綠色工藝構建負載脂質體的絲素蛋白超細纖維支架及其評價研究.pdf

1、長期以來,脂質體轉染一直是基因轉染技術中主要的非病毒轉染手段,它具有操作簡單、無致瘤風險以及無免疫原性等優(yōu)點。近年來的研究表明,通過包埋嵌入、表面吸附、共價接枝等方式納入組織工程支架體系中的載藥脂質體由于受到支架材料的保護和牽制,其轉染細胞的效果比單純用沒有支架的脂質體更好,藥物分子的釋放更平穩(wěn)持久,對細胞的誘導效果更佳。顯然,脂質體技術的介入將使功能性支架的制備更為方便,支架的功能化設計也將朝著更精細的方向發(fā)展。受此啟發(fā),本研究采用靜

2、電紡絲技術成功的將載藥脂質體納入絲素蛋白納米纖維支架,制備得到一種新型的負載脂質體的絲素蛋白超細纖維支架,以期應用于各類組織再生。主要研究內容如下:
　　 (1)采用綠色環(huán)保的水溶液靜電紡絲技術制備了絲素蛋白-脂質體超細纖維膜,整個制備過程中不涉及任何有毒有害的物質。通過掃描電子顯微鏡、透射電子顯微鏡、紅外光譜、核磁共振分析在脂質體加入前后絲素蛋白超細纖維的結構和理化性質的改變。掃描電子顯微鏡顯示3個濃度的脂質體加入,形成的超細

3、纖維都為表面光滑,粗細均勻,呈扁平狀結構。透射電鏡揭示脂質體分布在絲素蛋白納米纖維內部。在經過75％(v/v)的乙醇蒸汽處理18h以后,納米纖維由親水的silkⅠ結構轉變?yōu)槭杷膕ilkⅡ結構,為后續(xù)的實驗奠定了基礎。
　　 (2)以牛血清白蛋白作為模式藥物,研究絲素蛋白-脂質體超細纖維膜的體外藥物釋放行為。由于有脂質體和絲素蛋白纖維的保護-藥物活性不容易遭到破壞,并能起到延緩釋放的作用,釋放時間達到156h,之后趨于平衡。在緩

4、釋的整個過程中,纖維膜的形貌保持完整。根據(jù)藥物釋放結果,確定脂質體含量為7.4％較為合適。
　　 (3) MTT和SEM檢測表明脂質體的含量并不直接影響到細胞在絲素蛋白-脂質體超細纖維膜上的生長和粘附。以pEGFP-N1為模型藥物的研究表明,這種絲素蛋白-載藥脂質體超細纖維支架所攜帶的基因藥物能夠高效的轉染進入生長在支架上的細胞中并正常表達。
　　 綜上所述,本課題制備的絲素蛋白-脂質體超細纖維膜作為一種新型的藥物控釋載