應(yīng)用PCR-DGGE分析磁性流化床生物脫硫反應(yīng)器的菌群多樣性.pdf

1、控制環(huán)境污染已成為當(dāng)今各級政府和學(xué)術(shù)界面臨的重大課題，微生物法去除SO<,2>是一種新型簡單高效的處理方法，這種方法主要是靠脫硫系統(tǒng)中生物膜上的硫酸鹽還原菌菌群和無色硫細菌菌群起作用，但是硫酸鹽還原菌和無色硫細菌都包括很多的菌種，究竟該生物膜上有多少菌種，有哪些優(yōu)勢菌種，這為進一步闡明微生物脫硫機理、更好的應(yīng)用和推廣微生物脫硫方法提供有力的實驗依據(jù)。 研究生物膜的微生物多樣性，傳統(tǒng)方法已遠遠不能滿足。PCR-DGGE技術(shù)是以聚合

2、酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)為基礎(chǔ)的變性梯度凝膠電泳，并且可以和傳統(tǒng)方法、雜交技術(shù)、克隆測序技術(shù)等結(jié)合起來，從而全面認識微生態(tài)的組成。DGGE主要是利用含有濃度線形遞增的變性劑的聚丙烯酰胺凝膠電泳來分離DNA片段，它的分辨精度比瓊脂糖電泳和一般的聚丙烯酰胺凝膠電泳更高，甚至可以檢測到一個核苷酸水平的差異。 本研究采用CTAB法抽提菌群的總DNA，然后擴增16S rDNA的V3區(qū)，然后進行DGGE分離不同的菌種，進行克隆測序以及系統(tǒng)發(fā)育分析。

3、 本研究首次應(yīng)用PCR-DGGE技術(shù)分析不同時期微生物煙氣脫硫兩個反應(yīng)器的生物膜多樣性，并進一步對部分DGGE條帶進行了克隆測序，并繪制了進化樹。DGGE結(jié)果表明在厭氧反應(yīng)器的啟動期含有五個菌種，負荷運行期和穩(wěn)定運行期都可觀察到四個菌種，其中兩個為優(yōu)勢種；在好氧反應(yīng)器的啟動期含有八個菌種，負荷運行期和穩(wěn)定運行期都可觀察到六個菌種，其中各含有兩個優(yōu)勢種。通過對運行穩(wěn)定期的條帶進行回收、克隆、測序，利用Blast軟件對測序結(jié)果在GenBa

4、nk中進行了同源性對比，利用ClustalX1.83和Mega軟件，通過鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹。結(jié)果表明與條帶 S3-2 相近的是 Uncultured bacterium geneclone：BSA2B-04，相似性達到 98.84％；條帶 S3-3 相近的是Iron-reducing enrichment clone Cl-A2，相似性達到 100％；與條帶S3-4 相近的是 Uncultured bacterium mlel-9，相