基于醇質體-絲素復合納米纖維膜的透皮免疫系統(tǒng)的構建及其評價研究.pdf

1、疫苗的主要接種方式為皮下或者肌肉注射，大多數人取得了良好的接種效果。但是這些傳統(tǒng)方法存在針頭污染、引起疼痛并且需要專業(yè)醫(yī)護人員操作以及存儲和運輸條件苛刻等缺陷。因此研究一種可以更加方便、高效的無針疫苗傳遞系統(tǒng)成為藥劑學和免疫學領域研究的熱點。透皮免疫(Transcutaneous immunization, TCI)是將抗原和抗原佐劑應用于局部皮膚而誘導產生全身免疫反應的新方法，它是一種免疫新策略，可克服傳統(tǒng)的注射接種方式存在的多種缺陷

2、。對于大分子的抗原蛋白來說皮膚的角質層是很難逾越的障礙，如何使大分子抗原突破角質層的障礙進入富含抗原提呈細胞（Antigen-presenting cells, APCs）的活性表皮層和真皮層就成為TCI系統(tǒng)研發(fā)的關鍵。
　　脂質體的結構與細胞膜相似，可以攜帶大量的藥物并且可以與細胞膜融合，具有較好的透皮性能。醇質體（Ethosomes, Eth）是一種特殊的脂質體，相比脂質體，醇質體由于含有一定量的醇而表現出更好的柔性，從而具有

3、更優(yōu)異的透皮性能。絲素（Silk fibroin, SF）納米纖維具有優(yōu)越的生物相容性和皮膚親和力。本課題組之前的研究證實基于 Eth/SF復合納米纖維膜的透皮給藥系統(tǒng)可有效促進牛血清白蛋白和質粒DNA等大分子模型藥物的透皮遞送。本研究在此基礎上，以大分子抗原蛋白OVA為模型藥構建主動靶向樹突狀細胞（Dendritic cells, DCs）的 Eth/SF納米纖維膜透皮免疫系統(tǒng)，并對該系統(tǒng)進行了較為全面的評價研究，主要研究內容和結果如

4、下：
　?。?）構建主動靶向DCs細胞的醇質體。采用薄膜分散法制備得到陽離子醇質體，在其表面修飾一層透明質酸（HA）得到Eth-HA，在此基礎上再修飾一層半乳糖化殼聚糖（GC）得到Eth-GC。未經修飾的醇質體平均粒徑為135.4nm，帶正電，Eth-HA粒徑有所增加且?guī)ж撾?，而Eth-GC則帶正電，其粒徑介于前兩者之間。體外透皮實驗表明經過修飾的醇質體仍可有效攜載蛋白大分子透皮進入到真皮層；
　?。?）Eth-GC透皮免疫

5、性能評價。從C57BL/6的小鼠體內提取DCs前體細胞進行抗原攝取實驗，結果證實 Eth-GC可以特異性靶向 DCs細胞，使細胞表面CD11c、CD80和CD86等表面分子的表達水平提高，還能促進細胞分泌更多的TNF-α、IL-2和IL-6，表明其可以促進DCs的成熟。進一步的動物實驗證明，負載OVA的Eth-GC（OVA@Eth-GC）可以透皮激發(fā)小鼠產生更多的抗OVA特異性抗體，說明該醇質體有效的激發(fā)了小鼠抗原特異性體液免疫反應。<

6、br>　?。?）Eth-GC/SF復合納米纖維膜的構建及其透皮免疫性能評價研究。利用綠色靜電紡技術制備OVA@Eth-GC/SF復合納米纖維膜TCI系統(tǒng)，掃描電鏡、顯微熒光術及MTT等實驗證實該膜表面光滑，纖維分布均勻，細胞相容性良好，體外透皮實驗顯示其具有良好的透皮釋藥性能；體外免疫誘導實驗表明，該系統(tǒng)的細胞攝取率較高，細胞表面CD11c、CD80和CD86等表面分子的表達水平也明顯提升，表明負載于納米纖維中的醇質體結構不會受到破壞，

7、Eth-GC從納米纖維中釋放出來仍可靶向DCs細胞。動物實驗證實，該系統(tǒng)可激發(fā)小鼠產生更多的抗OVA特異性抗體，分泌更多的細胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6，并且能有效的抑制腫瘤的生長速度，說明該系統(tǒng)激發(fā)了有效的體液及細胞免疫。
　　綜上所述，本研究制備的Eth-GC及Eth-GC/SF復合納米纖維膜TCI系統(tǒng)可以有效的將抗原蛋白傳遞至皮膚的活性表皮層和真皮層，并激發(fā)有效的免疫反應，在TCI等生物醫(yī)藥相關領域具有廣泛的應用前景