AM真菌孢子的萌發(fā)及其和發(fā)根農(nóng)桿菌誘導(dǎo)的毛狀根共生體系建立的研究.pdf

1、叢枝菌根(arbuscular mycorrhiza，AM)真菌在自然界中分布非常廣泛，據(jù)統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示:地球上80％的維管植物都可與其形成互惠共生的關(guān)系。它們是土壤微生物群落中重要的組成部分，并且在農(nóng)業(yè)中扮演著重要的角色。由于AM真菌本身具有專性共生的特性，純培養(yǎng)技術(shù)到現(xiàn)在還無進展，雙重培養(yǎng)技術(shù)，是近幾十年時間人們用來探索AM真菌理化性質(zhì)、形態(tài)結(jié)構(gòu)、生物及非生物脅迫應(yīng)答、根際生物之間的相互作用和分類系統(tǒng)進化等方面的一種理想模式，這種模式

2、甚至為后期方便與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合，為系統(tǒng)的研究AM真菌打下堅實的基礎(chǔ)。在前人的研究基礎(chǔ)上，本文探索了離體條件下AM真菌孢子最佳消毒方法和培養(yǎng)基質(zhì)以及影響AM真菌孢子萌發(fā)、菌絲生長的相關(guān)因子。研究了無菌條件下利用發(fā)根農(nóng)桿菌誘導(dǎo)胡蘿卜產(chǎn)生毛狀根與AM真菌建立雙重培養(yǎng)體系。論文取得的主要結(jié)果如下:
　　以發(fā)根農(nóng)桿菌A4感染受傷的胡蘿卜外植體并得到轉(zhuǎn)化根的最佳誘導(dǎo)條件為，共培養(yǎng)基:VC+AS（乙酰丁香酮）的水瓊脂培養(yǎng)基，OD600值為

3、0.5～0.6時的菌液濃度可保證較高的發(fā)根率，加菌量為20μL，共培養(yǎng)時間2～3天，選擇培養(yǎng)基加羧卡青霉素的量為500mg/L，除菌時間4天。
　　AM真菌孢子萌發(fā)及菌絲生長的最佳培養(yǎng)基為水瓊脂。在3種處理中，處理3的消毒效果最好，即用無菌過濾膜加注1％氯胺T+200mg/L鏈霉素+100mg/L慶大霉素+1％Tween20處理15min，無菌蒸餾水漂洗6～10，孢子的萌發(fā)率達到了80.67％。
　　通過在培養(yǎng)Glomus

4、intraradices孢子的水瓊脂培養(yǎng)基中加入不同濃度的葡萄糖和不同濃度的根浸出液處理進行試驗。結(jié)果表明，當(dāng)葡萄糖濃度為5g/L時菌絲長度超過了對照組并且達到最長，這說明微量的葡萄糖可以促進菌絲生長分支。當(dāng)根浸出液濃度為50mL/L時，孢子的萌發(fā)率和菌絲長度效果最佳，濃度為100～200mL/L的根浸出液也能明顯的促進菌絲生長。
　　在以上實驗的基礎(chǔ)上，我們又添加了四種不同的氮源(NaNO3，NH4Cl，NH4NO3，尿素)，來

5、探索葡萄糖、根浸出液分別和四中不同氮源共同作用對AM真菌孢子萌發(fā)的影響，結(jié)果顯示:在葡萄糖加入到不同氮源的培養(yǎng)基中，孢子萌發(fā)和菌絲的生長都不顯著，培養(yǎng)20天后，萌發(fā)率最大的葡萄糖+尿素培養(yǎng)基中也只達到57.33％，菌絲中除了葡萄糖+NH4NO3其余并沒有明顯差異，在根浸出液加入到不同氮氮源培養(yǎng)基中，孢子萌發(fā)都有顯著的增加，萌發(fā)率在根浸出液+尿素的培養(yǎng)基中高達80.33％，其余的也都在61％左右，根浸出液+NH4NO3培養(yǎng)基中菌絲長度達到