國家。這次大流行之所以快，可能是因為養(yǎng)禽業(yè)已發(fā)生一次重大變革，已發(fā)展為一個具有巨大國際貿易的商業(yè)化產業(yè)。,Guangxi UniversitySince 1928,第三次大流：該次大流行于70年代末起源于中東，到1981年傳至歐洲，然后傳至世界各地，賽鴿、觀賞鴿和食用鴿是主要的傳播者。

39、給世界養(yǎng)禽業(yè)帶來了嚴重的損失。此后許多國家對進口籠養(yǎng)鳥也加強了控制，但是鴿等新城疫的潛在威脅卻被人們所忽視，這正是導致ND第三次大流行的原因。,Guangxi UniversitySince 1928,90年代以來，雖然沒有出現(xiàn)世界性ND大流行，但局部地區(qū)的流行和暴發(fā)時常發(fā)生（如臺灣、西歐、南非等地）。雖然我國各地所有雞群對雞新城疫采取了強化的免疫預防措施，包括多次使用弱毒疫苗和滅活油乳苗，但雞新城疫仍在各地不同程度地流行。,Gu

40、angxi UniversitySince 1928,在ND第三次大流行中，學者們對從病鴿分離的病毒進行研究，發(fā)現(xiàn)該病毒與雞NDV在病毒分類上均屬禽I型副粘病毒，大多數(shù)學者認為，前者是雞NDV長期適應鴿體內環(huán)境，并發(fā)生了某些變異的結果，因此將之稱為鴿新城疫變異株。Alexader等為了和雞新城疫相區(qū)別，將鴿新城疫獨立出來并將其命名鴿禽I型副粘病毒病，該病病原稱為鴿禽I型副粘病毒（pigeon paramyxovirus type

41、1 , PPMV-1）。,Guangxi UniversitySince 1928,1985年，PPMV-1傳入香港，有57個鴿場暴發(fā)該病。1985年8月，我國珠海拱北動物檢疫局從臺灣引進種鴿中檢出PPMV-1，同年底，深圳某鴿場由于從香港引入種鴿導致暴發(fā)鴿禽I型副粘病毒病。從此以后，本病在廣東不斷擴展，并向周邊省份蔓延。目前，我國華南、華東、華北地區(qū)大部分省份都有該病的流行和發(fā)生。,Guangxi UniversitySince

42、1928,新城疫病毒很少感染鵝，即使感染也不表現(xiàn)臨床癥狀。任 濤等曾用國內NDV標準強毒株F48E8攻擊28日齡的鵝，發(fā)現(xiàn)其對鵝的發(fā)病率和死亡率均為0。Rosenberger和Shortridge等分別在加拿大、香港等地從健康鴨、鵝等水禽體內分離到NDV毒株，它們均屬于弱毒株，且不會使水禽感染發(fā)病。,Guangxi UniversitySince 1928,1997年，王永坤等在江蘇鵝群中發(fā)現(xiàn)一種鵝的烈性傳染病，經實驗證明該病病原為

43、禽Ⅰ型副粘病毒強毒株。任 濤等也在廣東分離到感染鵝的禽Ⅰ型副粘病毒強毒株。,Guangxi UniversitySince 1928,研究證明，禽Ⅰ型副粘病毒的發(fā)病和流行不僅僅限于在雞，同時，也在鴿和鵝等禽類發(fā)病和流行，目前還有鴨發(fā)生禽Ⅰ型副粘病毒病的報道。我們實驗室從臨床發(fā)病的鴨最近分離到2株APMV-1，經毒力測定為對中等毒力的毒株。,Guangxi UniversitySince 1928,臨床癥狀及病變,,,,,,,,,,

44、,,,,,發(fā)病鵪鶉表現(xiàn)羽毛松亂、扭頸、肢體麻痹和角 弓反張等神經癥狀；病死的鵪鶉則缺乏新城疫的典型病理變化。,,,發(fā)病鴿子表現(xiàn)精神不振，拉黃綠色稀糞；部分病鴿出現(xiàn)震顫、呆立、單側或雙側翅膀麻痹、頭頸扭曲、轉圈和昏迷倒地等神經癥狀。病死后主要的病理變化為胰腺有白色壞死點，脾臟出血或有白色壞死點，直腸和泄殖腔彌漫性出血,在自然發(fā)生的家禽新城疫病例中，由于年齡、品種以及感染毒株不同，病理變化的差異極大：輕癥病例出現(xiàn)氣囊炎和肺充血，伴有

