漢族瘢痕疙瘩家系標本保存及15q22.3123和18q21.1易感基因定位研究

1、第一軍醫(yī)大學2 0 0 3 級博士學位論文V , 9 7 S 0 0 ；漢族瘢痕疙瘩家系標本保存及1 5 q 2 2 ．3 l 一2 3 和1 8 q 2 1 ．I易感基因定位研究S t u d yo n s a m p l e s t o r a g ea n d g e n e t i c m a p p i n g o f s u s c e p t i b i l i t yg e n e o n c h r o m o s o

2、 m e s 1 5 q 2 2 ．3 1 —2 3 & 1 8 q 2 1 ．1i na H a n C h i n e s ek e l o i d p e d i g r e e課題來源：廣東省名醫(yī)工程( 2 0 0 4 )專 業(yè) 名 稱學位申請人指 導 教 師答辯委員會主席答辯委員會成員論文評間人整形外科學嚴欣高建華教授李世榮教授于國中教授羅深秋教授羅錦輝教授張金明教授李世榮教授于國中教授羅深秋教授2 0 0 6 年5

3、月2 0 日廣州摘 要短串聯(lián)重復序Y O ( S T R ) 廣泛存在于真核生物基因組中，是具有高度多念性的新一代遺傳標記。通過家系分析和分子生物學方法，進行連鎖分析和相關(guān)分析，尋找與疾病高度相關(guān)S T R 位點，是目前定位疾病易感基因的主要方法。經(jīng)過課題組成員的共同努力，我們采集了一個較完整的瘢痕疙瘩家系的l 臨床資料和外周血標本，運用E B V 轉(zhuǎn)化技術(shù)建立了其中具有顯著遺傳學意義個體的永生化細胞庫，并針對人S M A D 蛋白基因

4、所在的1 5 q 2 2 ．3 1 - q 2 3 及1 8 q 2 1 ．1 染色體區(qū)域，選擇7 個微衛(wèi)星標記，采用S T R 連鎖分析方法對此家系疾病易感基因的定位進行了初步研究。材料與方法l 、采集中國東北地區(qū)1 個5 代瘢痕疙瘩發(fā)病家系的l 臨床資料及5 6 人的外周血標本，其中確診患者1 l 例( 男5 例、女6 例) ，并進行初步的遺傳學分析。2 、瘢痕疙瘩家系外周血淋巴細胞永生化細胞庫的建立選擇此家系中先證者家庭及唯一四代

5、家庭共四代2 8 人的外周血樣本，先后應用新鮮血法和凍存血法來建立淋巴細胞永生化細胞庫。新鮮血法：在無菌條件下，從外周血樣本中分離出淋巴細胞，加入E B V 懸液、C y A 等，置于3 7 。C ，5 ％C 0 2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。轉(zhuǎn)化成功后經(jīng)轉(zhuǎn)瓶、傳代培養(yǎng)，4 —5 代后進行凍存建株。3 個月后對凍存細胞株進行復蘇，常規(guī)培養(yǎng)、傳代。凍存血法：所有血樣均經(jīng)液氮凍存，1 月后抽取6 例凍存血標本，復蘇后加入E B V 懸液進行轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、