木質(zhì)素降解菌的篩選及其產(chǎn)酶性質(zhì)的研究.pdf

1、本文以探索高效的木質(zhì)素降解為宗旨，對木質(zhì)素降解菌株的分離、篩選、產(chǎn)酶特性及對天然木質(zhì)素的降解進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究和分析，結(jié)果如下： 1.從本實驗室選育的12株菌株中篩選得到一株高效木質(zhì)素降解菌，編號為m-6。通過液體產(chǎn)酶培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)該菌株主要分泌胞外漆酶，漆酶的最高活力達(dá)到127.78U/L：對堿溶木質(zhì)素的降解可達(dá)到61.25％；固態(tài)產(chǎn)酶培養(yǎng)后，漆酶的最高活力達(dá)到143.06U/L，第60天時，稻草粉的失重可達(dá)72.13％。該菌

2、產(chǎn)酶最適pH為4，最適溫度32℃。 2.研究W/O十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)微乳液體系和HAc-NaAc緩沖液體系中，m-6菌株固態(tài)發(fā)酵后產(chǎn)生的胞外木質(zhì)素降解酶漆酶(Lac)、木質(zhì)素過氧化物酶(Lip)、錳過氧化物酶(Mnp)酶促反應(yīng)的最佳反應(yīng)條件。通過對Lip(以2，2’一連氮一二(3一乙苯基并噻唑一磺酸)為底物)、Mnp(以MnSO4為底物)和Lac(以藜蘆醇為底物)3種木質(zhì)素降解酶在W/O型CTAB微乳液體系和HA

3、c—NaAc緩沖液體系中的酶活分別進(jìn)行測定，以研究不同溫度，pH和底物濃度對酶促反應(yīng)進(jìn)行的影響，找到最佳反應(yīng)條件，并比較兩種反應(yīng)體系下的酶活。在W/O型CTAB微乳液體系中，Lip、Mnp和Lac3種酶的酶促反應(yīng)的最佳反應(yīng)條件為：溫度37℃，pH分別為4.5，4.5和3.5；在HAc—NaAc緩沖液體系中，3種酶的酶促反應(yīng)的最佳反應(yīng)條件為：溫度37℃，pH分別為5.0，5.0和3.0。在兩種反應(yīng)體系中最佳反應(yīng)底物的濃度相同，即藜蘆醇、M

4、nSO4、2，2’-連氮-二(3一乙苯基并噻唑一磺酸)濃度分別為0.053，0.116，0.492 mmol/L。在W/O型CTAB微乳液中Lip和Mnp酶活比其在HAc-NaAc緩沖液體系中分別提高了81.45％和36.75％，但Lac酶活卻減少了2.914倍。3種木質(zhì)素降解酶在W/0型CTAB微乳液體系和HAc-NaAc緩沖液體系的最佳反應(yīng)條件有所差別，并且W/O型CTAB微乳液體系有利于Lip和Mnp酶促反應(yīng)的進(jìn)行， 3

5、.探討了采用木質(zhì)素降解酶互補的產(chǎn)酶組合培養(yǎng)和堿溶木質(zhì)素降解相結(jié)合的方法，對實驗室保存和分離的8株木質(zhì)素降解菌株進(jìn)行組合培養(yǎng)試驗，結(jié)果表明，編號為m-6，55，m-8三株菌組合時，提高了整體產(chǎn)漆酶量，最高活力達(dá)到了808.31U/L，比單菌株m-6產(chǎn)酶提高了6.32倍。該組合菌的最適產(chǎn)酶pH為5.5，最適產(chǎn)酶溫度為32℃。在對其產(chǎn)酶特性的研究中發(fā)現(xiàn)，藜蘆醇為5mmol/L、吐溫-80為0.01％和愈創(chuàng)木酚為3mmol/L時，對組合菌株分泌