45、呼吸道的非特異性病變。重癥病例發(fā)生時，病毒從呼吸道或消化道侵入，先在局部繁殖，然后迅速經血流擴散到全身，引起敗血癥。,Guangxi UniversitySince 1928,病毒損傷血管壁，引起出血、漿液滲出和壞死變化，由此產生嚴重的消化功能紊亂；由于循環(huán)障礙引起肺充血和呼吸中樞擾亂，出現(xiàn)呼吸困難。病毒破壞全身淋巴組織，胸腺、法氏囊和脾臟受害嚴重，造成免疫抑制。在慢性病例，病毒存在于中樞神經系統(tǒng)和骨髓中，引起腦脊髓炎變化，

46、出現(xiàn)神經癥狀。,Guangxi UniversitySince 1928,腸道病變部位,,Necrosis and hemorrhage in intestinal lymphoid aggregates evident from the: serosal surfac (E) and mucosal surface (F).,,Enlarged and necrotic cecal tonsils (Disease of P

47、oultry 10th Edition),,,Peritonitis with fibrin deposition(Disease of Poultry, 10th Edition),,,,,,病死鵝胰臟有大量的壞死灶,,,,,,Ovarian follicles with hemorrhagic stigmata.(Disease of Poultry, 10th Edition),,,,Splenic necrosis o

48、n the capsular surface (C) and cut surfac (D).,,Guangxi UniversitySince 1928,診斷,傳統(tǒng)禽Ⅰ型副粘病毒病的診斷方法急性的禽I型副粘病毒病，通常根據(jù)病史、臨床癥狀和尸體解剖即可做出初步診斷。但雞的慢性NDV易與其它呼吸道疾病（如傳染性支氣管炎、傳染性喉氣管炎等） 混淆，較難作出診斷，所以必須進行病毒分離和血清學診斷。,Guangxi UniversitySi

49、nce 1928,但NDV普遍存在緩發(fā)型毒株（包括野生型及接種的疫苗株），因而即使分離出NDV，也不能確診，還要作病毒特性的鑒定——致病性試驗。目前國際上采用三項體內試驗：雞胚平均致死時間（MDT），1日齡雞腦內接種致病指數(shù)（ICPI），6周齡雞靜脈接種致病指數(shù)（IVPI）。,Guangxi UniversitySince 1928,但是，這些試驗費時（需5天左右）、費錢（需用SPF雞作試驗），又煩瑣，往往延誤了控制疾病的時機

50、；血清學方法包括血凝試驗、雞胚中和及蝕斑中和試驗等。但是，這些方法不能鑒別新城疫各個毒株。所以，血清中出現(xiàn)特異性抗體不能反映感染毒株的情況，診斷意義不大。,Guangxi UniversitySince 1928,對于鴿禽I型副粘病毒和鵝副粘病毒的診斷也應進行病毒分離和病毒特性鑒定，但由于鴿的MDT、ICPI、IVPI這三項指標不穩(wěn)定，往往難于作出確診。,Guangxi UniversitySince 1928,單克隆抗體可以檢測抗

51、原性的微小差異。因此，不但可以檢測毒株間的差異，而且可以檢測病毒亞群間的差異。因此，單克隆抗體除用于常規(guī)診斷外，還可用于對病毒分離株的鑒定和歸類。例如已報道了用于區(qū)分常規(guī)疫苗株Hitcher B1和LaSota的2組單抗，其它一些單抗可區(qū)分疫苗株和某一地區(qū)的流行毒株。,Guangxi UniversitySince 1928,我國嚴維巍等也用單抗的方法將基因Ⅶ型的鵝源APMV-1和雞源F48E8、LaSota區(qū)分開來。Alexan

52、der用直接針對NDV Ulster 2C HN1位點的單抗不能抑制PPMV-1的血凝活性，據(jù)此可快速鑒別PPMV-1和大部分其它禽源APMV-1。,Guangxi UniversitySince 1928,后來，Alexander用9株針對NDV Ulster 2C HN1位點的單抗通過間接免疫酶聯(lián)試驗檢測了來自15個國家的57株PPMV-1，結果有53株僅與481、38和479三株單抗反應。因此將PPMV-1在APMV-1分類上歸

53、為一個特殊的組—P組。,Guangxi UniversitySince 1928,單抗技術為區(qū)分禽副粘病毒I型的抗原差異提供了一種新的方法。但有但有鑒別意義的單抗制備較困難，目前尚無商品供應，因此應用也受限制。由于傳統(tǒng)的診斷方法在特異、敏感、快速、實用、安全方面均存在一些缺陷，人們把目光瞄準了新興的分子生物學技術。,Guangxi UniversitySince 1928,RT-PCR技術及其應用于禽副粘病毒Ⅰ型強弱毒株鑒別診斷的分

