臨床微生物實(shí)驗(yàn)室必須規(guī)范化增

1、臨床微生物實(shí)驗(yàn)室必須進(jìn)行規(guī)范化操作,吳茂紅江西省臨床檢驗(yàn)中心,,,人類面臨著微生物的挑戰(zhàn), 要打贏這場(chǎng)戰(zhàn)爭(zhēng)不僅需要有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)生,還需要一支優(yōu)秀的偵察隊(duì)伍—臨床微生物檢驗(yàn)隊(duì)伍。臨床細(xì)菌室規(guī)模和發(fā)展速度與10年或20年前相比已經(jīng)發(fā)生了巨大的變化,但離CLSI(臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所)標(biāo)準(zhǔn)化文件要求還相差很遠(yuǎn),基層細(xì)菌室必須進(jìn)行規(guī)范操作革命才可能應(yīng)對(duì)微生物向人類的挑戰(zhàn),才能適應(yīng)臨床的需要。,標(biāo)本采集

2、 標(biāo)本運(yùn)送 標(biāo)本分離 細(xì)菌鑒定和藥敏 報(bào) 告,,,,,,反 饋,,全程質(zhì)量控制,參考CLSI 文件從以下7方面提出建議,標(biāo)本采集和運(yùn)送的基本規(guī)范；培養(yǎng)前標(biāo)本質(zhì)量檢測(cè)基本規(guī)范；標(biāo)本分離的基本規(guī)范；細(xì)菌鑒定基本規(guī)范；細(xì)菌藥物敏感試驗(yàn)基

3、本規(guī)范；實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證基本規(guī)范；細(xì)菌報(bào)告基本規(guī)范；,一.標(biāo)本采集和運(yùn)送,標(biāo)本采集和運(yùn)送是細(xì)菌培養(yǎng)成功的最最重要的關(guān)鍵!但由于標(biāo)本的采集和運(yùn)送常有護(hù)士或醫(yī)生或病人自己完成,所以也是最不容易做好的事情，而且不知道問(wèn)題所在之處,檢驗(yàn)人員不能直接控制其質(zhì)量 造成的后果是:臨床醫(yī)生最不能接受的問(wèn)題:陽(yáng)性率低、標(biāo)本污染,竹（木）簽棉拭子因棉花含有的脂肪酸及竹或木簽含有樹脂和甲醛等對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制作用而不適于細(xì)菌學(xué)標(biāo)本的采集，建議使用塑

4、料桿的藻酸鹽或滌綸拭子。,棉花纖維 + 竹 /木條,抑 菌 區(qū) 是 因 為 ： 植 物 分 泌 出 來(lái) 的 ： 脂 肪 酸 ； 樹 脂 ； 福 爾 馬 林,氯氣 ， 重金屬與膠水的影響,,美國(guó)與歐洲對(duì)實(shí)驗(yàn)室的新要求,NCCLS M40 標(biāo) 準(zhǔn) DIN 58942 標(biāo) 準(zhǔn),推薦COPAN Amies運(yùn)送培養(yǎng)基,多用途運(yùn)送系統(tǒng) – 需氧 + 厭氧 低 氧 化 的 環(huán) 境 –不會(huì)對(duì)標(biāo)本的微生物造成損害 拭 子 是 深 入 培

5、養(yǎng) 基 中 來(lái) 保 護(hù) 苛 養(yǎng) 菌 與 厭 氧 菌 兩面是以塑料密封,不透水和漏氣 – 減少污染和維持缺氧環(huán)境,ASM 2004,流感嗜血桿菌在三種不同的運(yùn)送基的存活率,1.痰標(biāo)本的采集和運(yùn)送,1. 標(biāo)本采集時(shí)間：用抗生素前2. 采集方法：自然咳痰：必須用請(qǐng)水漱口3次，應(yīng)包括咽喉部，立即用力咳出痰，于滅菌容器中或輸送培養(yǎng)基中。支氣管鏡或支氣管毛刷:由醫(yī)生采集，建議直接種入輸送培養(yǎng)基,2.泌尿標(biāo)本 采集與運(yùn)送,1．采集后的標(biāo)本應(yīng)

