中國漢族人瘢痕疙瘩易感基因相關性研究.pdf

1、研究背景:瘢痕疙瘩是一種超常增生的致密的纖維組織,通常在皮膚損傷愈合后發(fā)生,而且僅發(fā)生在人類身上。瘢痕疙瘩由過多的細胞外基質的累積特別是膠原蛋白的大量形成造成的,它超出了原來傷口的范圍,侵犯到周圍正常的皮膚組織中,造成患者外觀和功能上的不適,更甚于導致心理和生理的疾病。瘢痕疙瘩通常是散發(fā)的,盡管它影響了所有的種族,但是在非裔和亞裔等有色人種中顯示了較高的發(fā)病率。黑種人比白種人患此種疾病的風險高出近15倍。瘢痕疙瘩的病因目前還沒有確定。遺

2、傳因素被認為是導致瘢痕疙瘩發(fā)病的重要原因,瘢痕體質者具有一定的家族遺傳傾向。到目前為止,瘢痕疙瘩的遺傳方式尚無定論。因此明確其遺傳學發(fā)病機制,確定該病的易感基因無論對基礎理論研究還是疾病治療都具有非常積極的指導意義。國外學者通過對不同的瘢痕疙瘩家系調查分別得出該病為常染色體顯性遺傳、常染色體隱性遺傳等不同的遺傳模式,大部分學者趨向于認為瘢痕疙瘩為常染色體顯性遺傳,但并非簡單的孟德爾式單基因遺傳,還有學者認為該病基本符合常染色體顯性遺傳伴

3、臨床不完全外顯及可變的表現(xiàn)度。
　　近年來,有關瘢痕疙瘩的遺傳學研究多集中在瘢痕疙瘩相關基因的表達水平上,其中較多的集中在瘢痕疙瘩與P53基因、FAS基因、c-myc、c-fos、ras基因、Bcl-2家族、ICE家族等各種凋亡基因以及瘢痕疙瘩與HLA及細胞因子TGF–β、IL、TGF–β/Smad信號通路等相關性研究,但也只是停留在探索性研究階段,迄今為止尚未有統(tǒng)一的定論。
　　人類基因組計劃(HGP)和國際單體型圖計劃(

4、HapMap)的完成,為復雜疾病的易感基因研究提供了重要的生物信息和分析工具。高通量基因分型技術的迅速發(fā)展和分型成本的不斷降低,使得復雜疾病易感基因的全基因組關聯(lián)分析(genome-wideassociationstudy,GWAS)研究成為可能。GWAS就是利用關聯(lián)分析原理,通過比較病例和對照等位基因頻率之間的差異,從全基因組范圍內的遺傳變異中,篩選出與疾病性狀關聯(lián)的單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphi

5、sm,SNPs),再根據(jù)其在基因組中的位置和連鎖不平衡推測可能的疾病易感基因,并對這些基因和疾病的關系進行驗證及相關功能研究。GWAS被認為是目前科學界公認的最為有效的搜尋重大疾病易感基因的研究方法之一,被《科學》雜志(Science)評選為2007年世界十大科學進展之首。到目前為止,國際上只有一篇在日本人群進行瘢痕疙瘩GWAS研究的文章在2010年NatureGenetics雜志(影響因子:30.259)發(fā)表,發(fā)現(xiàn)了四個與瘢痕疙瘩易感

6、性顯著相關聯(lián)的SNPs變化:rs873549、rs940187、rs1511412和rs8032158,其中rs8032158位于染色體15q21.3上的NEDD4基因上。由于瘢痕疙瘩的發(fā)病存在顯著的種族及種群差異性,為了驗證中國人群瘢痕疙瘩易感基因位點是否也分布在上述染色體區(qū)域,本研究在中國漢族人群中應用GWAS方法對瘢痕疙瘩的易感基因位點進行基因分型及驗證研究,以期發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩的易感基因,為進一步闡明瘢痕疙瘩的發(fā)病機制及臨床防治奠定

7、基礎。
　　目的:1.依據(jù)亞洲人群(日本人)瘢痕疙瘩全基因組關聯(lián)研究(GWAS)結果并結合加勒比海非裔人等瘢痕疙瘩易感基因SNPs數(shù)據(jù)選取有意義的12個SNPs,在714例中國瘢痕疙瘩病例和2944例正常對照中驗證并尋找中國漢族人瘢痕疙瘩易感基因和位點。
　　2.研究候選易感基因NEDD4-1在瘢痕疙瘩組織中的表達。
　　方法:1.利用SequenomMassarray系統(tǒng),選擇最有意義的12個SNPs位點在中國漢族人

8、群中進行瘢痕疙瘩候選易感基因關聯(lián)研究驗證(714例瘢痕疙瘩病例和2944例正常對照),使用以性別和樣本組作為共變量的Logistic回歸進行樣本的聯(lián)合分析。
　　2.運用RT-PCR和WesternBlot方法,從mRNA和蛋白水平,對中國漢族瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、正常皮膚組織中NEDD4-1基因的表達水平進行比較研究。
　　結果:1.位于15q21.3區(qū)域SNP位點(rs2271289)在驗證人群中顯示有意義(P<0.05

9、),并與瘢痕疙瘩高度關聯(lián)(rs2271289:OR=0.6564,P=1.02E-11)。rs2271289位于NEDD4基因上。
　　2.位于1q41區(qū)域SNP位點(rs873549和rs1442440)在驗證人群中顯示有意義(P<0.05),并與瘢痕疙瘩高度關聯(lián)(rs873549:OR=2.05,95％CI:1.819-2.305,P=3.03E-33,Pcombined=9.09E-33;rs1442440:OR=0.56,

10、95%CI:0.49-0.64,P=9.58E-18,Pcombined=2.87E-17)。
　　3.NEDD4-1基因在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮膚中的表達無明顯差異(P>0.05)。
　　結論:1.三個易感位點在中國漢族人群中都被驗證出來。研究結果為中國漢族瘢痕疙瘩遺傳基礎提出了新的見解,另外揭示中國漢族瘢痕疙瘩患者和日本患者之間不僅存在共同的遺傳發(fā)病機理,還存在遺傳異質性。對于1q41區(qū)域易感位點及NEDD4基因繼