微生物實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則

1、微生物實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則,,,影響藥品微生物的檢驗結(jié)果的因素。 1、實驗人員在取樣或試驗過程中污染微生微。 2 、生物學(xué)分析方法本身的誤差。 3 、樣品中或環(huán)境中微生物分布不均勻等因素在藥品檢驗中，為保證微生物試驗數(shù)據(jù)的可靠性和重現(xiàn)性，藥品微生物實驗室必須使用經(jīng)驗證的檢測方法并按良好的實驗室規(guī)范指導(dǎo)試驗。,,藥品微生物實驗室規(guī)范包括以下幾個方面：人員、培養(yǎng)基、菌種、實驗室的布局和運行、設(shè)備、文件、實驗記錄、結(jié)果的

2、判斷等。,人員培訓(xùn)從事藥品微生物試驗工作的人員均要受到教育、培訓(xùn)及具備相關(guān)工作的經(jīng)驗。微生物實驗人員應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專業(yè)知識的教育背景。崗前培訓(xùn) 1 、根據(jù)實驗人員的崗位及職責(zé)對其進(jìn)行相應(yīng)的培訓(xùn) 2、工作所必需的設(shè)備操作的培訓(xùn) 3、微生物檢驗技術(shù)的培訓(xùn) 4、實驗室生物安全等方面的培訓(xùn) 經(jīng)考核合格后方可上崗，同時，實驗室應(yīng)制定所有級別實驗人員的繼續(xù)教育計劃。,,微生物實驗室管理人員的培訓(xùn),1、微生物實驗室管理人

3、員培訓(xùn) 包括：管理技能、實驗室安全、試驗按排、預(yù) 算、實驗室研究、實驗結(jié)果評估和數(shù)據(jù)偏差的調(diào)查及技術(shù)報告書寫等。。,微生物實驗室設(shè)施規(guī)劃和運行 微生物實驗室的規(guī)劃和設(shè)計應(yīng)充分考慮到微生物操作規(guī)范和實驗室安全操作的要求。合理的規(guī)劃及活動區(qū)域的劃分將提高微生物實驗室操作的可靠性。,,無 菌 室 布 局 無菌室應(yīng)遠(yuǎn)離交通干道、廁所及污染區(qū)，應(yīng)選上、下水道及其他安裝適宜的位置。無菌室的配套設(shè)施包括洗刷、

4、培養(yǎng)基配制、消毒滅菌、滅菌物品存放和傳輸、培養(yǎng)間、結(jié)果觀察、試驗菌實驗和辦公室等，要集中，減少污染，便于管理和使用。,,微生物實驗室的規(guī)劃 實驗室應(yīng)劃分成潔凈區(qū)、無菌區(qū)和培養(yǎng)區(qū)等。,,藥品微生物檢驗的實驗室應(yīng)符合《中國藥典》無菌檢查、微生物限度檢查試驗環(huán)境的要求 1、獨立設(shè)置的潔凈室（區(qū)）或隔離系統(tǒng) 2 、細(xì)菌（真菌）實驗室 3 、培養(yǎng)室 4 、培養(yǎng)基及實驗用具準(zhǔn)備（包括滅菌）區(qū) 5 、樣品接

5、收和儲藏區(qū)、標(biāo)準(zhǔn)菌株儲藏區(qū) 6 、污染物處理區(qū) 7 、文檔處理區(qū)等輔助區(qū)域 對上述區(qū)域明確標(biāo)識。,控制程序和操作規(guī)程,實驗室應(yīng)建立控制程序和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.,,無菌抽樣特別是無菌生產(chǎn)的產(chǎn)品。應(yīng)有非常嚴(yán)格的無菌防護(hù)措施，避免在抽樣過程中造成微生物的污染。。 隔離器技術(shù)也適于微生物試驗或無菌試驗。隔離器也應(yīng)定期對試驗區(qū)的潔凈度和滅菌效果等功能進(jìn)行驗證。。,,實驗室使用的消毒劑應(yīng)無菌對并定期更換 。

6、 污染微生物的樣品，需進(jìn)一步分析鑒定，均應(yīng)在陽性菌實驗室進(jìn)行。 被檢樣品應(yīng)有傳遞、儲存、處置和識別管理程序。待驗樣品應(yīng)在合適的條件下儲存，應(yīng)明確規(guī)定和記錄儲存條件。 廢棄樣品和有害廢棄物應(yīng)制定處理規(guī)程。,,設(shè)備 實驗室應(yīng)配備與檢驗?zāi)芰凸ぷ髁肯噙m應(yīng)的儀器設(shè)備，其種類和型號、測量范圍和準(zhǔn)確度等應(yīng)滿足檢驗的要求，設(shè)備的安裝和布局應(yīng)便于操作，易于維護(hù)、清潔和校準(zhǔn)。,儀器設(shè)備管理制度和操作規(guī)程,1、實驗室應(yīng)建立完整的儀器設(shè)備管

7、理制度。 為保證設(shè)備處于良好工作狀態(tài)，應(yīng)定期維護(hù)和期間核查，并保存相關(guān)記錄。,,重要的儀器設(shè)備，應(yīng)由專人負(fù)責(zé)，保證其運行狀態(tài)正常和受控，同時應(yīng)有相應(yīng)的備用設(shè)備以保證試驗菌株和微生物培養(yǎng)的連續(xù)性.,,3、對于一些容易污染微生物的儀器設(shè)備 、無菌器具應(yīng)有明確標(biāo)識及標(biāo)準(zhǔn)的操作規(guī)程。,記錄,規(guī)范化管理 記錄檔案將充分證明試驗規(guī)范化和檢驗結(jié)果的真實性。包括以下幾個方面： 1、試驗人員

