ⅰ.pparγ與小分子以及相關(guān)受體蛋白的相互作用研究ⅱ.sars冠狀病毒刺突蛋白免疫片段的熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)研究

1、中國海洋大學(xué)博士學(xué)位論文Ⅰ.PPARγ與小分子以及相關(guān)受體蛋白的相互作用研究Ⅱ.SARS冠狀病毒刺突蛋白免疫片段的熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)研究姓名：余長纓申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：海洋生物學(xué)指導(dǎo)教師：戴繼勛;沈旭20040601I I ．S A R S 冠狀病毒刺突蛋白免疫片段的熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)研究嚴(yán)重急性呼吸綜合癥( S e v e r e A c u t e R e s p i r a t o r yS y n d r o m e ，S A R

2、S ) 是一種嚴(yán)重的呼吸道疾病，S A R S 冠狀病毒被確認(rèn)為該疾病的元兇，S A R S 冠狀病毒的刺突蛋白做為病毒的外層包被蛋白對(duì)于病毒進(jìn)攻人體細(xì)胞具有非常重要的作用。本論文中，對(duì)S A R S 冠狀病毒刺突蛋白的免疫片段S 1 b ( A l a 2 5 1 - - H i s 6 4 1 1 進(jìn)行了表達(dá)純化以及生化性質(zhì)的討論，為研究S A R S 刺突蛋白的結(jié)構(gòu)和功能特性提供更多的信息。含有該片段基因整合在p E T 3 2

3、c 載體中在大腸桿菌中獲得充分高表達(dá)，帶有H i s 等標(biāo)簽的融合蛋白利用柱上酶切法和分子篩層析進(jìn)行了純化。純化后的S l b 蛋白通過圓二色性( C D ) 、色氨酸熒光分析和停流C D 光譜分析等方法研究了其熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)特性。熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該片段在熱變性過程中表面活化能為1 6 ．3 ±0 ．2 K c a l ．m o l ～，而熱變性轉(zhuǎn)化溫度( T 。) 為5 2 ．5 ±0 ．4 。C ；圓二色性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)熱

4、變性過程中沒有二級(jí)結(jié)構(gòu)的變化，說明該片段的二級(jí)結(jié)構(gòu)骨架具有相對(duì)的熱穩(wěn)定性。鹽酸胍作為變性劑對(duì)于S l b 影響較大，C D 和熒光實(shí)驗(yàn)均證實(shí)鹽酸胍變性濃度( C 。) 約為2 ．3 8 M 。停流實(shí)驗(yàn)分別監(jiān)測(cè)了該蛋白片段的鹽酸胍化學(xué)變性和復(fù)性過程，并首次利用動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)得到的馳豫時(shí)間( T ) 計(jì)算了變性濃度C 。，這成為了研究穩(wěn)態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種形式下蛋自變性過程的紐帶。同時(shí)對(duì)于S A R S 冠狀病毒S l b 片段的結(jié)構(gòu)我們還進(jìn)行了同源模