阿特拉津降解菌AG1、ADG1和SA1的分離鑒定及其降解特性的研究.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文阿特拉津降解菌AG1、ADG1和SA1的分離鑒定及其降解特性的研究姓名：代先祝申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：李順鵬20050701試的碳氮比中2／1(摩爾比)時(shí)生長最好；最適生長溫度為37℃；最適生長pH值范圍7—8；靜息細(xì)胞在10℃一42℃范圍和pH值4i0范圍內(nèi)都能有效地降解阿特拉津：SAl只能利用阿特拉津、西瑪津和氰尿酸為唯一氮源生長；以阿特拉津?yàn)槲ㄒ惶荚吹瓷L時(shí)，降解終產(chǎn)物為氰尿酸，但葡萄糖

2、存在時(shí)，降解產(chǎn)生的氰尿酸只在短時(shí)間內(nèi)累積，很快就被降解，最后在培養(yǎng)液中檢測不到氰尿酸。三、降解菌降解基因的研究降解菌AGI和ADGl降解基因都是f庀Ⅳ和atzBC的組合，與報(bào)道的其它菌中相應(yīng)序列相似性分別為100％、100％、99％；采用PCR擴(kuò)增從AGl中可以擴(kuò)增到f，刪全基因序列，與C190的f，zⅣ序列相似性為99％，但從AD01中不能擴(kuò)增到r，州全基因序列，可能是基因中與引物對應(yīng)部分堿基發(fā)生了突變導(dǎo)致的。AGl帶有兩個(gè)大質(zhì)粒，通

3、過Southem雜交將f，州和atzB都定位于其中較大的一個(gè)質(zhì)粒(PAGI)上。采用堿裂解法在ADGl中沒有檢測到質(zhì)粒。AGI和ADGl的部分菌體降解性狀會(huì)在傳代過程中丟失，這些降解性狀缺失菌株不能水解阿特拉津脫氯，PCR檢測AGl的突變株，發(fā)現(xiàn)它們丟失了trzN基因，但質(zhì)粒和atzBC基因未丟失，但他們也不能降解羥基阿特拉津，可能f力Ⅳ基因從質(zhì)粒上缺失導(dǎo)致atzBC基因不能表達(dá)。以SAl總DNA為模板能擴(kuò)增到降解基因atzABCD和I

4、s』071的tnpA基因片斷；采用堿裂解法在SAI中沒有檢測到質(zhì)粒；SAI在傳代過程中也會(huì)有部分菌體丟失降解性狀，與AGI不同的是這些降解性狀缺失菌株同時(shí)丟失了基因atzABCD和Is』071，表明與ADP一樣，SAI中降解基因atzABCD和【S』077也是相關(guān)聯(lián)的。四、菌株AGI在土壤中降解阿特拉津效果及影響因素的研究在阿特拉津濃度約為50“gg“干土的黃棕壤(TRl)、潮土(TR2)和紅壤(TR3)接種15106CFUg。干土的A

5、GI，10天后接菌土壤中阿特拉津濃度都遠(yuǎn)低于對照土壤。表明AGI能在不同的土壤中有效降解阿特拉津，但降解速率受土壤性質(zhì)影響。紅壤的pH值低于AGI的生長pH值，但在AGI的靜息細(xì)胞降解pH值范圍內(nèi)，AGI在該土壤中仍能降解阿特拉津，由此可推測AGl能在不生長的情況下在土壤中發(fā)揮降解作用。AGl降解完土壤中的阿特拉津后，仍然可以長時(shí)間保持較高的降解活力，低水含量和低pH值土壤中降解活力下降得較快。土壤水分含量對降解效果影響較大，大于2O％