54、子生物學基礎,1991年，Jestin等首先將聚合酶鏈反應（Polymerase Chain Reaction PCR ）技術應用于NDV的檢測與診斷。逆轉錄酶聚合酶鏈反應（Reverse Transcriptase Chain Reaction RT-PCR）技術是在PCR技術基礎上發(fā)展起來的。,Guangxi UniversitySince 1928,RT-PCR 技術應用于NDV鑒別的主要根據(jù)是NDV強弱毒株在F基因上的差別

55、。F糖蛋白在決定NDV的致病力方面起著決定性的作用，它負責病毒囊膜與宿主細胞融合，以使病毒穿過細胞膜進入宿主細胞，發(fā)生感染作用。,Guangxi UniversitySince 1928,F蛋白首先以惰性前體F0的形式合成，經宿主細胞蛋白酶裂解產生二硫鍵連接的F1和F2兩個亞基之后才具有融合活性。水解位點位于距F0蛋白氨基端116個氨基酸處，也就是在第394位核苷酸處（因為第1—46位核苷酸不編碼氨基酸）。不同種屬的副粘病毒，甚至同種

56、內的不同毒株，在F0蛋白水解位點的精氨酸、賴氨酸的數(shù)量和距離都各不相同，兩氨基酸成對則標志著易于水解，致病性強。,Guangxi UniversitySince 1928,不同種屬的副粘病毒，甚至同種內的不同毒株，在F0蛋白水解位點的精氨酸、賴氨酸的數(shù)量和距離都各不相同，兩氨基酸成對則標志著易于水解，致病性強。 Collins等根據(jù)17株NDV F基因的核苷酸序列推測出F0前體的氨基酸序列，加上以前報道的9株NDV病毒的序列，對其中

57、11株弱毒株和15株速發(fā)型或中發(fā)型毒株進行比較，,Guangxi UniversitySince 1928,結果發(fā)現(xiàn)所有病毒F2蛋白C端裂解位點的第116位氨基酸為精氨酸，弱毒株F1蛋白N端第117位為亮氨酸，第113位為另一個堿性氨基酸，故在這些毒株裂解位點僅有兩個單個的堿性氨基酸，所以僅被存在于宿主少數(shù)組織器官（如呼吸道和消化道上皮）的細胞的類胰蛋白酶（trypsin-like enzyme）所識別和裂解。,Guangxi Uni

58、versitySince 1928,相對而言，所有速發(fā)型或中發(fā)型毒株的第117位為苯丙氨酸，（只有一株例外），除第113位和116位外，第115位和第112位均為堿性氨基酸，因此形成了第112-113和第115-116位兩對堿性氨基酸的序列。這意味著強毒株能被廣泛存在宿主各組織器官的細胞的多種蛋白酶所識別和裂解，因而能廣泛地感染，即全身感染，致病力也就更強。,Guangxi UniversitySince 1928,因此，雞NDV的

59、毒力強弱可根據(jù)病毒在F基因裂解位點附近的氨基酸構成來確定。中外學者的研究也證明鴿禽I型副粘病毒和鵝副粘病毒的毒力也可以用此方法來確定。各種禽源I型副粘病毒不同毒力株F基因序列上的差異正是分子生物學方法鑒別其毒力的引物的靶。,Guangxi UniversitySince 1928,從組織勻漿提取RNA用RT-PCR鑒別診斷APMV-1,1994年，Jestin等首先從組織勻漿提取RNA，直接用RT-PCR技術進行NDV的檢測。但他們

60、并不能用RT-PCR來鑒別強弱毒株。1997年Kant等對Jestin的方法進行了改進。,Guangxi UniversitySince 1928,,他們合成了四個寡核苷酸片斷A、B、C、和D，其中A與F基因的第141—159位堿基互補；B與F基因的第485—503位堿基互補；C和D 都與395—380位堿基互補。,Guangxi UniversitySince 1928,,A和B組成一個引物對，用于檢測所有的NDV毒株；引物對A+

61、C用于檢測致病性的NDV毒株；引物對A+D則檢測無致性的NDV毒株。為了證明PCR產物的特異性，他們還設計了兩個探針L和M（如表1）。,Guangxi UniversitySince 1928,,曹殿軍等建立了一種既可從感染雞胚尿囊液又可從組織勻漿檢測雞NDV并鑒別其毒力的RT-PCR方法，但他們沒有報道能檢測其它禽源的APMV-1。,Guangxi UniversitySince 1928,,2000年，Kho等用逆轉錄-巢式聚合