8、 2、試驗設(shè)備 3、培養(yǎng)基及稀釋液 4 、試驗操作程序,實驗記錄的保存,完整的實驗記錄，以便確認(rèn)數(shù)據(jù)的完整性。,,實驗記錄應(yīng)是原始記錄，為保證實驗記錄的真實性。,微生物實驗室的質(zhì)量控制,制定嚴(yán)格的微生物實驗室質(zhì)量控制程序 1、培養(yǎng)基的質(zhì)量和規(guī)范化操作 2 、菌種的保藏 3 、實驗結(jié)果的正確判斷,培養(yǎng)基的制備和質(zhì)量控制,1 、培養(yǎng)基的制備方法 2 、貯藏條件 3 、質(zhì)量

9、控制試驗,1、培養(yǎng)基制備 ⑴培養(yǎng)基可按處方制備也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的商品化成品培養(yǎng)基，配制時應(yīng)按使用說明上的要求操作確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求。,⑵ 配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水，特殊情況下需要用去離子水和蒸餾水，對熱敏感的培養(yǎng)基應(yīng)用滅菌水和無菌容器配制與分裝，配制時若需加熱助溶應(yīng)注意溫度不要過高.,2、培養(yǎng)基的滅菌 培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應(yīng)按說明書和驗證試驗的參數(shù)，采用不同的方法進(jìn)行滅菌。通常多用　流通蒸汽滅

10、菌　濾膜過濾除菌(過濾器應(yīng)通過驗證),,⑴每批培養(yǎng)基滅菌后均應(yīng)測定PH值 除非經(jīng)驗證表明培養(yǎng)基的PH允許的變化范圍很寬，否則，培養(yǎng)基的PH的范圍不得超過規(guī)定的±0.2。,,⑵制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基檢查?、枪腆w培養(yǎng)基檢查 ⑷氧化還原指示劑檢查 ⑸詳細(xì)記錄,,三、培養(yǎng)基的貯藏 商品化培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)使用說明書上的要求進(jìn)行儲存。 所采用的保藏和運輸條件應(yīng)使培養(yǎng)基最低限度失去水分并提供機

11、械保護(hù)。,,自配培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記培養(yǎng)基的名稱、批號、配置日期并在驗證的條件下儲存。 1、不得儲藏在高壓菌器中。 2 、制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2～25℃、避光的環(huán)境。 3 、保存于密閉容器中，可防止水分流失以延長保存時間。 3 、置冰箱保存一般不超過一周。瓊脂培養(yǎng)基不得在0℃或0℃以下存放。若要延長保存,保存期需經(jīng)驗證保存。,,4、固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化應(yīng)在加熱的水浴中或采用流通蒸汽進(jìn)行，只允許一次，融化的培養(yǎng)基應(yīng)

12、放在45～50℃的水浴中，不得超過8小時。,,四、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 為保證培養(yǎng)基的質(zhì)量對所配置的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制試驗。,,1、實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)質(zhì)控項目有　　 ⑴pH值測定?、七m用性試驗　⑶定期的穩(wěn)定性檢查?、扰囵B(yǎng)基有效期的確定。,,2、當(dāng)一批培養(yǎng)基的質(zhì)控試驗不符合規(guī)定，應(yīng)查找造成不合格的原因，避免問題的重復(fù)出現(xiàn)，處理后應(yīng)重新進(jìn)行質(zhì)控試驗，合格后再使用。,,3、用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基，最好終端滅，否則在使用前應(yīng)進(jìn)行

13、100%的預(yù)培養(yǎng)，避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。,,4、培養(yǎng)基的有效期－是指已通過促生長試驗的培養(yǎng)基在整個有效期內(nèi)均需符合這些相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。 5、對配制培養(yǎng)基的過程作詳細(xì)的記錄。,常用菌種管理和保存,菌種的保存,微生物實驗過程中，實驗菌株可能是最敏感的，因為它們的生物活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件。,菌種的保存和處理,1、實驗室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。,,2、工作菌種的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制

14、，不得超過5代，（從菌種保藏中心獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代）防止過度的傳代造成菌種變異。 工作菌株不可替代標(biāo)準(zhǔn)菌株，標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。 未使用完的菌懸液或被污染、變異的菌種應(yīng)滅菌后丟棄。,菌種的管理 實驗室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度； 1 、朔源 2 、貯藏條件 3 、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件 4 、鑒定 5、銷毀的記錄 6 、其它需要的

15、程序,菌懸液的制備與保存 采用經(jīng)驗證的方法制備菌懸液，除另有規(guī)定外，微生物限度試驗用菌懸液的制備同培養(yǎng)基靈敏度試驗,常 用 菌 種 保 藏 方 法 菌種保藏方法有多種常用的保藏方法 有;瓊脂斜面保藏方法、半固體培養(yǎng)基保藏法及液體培養(yǎng)基低溫保藏方法。,,試驗結(jié)果的判斷 一、影響試驗結(jié)果的因素 ⑴活微生物　　⑵受到外界影響因素較,,實驗結(jié)果分析與評價 1、對實驗結(jié)果進(jìn)行充