6、立即送檢。2．采集時(shí)間：多數(shù)藥物從尿道排泄，所以不管用哪種方法都應(yīng)在用藥前采集。應(yīng)采集早晨第一次的尿。3. 標(biāo)本管不應(yīng)含防腐劑和消毒劑。尿標(biāo)本保存：室溫下保存時(shí)間不得超過(guò)2h（夏季保存時(shí)間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏保存）4℃冷藏保存標(biāo)本時(shí)間不得超過(guò)8h，但應(yīng)注意冷藏保存的標(biāo)本不能用于淋病奈瑟菌培養(yǎng)。,泌尿標(biāo)本,4.采集中段尿時(shí)要先用肥皂清洗女性的外陰和男性的外生殖器包括包皮內(nèi)，然后用清水沖洗。5.長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管的患者應(yīng)在更換新管時(shí)留取尿

7、標(biāo)本。6. 做厭氧培養(yǎng)時(shí)應(yīng)膀胱穿刺采集尿。,3.分泌物,1. 對(duì)開放性病灶的采集：如眼結(jié)膜膿性分泌物、扁桃體、外耳道、手術(shù)后切口、導(dǎo)管治療感染、瘺管內(nèi)膿液、生殖道分泌物等均屬于開放性病灶。應(yīng)先用滅菌生理鹽水沖洗表面污染菌，去除舊的分泌物，用滅菌拭子采集病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的組織送檢。2. 閉鎖性膿腫：如淋巴膿腫、肺膿腫、肝膿腫、腹腔膿腫、盆腔膿腫等，對(duì)封閉的膿腫常采用穿刺或引流的的方法采樣，應(yīng)在用藥前采集，應(yīng)注意膿液的

8、氣味、性狀、顏色注意厭氧菌存在的可能。不能及時(shí)送檢應(yīng)應(yīng)用輸送培養(yǎng)基。,4.便標(biāo)本,1.采集時(shí)間：腹瀉患者應(yīng)在用藥前、急性期采集；沙門菌感染、腸熱癥應(yīng)在2周內(nèi)采；厭氧菌出現(xiàn)癥狀即采集。2.采集方法：自然排便者可用小木棒挑取有膿血和黏液的部位的糞便2-3克，如液狀糞便取絮狀物盛于無(wú)菌的、密封的、不吸水的容器內(nèi)或直接盛于增菌液或保存液中；對(duì)不易獲得糞便患者及幼兒，可用直腸拭子采集后置保存液或輸送培養(yǎng)基中送檢。,便標(biāo)本,注意事項(xiàng)：⑴雖然糞便

9、標(biāo)本本身含很多細(xì)菌但也要用無(wú)菌容器。⑵在患者病情許可的條件下應(yīng)在用藥前采集標(biāo)本。⑶應(yīng)床邊接種或置輸送培養(yǎng)基送檢。⑷厭氧細(xì)菌（難辯梭菌）培養(yǎng)的標(biāo)本應(yīng)盡量減少與空氣接觸。,5.厭培養(yǎng)標(biāo)本,1.痰標(biāo)本的厭氧培養(yǎng)標(biāo)本采集：必須用氣管穿刺法獲得痰液，從口腔吐出的痰標(biāo)本不能用于厭氧培養(yǎng)。2.尿標(biāo)本的厭氧培養(yǎng)標(biāo)本采集：恥骨上膀胱穿刺獲得尿標(biāo)本可用于厭氧菌培養(yǎng) 3．便標(biāo)本厭氧培養(yǎng)標(biāo)本采集： 可用排出的便做厭氧培養(yǎng)但也應(yīng)少與空氣接觸。,環(huán)甲

10、膜穿刺,6.血液及骨髓標(biāo)本,1. 采血時(shí)間：盡可能在用抗生素前，心內(nèi)膜炎例外。2. 采血量：采一次或采一瓶是錯(cuò)誤的，至少應(yīng)采一套2瓶，分需氧和厭氧。2瓶血量不少于16-20ml，先將10ml注入需氧瓶，再將剩余血采血注入?yún)捬跗俊?. 采血方法：不要與血?dú)夂脱翗?biāo)本一起采血；不推薦血入瓶前換針頭；不推薦靜脈血直接入瓶；不宜在靜脈導(dǎo)管或靜脈留置口采血。,為什么強(qiáng)調(diào)血培養(yǎng)抽2~3套？,有研究表明： 單次一套血培養(yǎng)的陽(yáng)

