生物型人工肝技術(shù)-采用培養(yǎng)于生物反應(yīng)器中的肝細(xì)胞與患者的血液通過半透膜進(jìn)行物質(zhì)交換

1、生物型人工肝技術(shù)采用培養(yǎng)于生物反應(yīng)器中的肝細(xì)胞與患者的血液通過半透膜進(jìn)行物質(zhì)交換生物型人工肝技術(shù)采用培養(yǎng)于生物反應(yīng)器中的肝細(xì)胞與患者的血液通過半透膜進(jìn)行物質(zhì)交換，能較全面地代償肝細(xì)胞功能。學(xué)術(shù)術(shù)語來源學(xué)術(shù)術(shù)語來源以膠原水凝膠為支架構(gòu)建肝細(xì)胞三維培養(yǎng)系統(tǒng)以膠原水凝膠為支架構(gòu)建肝細(xì)胞三維培養(yǎng)系統(tǒng)文章亮點(diǎn)：文章亮點(diǎn)：1實(shí)驗(yàn)以預(yù)混肝細(xì)胞生長因子的膠原水凝膠為支架構(gòu)建原代肝細(xì)胞三維培養(yǎng)系統(tǒng)，其中膠原水凝膠作為細(xì)胞外基質(zhì)，肝細(xì)胞生長因子促進(jìn)細(xì)胞成活

2、與增殖，更充分模擬了體內(nèi)肝臟微環(huán)境。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞三維培養(yǎng)2周后仍保持分化狀態(tài)并維持成熟肝細(xì)胞表型，細(xì)胞之間形成緊密連接并呈肝索樣聚集排列的類肝結(jié)構(gòu)，并且細(xì)胞能很好的維持肝臟特異功能，如糖原合成、白蛋白分泌、尿素合成及代謝解毒功能。3實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的三維培養(yǎng)系統(tǒng)有望應(yīng)用于藥物篩選、肝細(xì)胞基礎(chǔ)研究，并有望成為生物人工肝等以肝細(xì)胞為基礎(chǔ)治療肝臟疾病的新方式。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：生物材料；生物材料與藥物控釋；細(xì)胞外基質(zhì)材料；肝細(xì)胞；Ⅰ型膠原；水

3、凝膠；細(xì)胞培養(yǎng)；合成代謝；三維培養(yǎng)；肝臟組織工程；省級基金摘要摘要背景：肝細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)快速失去功能限制了肝細(xì)胞療法的發(fā)展。目的：以膠原水凝膠為支架建立能夠長時(shí)間有效維持肝細(xì)胞功能的肝細(xì)胞三維培養(yǎng)系統(tǒng)。方法：將SD大鼠肝細(xì)胞與預(yù)混肝細(xì)胞生長因子及DMEM的液態(tài)Ⅰ型膠原混合，形成肝細(xì)胞膠原凝膠復(fù)合物，將該復(fù)合物接種至培養(yǎng)板，待形成膠凍狀凝膠后再加培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。通過光學(xué)顯微鏡、蘇木精伊紅染色及透射電子顯微鏡對肝細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征及超微結(jié)構(gòu)進(jìn)

4、行觀察；并通過糖原染色、免疫熒光染色、實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)一步對肝細(xì)胞特異表型及功能進(jìn)行檢測。收集培養(yǎng)上清，檢測細(xì)胞白蛋白及尿素合成能力。結(jié)果與結(jié)論：①肝細(xì)胞膠原水凝膠復(fù)合物形成后，可見肝細(xì)胞呈圓形分布于水凝膠中，培養(yǎng)14d后仍保持肝細(xì)胞形態(tài)并呈類似肝臟結(jié)構(gòu)的肝索樣聚集排列，超微結(jié)構(gòu)觀察顯示肝細(xì)胞之間形成緊密連接。②培養(yǎng)14d后，糖原染色、白蛋白及肝細(xì)胞核因子4α免疫熒光染色呈陽性，證實(shí)肝細(xì)胞具有糖原及白蛋白合成能力并仍具有分化潛能。③三維

5、培養(yǎng)中，肝細(xì)胞的白蛋白及尿素合成能力及分泌水平明顯高于二維培養(yǎng)，且至少能夠在較高水平維持15d。④培養(yǎng)7d后，Albumin、HNF4α、Claudin3、CYP1A1、CYP3A1以及G6P等肝細(xì)胞特異性基因的表達(dá)水平明顯高于二維培養(yǎng)。以上結(jié)果證實(shí)，以膠原水凝膠為支架構(gòu)建的三維培養(yǎng)系統(tǒng)使肝細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上更類似肝臟組織，并能在更長時(shí)間內(nèi)有效的維持肝細(xì)胞合成代謝等各方面功能。中國組織工程研究雜志出版內(nèi)容重點(diǎn)：生物材料；骨生物材料口腔生物材料