產(chǎn)α-L-鼠李糖苷酶菌種的篩選及其制備橙皮素單葡萄糖苷的研究.pdf

1、α-L-鼠李糖苷酶是一種重要的水解酶，能夠有效的水解1,2位、1,3位、1,4位及1,6位連接的糖苷鍵。橙皮苷是一種具有較廣泛生理活性的黃酮類化合物，是由一個(gè)黃酮母環(huán)和一個(gè)1,6位連接的蕓香糖苷組成，具有抗炎、抗氧化、抗癌、維持血管正常滲透壓和降低血脂等多種生理活性。本論文通過(guò)從腐爛的柑橘中篩選得到一株α-L-鼠李糖苷酶的產(chǎn)生菌種，利用該菌種產(chǎn)酶水解橙皮苷得到橙皮素單葡萄糖苷。主要內(nèi)容及研究結(jié)果如下：
　　1.從腐爛的柑橘果皮中篩

2、選得到一株α-L-鼠李糖苷酶的產(chǎn)生菌株，并利用該菌種發(fā)酵產(chǎn)酶，將橙皮苷水解得到橙皮素單葡萄糖苷，并初步對(duì)該菌種進(jìn)行了鑒定，確定其為曲霉屬黑曲霉組。對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，確定最優(yōu)培養(yǎng)基組分為：馬鈴薯20％，葡萄糖2.0%，酵母膏1.0%，磷酸氫二鉀0.3%，橙皮苷0.75%；最適反應(yīng)條件為：溫度35℃，pH5.5，反應(yīng)的時(shí)間72h，轉(zhuǎn)速為180r/min。
　　2.對(duì)α-L-鼠李糖苷酶進(jìn)行了分離純化及酶學(xué)性質(zhì)的研究。主要采用硫酸

3、銨沉淀、透析脫鹽等方法對(duì)酶進(jìn)行了初步純化。此外，采用電泳法確定了酶的分子量為60KDa，酶的最適反應(yīng)溫度為55℃，最適反應(yīng)pH為6.0，熱穩(wěn)定范圍為20-70℃，酸堿穩(wěn)定范圍為3.0-7.0，測(cè)定其米氏常數(shù)Km值為11.66mmol/L。
　　3.采用硅膠柱法、大孔樹(shù)脂法分別對(duì)橙皮素單葡萄糖苷進(jìn)行了分離純化。確定硅膠柱法所采用的洗脫液為甲醇：乙酸乙酯：三氯甲烷=1:4:5，經(jīng)硅膠柱法分離得到的橙皮素單葡萄糖苷的純度為91.71%；