11、性率為65% 雙次兩套血培養(yǎng)的陽(yáng)性率為80% 三次三套血培養(yǎng)的陽(yáng)性率為96%,血液及骨髓標(biāo)本,4. 采血間隔：如第一次采集2套（4瓶）血培養(yǎng)標(biāo)本，在以后的2-5天不必采血，但除外心內(nèi)膜炎和導(dǎo)管相關(guān)性敗血癥。5.  兒童：采血量是總血量的1%。6. 延遲培養(yǎng)瓶處理: 延遲培養(yǎng)瓶不要放冰箱或孵箱，放常溫，盡早送往臨床細(xì)菌室。7. 皮膚消毒液推薦：建議先用70-80%異丙醇

12、去脂，再用葡萄糖酸氯乙定消毒。,抽血量和體重的關(guān)系,二.標(biāo)本培養(yǎng)前的基本規(guī)范,1.痰培養(yǎng)標(biāo)本實(shí)驗(yàn)室在接種前必須作痰涂片革蘭染色，當(dāng)在低倍鏡下白細(xì)胞小于10個(gè)每視野、上皮細(xì)胞大于25個(gè)每視野時(shí)應(yīng)作為不宜做培養(yǎng)的標(biāo)本；當(dāng)白細(xì)胞小于10個(gè)每視野，上皮細(xì)胞小于25個(gè)每視野時(shí)再參照油鏡觀察標(biāo)本中細(xì)菌分布作出判斷。,痰培養(yǎng)標(biāo)本,當(dāng)標(biāo)本中細(xì)菌種類超過(guò)3種以上，未見到釬毛拄狀上皮細(xì)胞，作為不合格標(biāo)本；如見到數(shù)量不等的白血胞或釬毛拄狀上皮細(xì)胞或兩者同

13、在，含1-2種不同細(xì)菌，可考慮繼續(xù)培養(yǎng)，結(jié)果可根據(jù)病情再作分析；當(dāng)涂片中見到1-3種細(xì)菌，少量的扁平上皮細(xì)胞，少量或較多纖毛拄狀上皮細(xì)胞均可按合格標(biāo)本繼續(xù)培養(yǎng)。,不合格的痰涂片,合格的痰涂片,2.厭氧培養(yǎng),在正常上班時(shí)間：申請(qǐng)厭氧培養(yǎng)的科室應(yīng)邀請(qǐng)實(shí)驗(yàn)室，由臨床醫(yī)生或護(hù)士協(xié)作采集，細(xì)菌室行床邊接種。自然排出的尿標(biāo)本、用棉拭子采集的分泌物、自然咳出的痰標(biāo)本均為不合格的厭氧培養(yǎng)的標(biāo)本，應(yīng)于退檢。沒(méi)有條件或不能及時(shí)送檢的情況下均應(yīng)用輸送培

14、養(yǎng)基放置標(biāo)本 。,3.培養(yǎng)前應(yīng)有涂片結(jié)果結(jié)合涂片推斷定植菌或致病菌,⑴尿培養(yǎng)分離出3種以上的細(xì)菌，或分離出凝固酶陰性葡萄球菌、革蘭陽(yáng)性棒狀桿菌等非定義為致病菌的細(xì)菌，涂片未見到，應(yīng)在報(bào)告中提示可能是污染細(xì)菌建議結(jié)合臨床表現(xiàn)考慮結(jié)果的參考價(jià)值。⑵眼結(jié)膜拭子分離出凝固酶陰性葡萄球菌，涂片未見到，可能是污染細(xì)菌，應(yīng)建議重送標(biāo)本。,培養(yǎng)結(jié)果結(jié)合涂片判斷定植菌或致病菌,⑶前列腺液標(biāo)本分離出凝固酶陰性葡萄球菌或革蘭陽(yáng)性小桿菌，涂片未見到，可能

