微生物實驗室菌種管理規(guī)程審核

1、取 代 新文件 新文件文件發(fā)放號 文件發(fā)放號涉及部門： 涉及部門：質(zhì)監(jiān)科 質(zhì)監(jiān)科質(zhì)檢科 質(zhì)檢科1、目 、目 的： 的：規(guī)范微生物試驗用菌種的管理，確保菌種的有效使用。2、適用范圍： 、適用范圍：微生物試驗用菌種的管理。3、責(zé) 、責(zé) 任 者： 者：質(zhì)檢科負(fù)責(zé)人、微生物試驗人員、菌種管理人員4、正 、正 文： 文：4.1 概念a、標(biāo)準(zhǔn)菌株：由國內(nèi)或國際菌種保藏機(jī)構(gòu)保藏的，遺傳學(xué)特性得到確認(rèn)和保證并可追溯的菌株。b、標(biāo)準(zhǔn)儲備

2、菌株：由標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)一次傳代得到的培養(yǎng)物。c、商業(yè)派生菌株：由供應(yīng)商提供的所有特性與標(biāo)準(zhǔn)菌株等效的菌株。d、工作菌株：由標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株經(jīng)傳代得到的培養(yǎng)物。細(xì)菌 2～8℃ 每一個月移植一次放線菌 2～8℃ 每 2-4 個月 移植一次酵母菌 2～8℃ 每 2 個月移植一次芽孢桿菌 2～8℃ 每 3 個月移植一次霉菌 2～8℃ 每 3 個月移植一次4.4.2 傳代時使用須核對名稱、編號，傳代代數(shù)及日期，所用培養(yǎng)基傳代和接種規(guī)程4.4.2.1 控制

3、傳代次數(shù)，傳代次數(shù)越多，突變的幾率越大，因此要盡量少傳代；根據(jù)菌種特性和實際保存情況，最多傳代不超過 5 代，超過此次數(shù)，應(yīng)加熱滅活，菌種有異常情況或有雜菌生長，則應(yīng)隨時更代。4.4.2.2 菌種的傳代應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行。4.4.2.3 在規(guī)定的保存期內(nèi),取 5 代以內(nèi)的菌種管（瓊脂培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)物） ，取其中 1 支重復(fù)接種斜面培養(yǎng)基，制備下一代工作菌種用于傳代。4.4.3 傳代和接種規(guī)程4.4.3.1 先點燃酒精燈，在火焰旁的上部

4、空間操作，燒灼接種環(huán)。4.4.3.2 再將原有的菌種斜面培養(yǎng)基（簡稱菌種管）與待接種的新鮮斜面培養(yǎng)基（簡稱接種管） ，持在左手拇指、食指及中指之間，要注意能清楚地觀察到斜面，菌種管在前，接種管在后，應(yīng)斜持試管呈 45°角，使試管內(nèi)斜面向上，兩試管口平齊，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸濕培養(yǎng)基表面。4.4.3.3 首先，以右手在火焰旁轉(zhuǎn)動兩管的棉塞，以便接種時易于拔取。再以右手持接種環(huán)的柄端，垂直或稍斜地把接種環(huán)在火焰上燒

5、灼。頂端的環(huán)必須燒紅，以徹底滅菌。環(huán)以上凡接種時可進(jìn)入試管的部分，也應(yīng)通過火焰燒灼。燒灼時，應(yīng)把環(huán)置于酒精燈的外焰上，因外焰的濃度比內(nèi)焰高，容易燒紅。4.4.3.4 使用右手的小指和手掌之間以及無名指與小指之間，在火焰旁分別拔出兩支試管的棉塞，持住，再將試管口在火焰上通過，以殺滅管口可能沾污的細(xì)菌，但勿燒燙。4.4.3.5 先將燒灼過的接種環(huán)插入菌種管內(nèi)，先接觸無菌苔生長的培養(yǎng)基土，如有熔印則表明接種環(huán)未冷卻能燙死細(xì)菌。一定待冷后，再從

6、斜面上挑取菌苔少許，取出時接種環(huán)不能通過火焰，應(yīng)從火焰旁迅速插入接種管，在斜面上輕輕劃線接種。劃線時，一般先由下而上劃一直線后，再由下而上劃曲線。操作過程應(yīng)迅速，勿使菌苔粘至管壁或管口。4.4.3.6 當(dāng)接種完畢，立即將管口通過火焰滅菌，右手到火焰旁塞上棉塞，不要將管口離開火焰旁去迎接右手的棉塞。最后將接種環(huán)燒灼滅菌放置原處，再把可能未塞緊的棉塞塞緊，即可進(jìn)行培養(yǎng)。4.4.3.7 操作過程中，如因不慎使棉塞觸及火焰而著火，卻勿用口吹

7、，須在剛剛著火時迅速塞入試管，因管內(nèi)氧氣不足會很快熄滅。若棉塞外端著火，可用手捏熄。若棉塞燒壞不宜再用，可另取未接種斜面培養(yǎng)基上的滅菌棉塞，代替塞上。4.4.3.8 接種完畢, 大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、沙門菌、生孢梭菌在 30-35℃培養(yǎng) 18-24 小時，白色念珠菌在 23-28℃培養(yǎng) 24-48 小時，黑曲霉在 23-28℃培養(yǎng)（5-7 天） 。4.4.3.9 傳代和接種使用后，應(yīng)填寫菌