RNF8基因敲除對(duì)小鼠耳蝸老化機(jī)制影響的研究.pdf

1、目的： RNF8是一種泛素連接酶E3,在DNA損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用，參與細(xì)胞凋亡、衰老、突變反應(yīng)和神經(jīng)退行性變，腫瘤的發(fā)生。本研究通過觀察不同月齡RNF8基因敲除型（KO）與野生型（WT）小鼠之間耳蝸毛細(xì)胞、血管紋、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量、密度、厚度、損傷定位等變化，探討RNF8在DNA損傷修復(fù)中的作用及RNF8缺失后小鼠耳蝸主要結(jié)構(gòu)的老化機(jī)制，為老年性耳聾病理和治療提供依據(jù)。另對(duì)小鼠耳蝸取材和包埋技術(shù)進(jìn)行了改良。
　　方法：

2、通過配對(duì)繁殖獲取基因敲除小鼠和同窩野生對(duì)照。至8周齡、16周齡，32周齡分組。用小鼠耳蝸取材和包埋改良技術(shù)進(jìn)行組織切片，HE、CV染色觀察耳蝸毛細(xì)胞、血管紋、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞細(xì)胞密度、數(shù)量、厚度的變化；免疫熒光γ-H2AX染色；免疫組化8-oHdG標(biāo)記DNA損傷的程度及表達(dá)量；脂褐素、β-半乳糖苷酶染色檢測(cè)受損細(xì)胞衰老。
　　結(jié)果：1.小鼠耳蝸改良取材技術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)間提高72.4％，完好率提高41.4％。切片完好率37.2％。2.

3、HE、CV染色發(fā)現(xiàn)，同齡KO組比WT組毛細(xì)胞改變明顯。血管紋三層出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)量減少，空泡，分離、斷裂。螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺失明顯，嚴(yán)重裂隙。3.耳蝸增齡性變化發(fā)現(xiàn)，RNF8 KO小鼠耳蝸毛細(xì)胞、血管紋、螺旋神經(jīng)節(jié)增齡性改變更加明顯，免疫熒光γ-H2AX染色顯示損傷的細(xì)胞H2AX磷酸化反應(yīng)。4.小鼠耳蝸老化改變，KO組β-半乳糖苷酶染色發(fā)現(xiàn)血管紋隨增齡性改變32周齡為著，脂褐素染色發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核周圍棕褐色淡染。(P＜0.05)
　　結(jié)論：改良