漆酶高產菌株選育及其降解秸稈木質素機理研究.pdf

1、本試驗選擇以擔子綱白腐真菌（Pleurotus ostreatus WY-01）為出發(fā)菌株，利用N+注入技術對其進行誘變選育，獲得一株高產漆酶誘變菌株WY-02。運用正交實驗設計對其固體發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進行優(yōu)化，采用紅外光譜法探討誘變菌株WY-02對油菜秸稈中木質素的生物降解機制。
　　 對白腐真菌（Pleurotus ostreatus WY-01）進行N+注入的結果表明：當N+注入劑量為80×2.6×1014ions/c

2、㎡時，孢子存活率回升到26％，并且在該劑量下孢子正突變率達到最大，因此確定80×2.6×1014ions/c㎡為最佳N+注入劑量。經過N+反復的注入誘變篩選，突變高產菌株WY-02的漆酶活力由出發(fā)菌（Pleurotus ostreatus WY-01）的最高峰值酶活4.17U/g提高到12.5U/g。突變菌株WY-02經傳5代培養(yǎng)，產酶性能穩(wěn)定。
　　 采用單因素試驗和正交試驗對突變菌株WY-02產漆酶的固體培養(yǎng)基進行優(yōu)化，確定

3、突變菌株的最佳產酶培養(yǎng)基為：葡萄糖10g/L，酒石酸銨0.2 g/L，硫酸銅0.015g/L。優(yōu)化后培養(yǎng)基最適發(fā)酵條件：發(fā)酵溫度為28℃，培養(yǎng)基起始pH為4.5，接種量為每15g油菜秸稈粉3個菌塞（（）12mm），誘導劑用1mmol/L ABTS。經過上述產酶條件的優(yōu)化，突變菌株WY-02的產酶峰值可達15.3 U/g。
　　 對誘變菌株降解后的油菜秸稈中木質素官能團的變化采用紅外光譜法進行分析，探索誘變菌株對油菜秸稈中木質素的

4、生物降解機制。從圖譜可以看出，1635cm-1處表征木質素中與苯環(huán)相連的C=O伸縮振動明顯減弱；苯環(huán)的特征吸收峰（1515cm-1）由尖峰變?yōu)樾〉募绶?；表征木質素中CH2變形振動的吸收峰（1460cm-1）變得不明顯；1324cm-1處的吸收峰明顯增強；具有木質素的特征苯環(huán)取代物，其譜峰分別為1241cm-1（紫丁香基的C-O）和1057cm-1（愈創(chuàng)木基的O-H）處的振動減弱。從以上分析可以看出，油菜秸稈經誘變菌株降解，其木質素結構發(fā)