藤黃微球菌AD3的阿特拉津降解基因分析與降解特性研究.pdf

1、阿特拉津是一種三嗪類除草劑，用于闊葉類雜草的防除，其生物毒性來自于其分子中的一個氯原子。將阿特拉津完全降解成二氧化碳和水需要六步降解反應，其中降解途徑中第一個酶為阿特拉津氯水解酶(AtzA)或三嗪水解酶(TrzN)，其用途是催化阿特拉津水解脫氯，生成無毒的羥基阿特拉津。 本研究從河北省宣化農(nóng)藥廠的阿特拉津工業(yè)廢水中分離出一株阿特拉津降解細菌藤黃微球菌(Micrococcus luteus)AD3，在前人研究的基礎上，通過AD3

2、菌株的分子雜交，核苷酸序列測定，質(zhì)粒檢測，生物修復等方法對它的降解特性等進行了研究，首先以AD3菌株總DNA為模板，進行分子雜交，結果顯示AD3不具有通常大多數(shù)降解菌株含有的atzA，但具有atzD，說明AD3可能具有trzN和降解途徑的后三個基因。因此，我們以節(jié)桿菌TC1的trzN的基因為參考序列，設計PCR引物，通過PCR擴增，得到trzN基因中心區(qū)片段，并將PCR產(chǎn)物直接測序，通過與TC1菌株的trzN基因中心區(qū)片段做同源性比較，

3、發(fā)現(xiàn)AD3菌株和TC1菌株的trzN核心區(qū)的同源性達到100％，同時還參照ADP菌株的atzB,atzC，atzD，atzE, atzF設計引物，通過對atzB,atzC的序列結果和atzD，atzE,atzF的PCR結果分析表明，AD3具有降解阿特拉津的全套基因，能夠完全降解阿特拉津。通過對其生長特性的試驗表明，它的降解性能大大超過文獻報道的假單胞菌ADP，并且AD3菌株利用碳源和氮源的物質(zhì)廣泛，具有較好的應用價值。質(zhì)粒分析顯示AD3