巴氏醋桿菌核酸修復酶UvrA對菌體耐受性的影響.pdf

1、醋酸是一種常見的弱酸，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和食品行業(yè)。醋酸菌具有轉(zhuǎn)化乙醇生產(chǎn)醋酸的能力，并且能夠耐受高濃度醋酸，常用于醋酸的發(fā)酵生產(chǎn)。微生物中核酸修復酶UvrA與菌體對酸、熱等不良環(huán)境的耐受性相關(guān)，本論文克隆巴氏醋桿菌AC2005中的核酸修復酶基因uvrA，研究其對大腸桿菌醋酸、低pH、熱和過氧化耐受性的影響，同時分析了巴氏醋桿菌AC2005核酸修復酶uvrA基因敲除對菌體耐受性的影響。本論文從核酸修復的角度對醋酸菌特殊的醋酸耐受機制進行研究

2、，具有重要的應(yīng)用價值和科學意義。
　　分別比較了醋酸、醋酸根和相同pH的HCl對巴氏醋桿菌AC2005在發(fā)酵初期生長菌體濃度倍增時間的影響，發(fā)現(xiàn)醋酸對菌體的生長有明顯的抑制作用。與對照相比，1％醋酸濃度條件下發(fā)酵初期菌體濃度倍增時間增加了5.7倍。醋酸對菌體的抑制主要是醋酸分子造成的，而不是由H+或AC-單獨造成的。利用脈沖場凝膠電泳分析不同醋酸濃度處理條件下菌體基因組斷裂情況，發(fā)現(xiàn)經(jīng)醋酸處理后巴氏醋桿菌基因組有明顯的斷裂。利用熒

3、光定量PCR(RT-PCR)的方法比較了不同醋酸濃度條件下巴氏醋桿菌核酸修復酶UvrA基因的轉(zhuǎn)錄水平，發(fā)現(xiàn)與對照相比1％和2％醋酸濃度條件下，uvrA相對轉(zhuǎn)錄水平分別提高了65％和97％，說明UvrA可能與巴氏醋桿菌的醋酸耐受性相關(guān)。
　　克隆巴氏醋桿菌AC2005中的核酸修復酶基因uvrA，構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pMV24-uvrA，并在大腸桿菌JM109中重組表達，研究其對大腸桿菌醋酸、低pH、熱和過氧化等壓力耐受性的影響。發(fā)現(xiàn)分別

4、在0.5％醋酸、pH4、53℃、0.15％H2O2四種壓力條件下處理40 min后，重組菌E.coli JM109/pMV24-uvrA的存活率分別是對照菌E.coli JM109/pMV24的11.2、4.7、19.2和7.5倍，說明來源于巴氏醋桿菌的核酸修復酶UvrA能夠提高大腸桿菌對醋酸、低pH、熱與過氧化的耐受性。
　　同時研究了巴氏醋桿菌AC2005核酸修復酶uvrA基因敲除對菌體耐受性影響。分別在2％醋酸、pH3、53