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1、- 1 -熱點(diǎn) 熱點(diǎn) 15 15 現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題 現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題1.(2018·安徽蕪湖高三 5 月模擬)科研工作者欲將某抗鹽基因?qū)朐|(zhì)體培育抗鹽大豆。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)為獲得大量抗鹽基因,可通過(guò)________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增,該技術(shù)需要 2 種引物的原因是________________________。(2)導(dǎo)入抗鹽基因的葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體應(yīng)放在________(填“高滲”“等滲”或“低滲”)溶液中。原生質(zhì)體需再生
2、出________,經(jīng)脫分化獲得________,再分化獲得抗鹽植株,該過(guò)程的原理是________________。(3)利用帶有標(biāo)記的抗鹽基因探針與______________進(jìn)行分子雜交,檢測(cè)抗鹽基因在受體細(xì)胞中是否轉(zhuǎn)錄。個(gè)體水平上的檢測(cè)抗鹽基因是否成功表達(dá)的方法是________________________。答案 (1)PCR DNA 雙鏈反向平行,復(fù)制時(shí)兩條鏈均為模板(2)等滲 細(xì)胞壁 愈傷組織 植物細(xì)胞的全能性(3)從轉(zhuǎn)
3、基因植株提取的 RNA 澆灌一定濃度的鹽溶液(或移栽到高鹽環(huán)境中進(jìn)行實(shí)驗(yàn))解析 (1)擴(kuò)增目的基因,可采用 PCR 技術(shù)。由于 DNA 雙鏈反向平行,復(fù)制時(shí)兩條鏈均為模板,因此 PCR 技術(shù)中需要兩種引物。(2)由于原生質(zhì)體無(wú)細(xì)胞壁,將其放入高滲溶液中會(huì)失水,低滲溶液中會(huì)吸水漲破,因此導(dǎo)入抗鹽基因的葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體應(yīng)放在等滲溶液中。將原生質(zhì)體培養(yǎng)成植株,需要再生出新的細(xì)胞壁,然后脫分化獲得愈傷組織,再分化才能獲得抗鹽植株。脫分化、再分化
4、的過(guò)程稱(chēng)為植物組織培養(yǎng),其原理是植物細(xì)胞的全能性。(3)檢測(cè)抗鹽基因是否轉(zhuǎn)錄,采用分子雜交技術(shù),即利用帶有標(biāo)記的抗鹽基因探針與從轉(zhuǎn)基因植株提取的 RNA 進(jìn)行分子雜交,如能形成雜交帶,則說(shuō)明抗鹽基因在受體細(xì)胞中已轉(zhuǎn)錄。個(gè)體水平上檢測(cè)抗鹽基因是否成功表達(dá),需要在個(gè)體水平上檢測(cè)其是否能抗高鹽環(huán)境,即給該個(gè)體澆灌一定濃度的鹽溶液或移栽到高鹽環(huán)境中進(jìn)行實(shí)驗(yàn),觀察它的生長(zhǎng)情況。2.(2018·河南洛陽(yáng)一模)蘇云金桿菌是一種對(duì)昆蟲(chóng)有致病作
5、用的細(xì)菌,其殺蟲(chóng)活性物質(zhì)主要是一類(lèi)伴孢晶體蛋白。某種蘇云金桿菌產(chǎn)生的伴孢晶體蛋白含兩條肽鏈,共由 126 個(gè)氨基酸組成,經(jīng)昆蟲(chóng)腸液消化成毒性肽。我國(guó)農(nóng)科院采用逆轉(zhuǎn)錄 PCR 技術(shù)獲取大量伴孢晶體蛋白基因,然后將目的基因通過(guò)載體導(dǎo)入到植物體內(nèi),培育出抗蟲(chóng)農(nóng)作物。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1)PCR 技術(shù)擴(kuò)增目的基因,每一循環(huán)包括變性、________、________三步,一個(gè)目的基因通過(guò) PCR 技術(shù)擴(kuò)增,循環(huán) n 次,需要________對(duì)引
6、物。(2)若要使目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá),需要通過(guò)載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,原因是____________________________(答出兩點(diǎn)即可)。(3)下圖表示蘇云金桿菌中質(zhì)粒和目的基因所在的 DNA 中相關(guān)的限制酶的切割位點(diǎn),在- 3 -素的植物流程如圖所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。限制酶 識(shí)別序列和切割位點(diǎn)EcoRⅠ G↓ATTCBamHⅠ G↓ATCCSmaⅠ CCC↓GGGApaⅠ GGGCC↓C(1)首先獲取的動(dòng)
7、物干擾素基因稱(chēng)為_(kāi)_______。利用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時(shí),設(shè)計(jì)引物序列的主要依據(jù)是__________________________。(2)過(guò)程①中剪切質(zhì)粒和目的基因時(shí)所需要的工具酶是________和________。酶切后,目的基因形成的兩個(gè)黏性末端序列________。(3)過(guò)程②中將重組質(zhì)粒導(dǎo)入根瘤農(nóng)桿菌時(shí),常用________處理根瘤農(nóng)桿菌,其目的是________________________________
8、________。(4)在培育愈傷組織的固體培養(yǎng)基中,除了無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、瓊脂、植物激素外,還需添加卡那霉素??敲顾氐淖饔檬莀___________________。在分子水平上通常采用____________技術(shù)檢測(cè)干擾素基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。答案 (1)目的基因 干擾素基因兩端的部分核苷酸序列(2)BamHⅠ EcoRⅠ 不相同(3)Ca2+ 使其成為感受態(tài)細(xì)胞,使質(zhì)粒更容易進(jìn)入細(xì)胞(4)篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的植物細(xì)胞 DNA
9、 分子雜交解析 (1)在基因工程中,獲取的動(dòng)物干擾素基因稱(chēng)為目的基因。利用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時(shí),需要依據(jù)干擾素基因兩端的部分核苷酸序列設(shè)計(jì)引物序列。(2)題圖顯示:干擾素基因中存在 SmaⅠ的識(shí)別位點(diǎn),若使用 SmaⅠ切割質(zhì)粒和外源DNA,則會(huì)破壞干擾素基因,因此過(guò)程①所示的構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)不能使用 SmaⅠ切割。BamHⅠ和 EcoRⅠ的識(shí)別位點(diǎn)位于目的基因的兩側(cè),質(zhì)粒上也有 BamHⅠ和 EcoRⅠ的識(shí)別位點(diǎn),因此,過(guò)程①中
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