15、是污染細(xì)菌，應(yīng)建議重送標(biāo)本。⑷當(dāng)涂片中見到的細(xì)菌，并有細(xì)菌吞嗜現(xiàn)象存在，在培養(yǎng)時(shí)分離出該細(xì)菌可推測(cè)為致病菌。,培養(yǎng)結(jié)果結(jié)合涂片判斷定植菌或致病菌,（5）涂片報(bào)告的日期和培養(yǎng)報(bào)告日期要對(duì)應(yīng)便于醫(yī)生判別結(jié)果的參考價(jià)值.（6）并每一視野可見到>20個(gè)/油鏡或該菌占所見到細(xì)菌的50%,可推測(cè)是標(biāo)本中的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌.,,有了合格的標(biāo)本是保證培養(yǎng)成功的重要條件，但如果沒(méi)有適宜的分離培養(yǎng)基和培養(yǎng)環(huán)境同樣不能獲得好的結(jié)果，為此制定如下基本條例以

16、保證致病細(xì)菌分離成功。,三.分離培養(yǎng)基本規(guī)范,1.痰培養(yǎng),1.培養(yǎng)基：5%羊血瓊脂、5%兔血巧克力瓊脂、中國(guó)蘭瓊脂或伊紅美蘭、或加MRSA顯色瓊脂。2．培養(yǎng)環(huán)境：5%羊血瓊脂、5%兔血巧克力瓊脂、置5-7%CO2、35℃環(huán)境培養(yǎng)，其他培養(yǎng)基置35℃空氣培養(yǎng)。3．結(jié)核培養(yǎng)：羅氏雞蛋斜面，每一標(biāo)本種2支，37℃空氣培養(yǎng)。,2.尿標(biāo)本,1．培養(yǎng)基：5%羊血瓊脂、中國(guó)蘭或伊紅美蘭，或CP3尿致病菌分離顯色瓊脂。2.菌落計(jì)數(shù)：每個(gè)標(biāo)本都要做

17、，用加樣器或定量接種環(huán)取樣本20ul分別接種于上述培養(yǎng)基均勻涂布整個(gè)平皿，此日作菌落計(jì)數(shù)。3．培養(yǎng)環(huán)境：35℃空氣環(huán)境培養(yǎng),3.便培養(yǎng),1．培養(yǎng)基：中國(guó)蘭或伊紅美蘭，沙門氏志賀氏瓊脂（SS瓊脂）或加沙門菌分離瓊脂。2．培養(yǎng)環(huán)境：35℃空氣環(huán)境培養(yǎng)。3．疑似偽膜性腸炎：5%羊血瓊脂、沙保弱瓊脂斜面、梭狀芽孢桿菌分離瓊脂（CCFA）。5%羊血瓊脂、沙保弱瓊脂斜面置35℃空氣環(huán)境培養(yǎng)。CCFA置35℃厭氧環(huán)境培養(yǎng)。其他特殊腸道致病菌培

18、養(yǎng)按國(guó)家CDC要求執(zhí)行。,4.腦脊液培養(yǎng),1．培養(yǎng)基：5%兔血巧克力瓊脂、5%羊血瓊脂。 2．培養(yǎng)環(huán)境：35℃，5-10%CO2環(huán)境培養(yǎng)。,5.分泌物培養(yǎng),1．培養(yǎng)基：5%羊血瓊脂、5%兔血巧克力瓊脂、中國(guó)蘭或伊紅美蘭、葡萄糖肉湯。2．培養(yǎng)環(huán)境：35℃空氣環(huán)境培養(yǎng)。,6.膽汁或胸水或腹水,1．培養(yǎng)基：如標(biāo)本量大時(shí)可按血液培養(yǎng)方法直接取16-20ml分別種入需氧和厭氧培養(yǎng)瓶。如標(biāo)本量有限，可接種5%羊血瓊脂、5%兔血巧克力瓊脂、中

19、國(guó)蘭或伊紅美蘭、葡萄糖肉湯。2．培養(yǎng)環(huán)境：35℃空氣環(huán)境培養(yǎng)。,四.細(xì)菌鑒定規(guī)范操作,1. 涂片染色一．涂片染色：應(yīng)具備最基本的兩種染色技術(shù)，即革蘭氏染色和抗酸染色。1. 革蘭染色：革蘭染色報(bào)告必須包括染色反應(yīng)或微生物種類和類別，描述物種的形態(tài)或結(jié)構(gòu)。如革蘭染色見到革蘭陽(yáng)性球菌，呈葡萄狀排列；又如革蘭染色見到真菌小分生孢子及菌絲。偽膜性腸炎見革蘭陽(yáng)性粗大桿菌，芽胞呈卵圓形，位于菌體近極端。,竹節(jié)狀菌絲,WBC吞噬革蘭氏陽(yáng)性球菌,涂

