殼聚糖及烷基化殼聚糖-DNA復(fù)合物介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染研究.pdf

1、該文主要研究了殼聚糖及烷基化殼聚糖/DNA聚電解質(zhì)復(fù)合物的性質(zhì)以及此復(fù)合物介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染,主要內(nèi)容包括以下三個(gè)方面:(1)以多種手段對(duì)殼聚糖及其烷基化衍生物/DNA復(fù)合物進(jìn)行研究.通過(guò)紅外光譜、31P NMR譜、圓二色譜和熒光光譜的分析得知,DNA在與殼聚糖形成聚電解質(zhì)復(fù)合物時(shí)只是引起DNA價(jià)鍵的微小擾動(dòng),DNA仍保持B型構(gòu)象,部分殼聚糖結(jié)合到DNA的小溝區(qū)域.對(duì)CS/DNA復(fù)合物的AFM的觀測(cè)表明,殼聚糖/DNA復(fù)合物的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)因電荷

2、比的不同而異,在低殼聚糖/DNA電荷比時(shí),仍然存在自由DNA,較高電荷比下,可形成納米尺度的顆粒.以二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)為模擬細(xì)胞膜,通過(guò)原子力顯微鏡和差示掃描量熱法(DSC)測(cè)定烷基化殼聚糖與模擬胞膜的相互作用,探索載體的跨細(xì)胞膜機(jī)制.結(jié)果表明,殼聚糖和烷基化殼聚糖均能夠引起DPPC膜的擾動(dòng).對(duì)于烷基化殼聚糖,隨著疏水性的提高,膜擾動(dòng)效應(yīng)增強(qiáng).復(fù)合物的電泳分析和DNase降解實(shí)驗(yàn)揭示,與殼聚糖相比,少量的烷基化殼聚糖可與DN

3、A形成復(fù)合物,且同樣起到保護(hù)DNA免受酶解的作用.(2)以C2C12小鼠成肌細(xì)胞為宿主細(xì)胞,以殼聚糖和烷基化殼聚糖為載體,介導(dǎo)含CAT報(bào)告基因的轉(zhuǎn)染,通過(guò)細(xì)胞酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定表達(dá)CAT的含量以確定基因轉(zhuǎn)染效率,考察疏水烷基鏈的引入對(duì)轉(zhuǎn)染率的影響.結(jié)果表明,殼聚糖和烷基化殼聚糖可成功地將pcDNA3.1/CAT質(zhì)粒轉(zhuǎn)入C2C12細(xì)胞內(nèi),殼聚糖基載體的轉(zhuǎn)染率比裸DNA轉(zhuǎn)染率高4倍,而烷基化殼聚糖的轉(zhuǎn)染率隨著烷基鏈的延長(zhǎng)進(jìn)一