巴氏醋桿菌核酸修復(fù)酶UvrA對(duì)菌體耐受性的影響.pdf

1、醋酸是一種常見的弱酸，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和食品行業(yè)。醋酸菌具有轉(zhuǎn)化乙醇生產(chǎn)醋酸的能力，并且能夠耐受高濃度醋酸，常用于醋酸的發(fā)酵生產(chǎn)。微生物中核酸修復(fù)酶UvrA與菌體對(duì)酸、熱等不良環(huán)境的耐受性相關(guān)，本論文克隆巴氏醋桿菌AC2005中的核酸修復(fù)酶基因uvrA，研究其對(duì)大腸桿菌醋酸、低pH、熱和過氧化耐受性的影響，同時(shí)分析了巴氏醋桿菌AC2005核酸修復(fù)酶uvrA基因敲除對(duì)菌體耐受性的影響。本論文從核酸修復(fù)的角度對(duì)醋酸菌特殊的醋酸耐受機(jī)制進(jìn)行研究

2、，具有重要的應(yīng)用價(jià)值和科學(xué)意義。
　　分別比較了醋酸、醋酸根和相同pH的HCl對(duì)巴氏醋桿菌AC2005在發(fā)酵初期生長菌體濃度倍增時(shí)間的影響，發(fā)現(xiàn)醋酸對(duì)菌體的生長有明顯的抑制作用。與對(duì)照相比，1％醋酸濃度條件下發(fā)酵初期菌體濃度倍增時(shí)間增加了5.7倍。醋酸對(duì)菌體的抑制主要是醋酸分子造成的，而不是由H+或AC-單獨(dú)造成的。利用脈沖場(chǎng)凝膠電泳分析不同醋酸濃度處理?xiàng)l件下菌體基因組斷裂情況，發(fā)現(xiàn)經(jīng)醋酸處理后巴氏醋桿菌基因組有明顯的斷裂。利用熒

3、光定量PCR(RT-PCR)的方法比較了不同醋酸濃度條件下巴氏醋桿菌核酸修復(fù)酶UvrA基因的轉(zhuǎn)錄水平，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照相比1％和2％醋酸濃度條件下，uvrA相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平分別提高了65％和97％，說明UvrA可能與巴氏醋桿菌的醋酸耐受性相關(guān)。
　　克隆巴氏醋桿菌AC2005中的核酸修復(fù)酶基因uvrA，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pMV24-uvrA，并在大腸桿菌JM109中重組表達(dá)，研究其對(duì)大腸桿菌醋酸、低pH、熱和過氧化等壓力耐受性的影響。發(fā)現(xiàn)分別

4、在0.5％醋酸、pH4、53℃、0.15％H2O2四種壓力條件下處理40 min后，重組菌E.coli JM109/pMV24-uvrA的存活率分別是對(duì)照菌E.coli JM109/pMV24的11.2、4.7、19.2和7.5倍，說明來源于巴氏醋桿菌的核酸修復(fù)酶UvrA能夠提高大腸桿菌對(duì)醋酸、低pH、熱與過氧化的耐受性。
　　同時(shí)研究了巴氏醋桿菌AC2005核酸修復(fù)酶uvrA基因敲除對(duì)菌體耐受性影響。分別在2％醋酸、pH3、53