20、片染色,2.抗酸染色：抗酸染色報(bào)告應(yīng)顯示找到或未找到或可疑抗酸桿菌三種結(jié)果，報(bào)告中應(yīng)以加號(hào)體現(xiàn)標(biāo)本中抗酸桿菌的存在量。如找到抗酸桿菌++；見到染色不典型抗酸桿菌+，建議再送標(biāo)本。不能報(bào)告找到結(jié)核桿菌但可報(bào)告未找到結(jié)核桿菌,2. 趨向性鑒定試驗(yàn),革蘭陽(yáng)性球菌:觸酶試驗(yàn):3%H2O2用30%的H2O2稀釋10倍后使用，避光4度保存 ；試驗(yàn)時(shí)設(shè)立陽(yáng)性和陰性對(duì)照；1分鐘內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡為陽(yáng)性。凝固酶試驗(yàn)：采用商品試劑或EDTA抗凝的多個(gè)兔混

21、合血漿；測(cè)定玻片法測(cè)定凝聚因子10秒鐘即可觀察結(jié)果；測(cè)定凝固酶需在37度3-4h，若陰性還應(yīng)放置24h再觀察結(jié)果。,革蘭陰性桿菌:氧化酶試驗(yàn),建議用紙片法保存比較方便；試劑配制：1%鹽酸四甲基對(duì)苯二胺水溶液陽(yáng)性：由粉紅變?yōu)樗{(lán)紫色為陽(yáng)性對(duì)照：銅綠假單孢菌 ATCC 27853 + 大腸埃希菌 ATCC25922 -,3.血清學(xué)試驗(yàn),腸道致病菌生化特征符合的前提下必須有血清學(xué)的試驗(yàn)作最后確認(rèn)，基層細(xì)菌

22、室應(yīng)具備1-3項(xiàng)血清試劑。,血清學(xué)鑒定,1.志賀氏菌多價(jià)和單價(jià)凝集血清：2.沙門氏菌多價(jià)和單價(jià)凝集血清3.致病性大腸桿菌多價(jià)和單價(jià)凝結(jié)血清4. 耶爾森氏菌凝集血清,4.真菌鑒定,1．每一基層實(shí)驗(yàn)室必須開展真菌涂片，報(bào)告臨床是否找到真菌；是否見到真菌菌絲；從形態(tài)辨別常見絲狀真菌;區(qū)別曲菌或毛霉菌。2．開展酵母樣真菌分離培養(yǎng)，應(yīng)具備最基本的沙保弱培養(yǎng)基或用顯色培養(yǎng)基，鑒別白念和非白念，隱球菌等。3.有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)開展非培養(yǎng)的鑒定

23、方法，如?-D葡聚糖的檢測(cè)。,念珠菌顯色培養(yǎng)基CHROMagar Candida,真菌概述,真菌的基本結(jié)構(gòu)：菌絲和孢子菌絲：有隔、無(wú)隔，形態(tài),,鹿角狀菌絲,真菌絲,病原真菌鑒定的基本流程,臨床標(biāo)本,,PDA, SDA28度培養(yǎng),,,,,,不能生長(zhǎng),鼻孢子菌、肺孢子菌、馬拉色菌（厚皮除外）,,,,,,芽孢,關(guān)節(jié)孢子,念珠菌、隱球菌、紅酵母等,毛孢子菌、地霉等,,,,,有隔菌絲,無(wú)隔菌絲,擔(dān)子菌、子囊菌、半知菌,接合菌等,區(qū)分酵母樣或

24、霉樣菌落,,厚膜孢子,關(guān)節(jié)孢子及菌絲,芽生孢子,五.藥敏試驗(yàn)的規(guī)范操作,1. 用CLS指南推薦的K—B藥敏標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行常規(guī)藥敏試驗(yàn)判斷。2.根據(jù)CLSI更新及時(shí)替換應(yīng)用的標(biāo)準(zhǔn)。3.根據(jù)CLSI推薦的方法，開展重要耐藥菌的檢測(cè)，如MRSA、VRE、HLARE、ESBL。,,－紙片擴(kuò)散法,AST,操作步驟 制備接種物（0.5麥?zhǔn)蠁挝唬?

