皮膚光毒替代試驗(yàn)方法的建立與改良

1、體外體外BalbcBalbc3T33T3成纖維細(xì)胞中性紅攝取試驗(yàn)對(duì)光毒物質(zhì)的評(píng)價(jià)成纖維細(xì)胞中性紅攝取試驗(yàn)對(duì)光毒物質(zhì)的評(píng)價(jià)呂中明，俞萍，王民生(江蘇省疾病預(yù)防控制中心江蘇南京210009)摘要：目的要：目的建立體外Balbc3T3成纖維細(xì)胞中性紅攝取試驗(yàn)(3T3NRUPT)，研究其作為化學(xué)品安全性評(píng)價(jià)中替代動(dòng)物光毒性試驗(yàn)的可行性，從而為制定和完善新的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范提供依據(jù)。方法方法⑴Balbc3T3細(xì)胞經(jīng)過(guò)UVA不同照射劑量照射后，用中性

2、紅攝入法測(cè)定不同照射劑量的細(xì)胞活力；⑵選取十二烷基硫酸鈉(SDS)，8甲氧基補(bǔ)骨脂(8MOP)，鹽酸氯丙嗪(CPZ)作為受試物按照OECD“化學(xué)品測(cè)試導(dǎo)則432”的推薦方法，將Balbc3T3成纖維細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，24h后每一種受試物經(jīng)預(yù)試驗(yàn)后設(shè)立8個(gè)濃度組，處理細(xì)胞1h后隨機(jī)選擇一塊培養(yǎng)板用紫外照度計(jì)(Biospectrasystem，法國(guó)VILBERLOURMAT公司)，選UVA光源(365nm)進(jìn)行紫外線照射(Irr)

3、照射劑量為5Jcm2另一平行板置于黑暗中不照射(Irr)作為對(duì)照。照射結(jié)束后，洗去受試化學(xué)物孵育24h后換中性紅培養(yǎng)液培養(yǎng)3h洗去培養(yǎng)基加入中性紅解吸附液，在540nm處酶標(biāo)儀測(cè)定NRU的吸光度值。根據(jù)測(cè)定的吸光度值使用PHOTO32軟件分別建立平均光效應(yīng)(MPE值)和光刺激因子(PIF值)預(yù)測(cè)模型以判斷所測(cè)物質(zhì)是否具有光毒性.結(jié)果結(jié)果⑴隨著照射劑量的增加細(xì)胞存活率逐漸降低，照射劑量為5、7.5、10、15、20Jcm2時(shí)，細(xì)胞存活率分

4、別為91.4%、77.0%、72.3%、40.2%和18.8%；⑵3T3NRUPT試驗(yàn)測(cè)得SDS、8MOP、CPZ的PIF值分別為0.89、22.81和17.60；MPE值分別為0.001、0.706和0.502按該試驗(yàn)閾值分類(lèi)方法SDS為無(wú)光毒性物質(zhì)，8MOP、CPZ均具有光毒性.結(jié)論結(jié)論通過(guò)正常3T3細(xì)胞經(jīng)紫外線照射后細(xì)胞存活率的比較發(fā)現(xiàn)照射劑量為5Jcm2時(shí)細(xì)胞的存活率高于90%但劑量達(dá)7.5Jcm2時(shí)細(xì)胞存活率就低于80%，顯示

5、出一定的細(xì)胞毒性，故照射劑量應(yīng)不高于5Jcm2為宜，結(jié)果同歐洲的多個(gè)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果基本一致；通過(guò)3T3NRUPT對(duì)目前已知的陽(yáng)性物8MOP、CPZ及陰性物SDS的檢測(cè)得出一致的結(jié)論本實(shí)驗(yàn)室成功地建立了3T3NRUPT，本實(shí)驗(yàn)室成功地建立了3T3NRUPT，并在照射劑量控制等方面進(jìn)行了探索，從而為化學(xué)品安全性評(píng)價(jià)提供依據(jù)。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：Balbc3T3中性紅，光毒性體外體外BalbcBalbc3T33T3成纖維細(xì)胞中性紅攝取試驗(yàn)對(duì)光毒物質(zhì)

6、的評(píng)價(jià)成纖維細(xì)胞中性紅攝取試驗(yàn)對(duì)光毒物質(zhì)的評(píng)價(jià)呂中明，俞萍，王民生(江蘇省疾病預(yù)防控制中心江蘇南京210009)摘要：目的要：目的建立體外Balbc3T3成纖維細(xì)胞中性紅攝取試驗(yàn)(3T3NRUPT)，研究其作為化學(xué)品安全性評(píng)價(jià)中替代動(dòng)物光毒性試驗(yàn)的可行性，從而為制定和完善新的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范提供依據(jù)。方法方法⑴Balbc3T3細(xì)胞經(jīng)過(guò)UVA不同照射劑量照射后，用中性紅攝入法測(cè)定不同照射劑量的細(xì)胞活力；⑵選取十二烷基硫酸鈉(SDS)，8甲氧

7、基補(bǔ)骨脂(8MOP)，鹽酸氯丙嗪(CPZ)作為受試物按照OECD“化學(xué)品測(cè)試導(dǎo)則432”的推薦方法，將Balbc3T3成纖維細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，24h后每一種受試物經(jīng)預(yù)試驗(yàn)后設(shè)立8個(gè)濃度組，處理細(xì)胞1h后隨機(jī)選擇一塊培養(yǎng)板用紫外照度計(jì)(Biospectrasystem，法國(guó)VILBERLOURMAT公司)，選UVA光源(365nm)進(jìn)行紫外線照射(Irr)照射劑量為5Jcm2另一平行板置于黑暗中不照射(Irr)作為對(duì)照。照射結(jié)束

8、后，洗去受試化學(xué)物孵育24h后換中性紅培養(yǎng)液培養(yǎng)3h洗去培養(yǎng)基加入中性紅解吸附液，在540nm處酶標(biāo)儀測(cè)定NRU的吸光度值。根據(jù)測(cè)定的吸光度值使用PHOTO32軟件分別建立平均光效應(yīng)(MPE值)和光刺激因子(PIF值)預(yù)測(cè)模型以判斷所測(cè)物質(zhì)是否具有光毒性.結(jié)果結(jié)果⑴隨著照射劑量的增加細(xì)胞存活率逐漸降低，照射劑量為5、7.5、10、15、20Jcm2時(shí)，細(xì)胞存活率分別為91.4%、77.0%、72.3%、40.2%和18.8%；⑵3T3N

9、RUPT試驗(yàn)測(cè)得SDS、8MOP、CPZ的PIF值分別為0.89、22.81和17.60；MPE值分別為0.001、0.706和0.502按該試驗(yàn)閾值分類(lèi)方法SDS為無(wú)光毒性物質(zhì)，8MOP、CPZ均具有光毒性.結(jié)論結(jié)論通過(guò)正常3T3細(xì)胞經(jīng)紫外線照射后細(xì)胞存活率的比較發(fā)現(xiàn)照射劑量為5Jcm2時(shí)細(xì)胞的存活率高于90%但劑量達(dá)7.5Jcm2時(shí)細(xì)胞存活率就低于80%，顯示出一定的細(xì)胞毒性，故照射劑量應(yīng)不高于5Jcm2為宜，結(jié)果同歐洲的多個(gè)實(shí)驗(yàn)室