表面等離子體激元共振技術(shù)檢測(cè)三聚氰胺的研究.pdf

1、表面等離子體激元共振(Surface plasmon resonance，SPR)是一種物理光學(xué)現(xiàn)象，能通過(guò)檢測(cè)芯片表面折射率或厚度變化來(lái)研究芯片表面分子間的相互作用過(guò)程。SPR技術(shù)具有實(shí)時(shí)、免標(biāo)記、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于蛋白-蛋白、抗原-抗體、受體-配體以及小分子化合物間相互作用的研究。
　　三聚氰胺（Melamine，C3H6N6）是一種非法加入奶制品中的小分子化合物。它是一種富氮化合物，含氮量高達(dá)66％，添加三聚氰胺的食品

2、或牛奶中氮含量會(huì)顯著提高。長(zhǎng)期攝入三聚氰胺會(huì)對(duì)人體的泌尿生殖系統(tǒng)造成損害，因此，對(duì)三聚氰胺快速、可靠的檢測(cè)對(duì)判斷牛奶等的污染情況具有重要意義。針對(duì)SPR技術(shù)不易直接檢測(cè)低濃度小分子的特性，開(kāi)發(fā)出兩種通過(guò)信號(hào)放大檢測(cè)三聚氰胺的方法。該方法簡(jiǎn)單、快速、成本低，為牛奶中三聚氰胺的測(cè)定提供了新的技術(shù)支持。具體內(nèi)容如下:
　　1、開(kāi)發(fā)了基于免疫競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)檢測(cè)三聚氰胺的方法。首先在羧甲基葡聚糖修飾的芯片表面引入三聚氰胺衍生物(NH2-melam

3、ine或BSA-melamine)，隨后流動(dòng)注射待測(cè)三聚氰胺與一定濃度的三聚氰胺單克隆抗體的混合溶液?；谌芤褐腥矍璋放c芯片表面固定的三聚氰胺衍生物和溶液中一定濃度的三聚氰胺單克隆抗體之間的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，通過(guò)檢測(cè)芯片表面結(jié)合的抗體所產(chǎn)生的SPR信號(hào)來(lái)實(shí)現(xiàn)溶液中三聚氰胺的定量分析。隨著溶液中待測(cè)三聚氰胺濃度的增大，SPR信號(hào)隨之降低。通過(guò)流動(dòng)注射NaOH溶液可實(shí)現(xiàn)芯片的再生，從而大大提高了樣品分析通量。在消除非特異性吸附方面，BSA-mel

4、amine修飾的芯片要優(yōu)于NH2-melamine修飾的芯片。該方法有望用于牛奶中三聚氰胺的測(cè)定。
　　2、基于三聚氰胺與胸腺嘧啶(Thymine)的特異性結(jié)合性能，開(kāi)發(fā)了DNA修飾的SPR芯片來(lái)檢測(cè)三聚氰胺的方法。首先在羧甲基葡聚糖修飾的芯片表面引入探針DNA(NH2-A15)，隨后流動(dòng)注射待測(cè)三聚氰胺與一定濃度的靶點(diǎn)DNA(T15-biotin)以及鏈霉親和素(Streptavidin，SA)的混合溶液。由于溶液中三聚氰胺與胸