25、 接種（15分鐘內(nèi)接種，涂抹均勻） 在接種好的瓊脂平板上貼加紙片 孵育（15分鐘內(nèi)反轉(zhuǎn)平板，35°C空氣孵育）

26、 苛養(yǎng)菌5％CO2孵育 判度結(jié)果和解釋結(jié)果,,,,,AST－紙片擴(kuò)散法,判讀結(jié)果 將游標(biāo)卡尺置于反轉(zhuǎn)的平板的背面，測(cè)量到最接近的整數(shù)毫米數(shù)。平板應(yīng)距離一個(gè)黑色不反光的背景數(shù)英寸，并用反射光照明。 如果是加血的瓊脂培養(yǎng)基，則應(yīng)在透射光照射下，打開培養(yǎng)皿蓋，從上表面測(cè)量抑菌圈。 如果被測(cè)菌是葡萄球菌或腸球菌，則應(yīng)孵育24小時(shí)，再在透射光下

27、分別觀察苯唑西林或萬(wàn)古霉素的透明抑菌圈內(nèi)有無(wú)耐甲氧西林或耐萬(wàn)古霉素菌落的微弱生長(zhǎng)。,ESBL初步篩選實(shí)驗(yàn),必須進(jìn)行ESBL篩查和確認(rèn)的細(xì)菌有大腸埃希菌、肺炎克雷伯、產(chǎn)酸克雷伯 和臨床有關(guān)的奇異變形桿菌！,ESBL確認(rèn)試驗(yàn),ESBL的質(zhì)控頻率,篩選試驗(yàn)和表型確證試驗(yàn)均可每日進(jìn)行或每周進(jìn)行，所選擇菌株為肺克700603或大腸埃希菌25922。 應(yīng)該注意的是：肺克700603ESBL基因在質(zhì)粒上，應(yīng)將其凍存于-60℃或以下。,奇異變形桿菌

28、 ESBL 監(jiān)測(cè)試驗(yàn),*P. mirabilis 不同于其他菌 (比如 ≤17 mm and >4 µg/ml for E. coli and Klebsiella spp.); NA, 不適用,CLSI M100-S16; Table 2A (M2, M7),NEW,可誘導(dǎo)的克林霉素耐藥 (erm-介導(dǎo))常規(guī)D－試驗(yàn): 陽(yáng)性 15 ?g 紅霉素紙片及 2 ?g克林霉素之間距離為15-26.,“D

29、 Test” –陽(yáng)性反應(yīng),,,2006強(qiáng)調(diào),mecA介導(dǎo)的葡萄球菌耐藥的表型試驗(yàn),紙片擴(kuò)散法 – 用頭孢西丁 (CX DD 30 ?g) 紙片金葡菌 –其結(jié)果等于苯唑西林紙片(OX DD)結(jié)果。CoNS – 結(jié)果優(yōu)于苯唑西林紙片的結(jié)果。結(jié)果清晰，讀起來(lái)比苯唑西林容易。報(bào)告時(shí)仍寫苯唑西林，而不寫頭孢西丁。MIC試驗(yàn) – 仍用苯唑西林藥。,常見耐藥菌釋意,產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶菌株（ESBLs）耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）,耐甲

30、氧西林葡萄球菌（MRS）,MRS包括凝固酶陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌和凝固酶陰性葡萄球菌。 表示其對(duì)β-內(nèi)酰胺類藥物，如青霉素類、β-內(nèi)酰胺/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合物、頭孢類、碳青霉烯類，可在體外顯示活性但臨床上無(wú)效。,如果為產(chǎn)酶株，不管體外藥敏如何，其對(duì)青霉素類、頭孢菌素類、氨曲南耐藥！臨床上不能使用這些藥物。,產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶菌株（ESBLs）,CLSI 在表格的導(dǎo)言中對(duì)ESBL增加了警告 “Warning” 條文,N