62、酶鏈反應（RT-nest PCR）結合酶聯(lián)免疫分析技術代替RT-PCR和電泳技術，提高了雞NDV的檢出率和減少了所需的時間。他們發(fā)現(xiàn)該方法比電泳的方法分辨率高10倍，巢式PCR的方法比PCR的方法敏感100倍。遺憾的是，盡管他們的方法能檢出所有APMV-1毒株，但卻不能鑒別其毒力。,Guangxi UniversitySince 1928,我們實驗室依據(jù)APMV-1的融合蛋白（F）基因裂解位點的核苷酸序列與其毒力的相關規(guī)律，分別設計合

63、成了四條寡核苷酸引物，建立了一個可迅速檢測不同禽源禽I型副粘病毒并可鑒定強、弱毒株的逆轉錄酶—聚合酶鏈式反應（RT-PCR）技術。,Guangxi UniversitySince 1928,建立的方法能從組織勻漿中直接提取病毒RNA，只用一個反應即可檢測不同禽源分離的APMV-1毒株并可區(qū)分強弱毒。我們對多重PCR反應條件進行了優(yōu)化，由于本試驗中PCR產物的分子量相差不大，分別為362bp,254bp和123bp，只要通過對引物用量和

64、PCR條件進行優(yōu)化，最終保證三種產物的量相對平衡。,Guangxi UniversitySince 1928,所以，我們所設計的多重PCR可在一個反應內同時檢測出APMV-1強毒（PCR產物為362bp和254bp兩條帶）和弱毒（PCR產物為362bp和123bp兩條帶）。在研究的過程中，我們發(fā)現(xiàn)本方法還可以檢測不同禽源的APMV-1毒株，臨床可疑樣品的陽性檢出率為80.6%（近500份病例）。,Guangxi University

65、Since 1928,我們建立的多重PCR方法能從病料組織勻漿直接提取病毒RNA，進行一個RT-PCR反應即可檢測出APMV-1的存在與否，并判斷出是強毒或弱毒，或強、弱毒混合感染，僅需8小時即可完成全過程。本方法特異性高，靈敏度高，操作快捷、簡便，可以滿足臨床診斷和獸醫(yī)檢疫的需要。,Guangxi UniversitySince 1928,防治,目前大多數(shù)國家都采用預防接種作為控制新城疫的主要措施。根據(jù)具體情況，不同國家制備和應

66、用各種不同的弱毒疫苗以及滅活疫苗?；蚬こ堂缟刑幵谘芯亢烷_發(fā)階段，還沒有很大的實際應用價值。,Guangxi UniversitySince 1928,活疫苗,弱毒疫苗： B l株（II系疫苗） F株（III系苗） La Sota株及C30株（ IV系苗） V4株（無毒力、腸道株）中等毒力疫苗： Mukteswar（I系苗）,Guangxi UniversitySince 1928,優(yōu)點：活

67、疫苗毒力低，適用于幼雛作鼻內/或眼內滴注或作氣霧免疫，也可混合飲水服用，免疫后抗體產生快。缺點： 效價低，對呼吸道有應激作用，中毒活疫苗對幼雛具有一定的致病性。,Guangxi UniversitySince 1928,滅活油乳劑疫苗,滅活苗具有安全、易于貯存、免疫雞副反應小等優(yōu)點。此外，可用兩種或者多種抗原一起乳化制成二聯(lián)或多聯(lián)疫苗，減少勞動力。 生產該類疫苗的毒種包括F48E8、分離株、LaSota、C30等。,

68、Guangxi UniversitySince 1928,防 制,1、雞群帶毒比較普遍。 因此，通過加強免疫，使雞群保持高水平的免疫力（包括全身和局部免疫）尤為關鍵。發(fā)生AI后易繼發(fā)。2、免疫時，活苗和滅活苗配合使用。3、注意預防免疫抑制性病的侵害。 最常見的是：IBD、真菌毒素中毒、腫瘤病。,Guangxi UniversitySince 1928,新城疫的免疫,免疫依賴：母源抗體（種

69、雞的免疫） 雛雞的免疫（活疫苗）第一次免疫：剛出殼在孵房噴霧 或者 1-2天點眼＋滴鼻免疫（不能飲水） 新-支（ H120或者MA5）二聯(lián)） 第二次免疫：10~12天齡，點眼＋滴鼻（不能飲水） 與禽流感一起進行油苗的免疫第三次免疫：25-30d后與禽流感一起進行油苗