31、EW,六.質(zhì)量控制的規(guī)范化,1．藥物敏感試驗(yàn)的質(zhì)量控制：應(yīng)包括30天的初始質(zhì)量穩(wěn)定測(cè)試；每周一次的常規(guī)質(zhì)量控制；5天的糾控程序。2．鑒定試劑質(zhì)量控制：購(gòu)入新的試劑；在更換批號(hào)；更換生產(chǎn)廠家；結(jié)果發(fā)生異常等情況時(shí)均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制。3．染色液質(zhì)量控制：每天臨床標(biāo)本染色前應(yīng)包括染色結(jié)果陽(yáng)性和陰性的對(duì)照物及染色液污染的質(zhì)量檢查。,質(zhì)量控制內(nèi)容,4．分離培養(yǎng)基：如血瓊脂和巧克力，用肺炎鏈球菌、β-溶血和草綠色溶血的鏈球菌、流感嗜血桿菌、等苛養(yǎng)

32、細(xì)菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株或經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化試劑已證實(shí)結(jié)果正確的菌株進(jìn)行測(cè)試，判斷其分離能力。5.培養(yǎng)箱溫度的質(zhì)量控制：每天第一個(gè)開箱和最后離開實(shí)驗(yàn)室均應(yīng)對(duì)培養(yǎng)箱的溫度作記錄；CO2培養(yǎng)箱還應(yīng)記錄CO2的含量。,質(zhì)量控制內(nèi)容,6．冰箱溫度記錄：按每一冰箱存放的物品不同設(shè)置不同的質(zhì)控范圍，特別對(duì)低溫冰箱；每天記錄一次。7．自動(dòng)化設(shè)備：按廠家提供的SOP文件進(jìn)行質(zhì)控；在設(shè)備軟件升級(jí)或修改版本時(shí)均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制程序。8. 每一有權(quán)向臨床發(fā)報(bào)告的實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)

33、參加全國(guó)或省或市級(jí)質(zhì)量控制活動(dòng)。,,細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)不同的細(xì)菌檢驗(yàn)報(bào)告時(shí)間和內(nèi)容應(yīng)有相應(yīng)的規(guī)定，并告訴臨床各科，依此可防止不明原因的報(bào)告延遲應(yīng)分兩種報(bào)告形式：1.危重感染報(bào)告:2.常規(guī)報(bào)告:,七.臨床細(xì)菌室報(bào)告制度的規(guī)范,1.涂片報(bào)告,1.革蘭染色：危重報(bào)告30－６０分鐘報(bào)告。報(bào)告內(nèi)容應(yīng)包括染色反應(yīng)、是細(xì)菌或真菌、細(xì)菌形態(tài)。有無(wú)細(xì)胞內(nèi)吞嗜現(xiàn)象，有無(wú)菌絲。2.抗酸染色：報(bào)告抗酸染色陽(yáng)性或陰性；菌量以加號(hào)表示。常規(guī)報(bào)告24h,危重報(bào)告

34、1h－2ｈ。,2.血液和無(wú)菌體液培養(yǎng)的報(bào)告制度,細(xì)菌檢驗(yàn)報(bào)告應(yīng)實(shí)行三級(jí)報(bào)告制度！第一級(jí)：培養(yǎng)液直接涂片結(jié)果；第二級(jí)：初步藥敏結(jié)果和平皿菌落涂片結(jié)果；第三級(jí)：正式細(xì)菌鑒定和藥敏報(bào)告。,3.便培養(yǎng),24小時(shí)可發(fā)出初始報(bào)告;72小時(shí)應(yīng)報(bào)告藥敏試驗(yàn)結(jié)果；根據(jù)檢測(cè)范圍報(bào)告檢測(cè)結(jié)果，如未檢測(cè)出沙門菌、志賀菌。 錯(cuò)誤報(bào)告: 未見到致病菌,4.尿培養(yǎng),可在24小時(shí)報(bào)告初始結(jié)果，包括菌落計(jì)數(shù)和可能細(xì)菌種類，如氧化酶陰性的革蘭陰性桿菌；金黃色