新型納米載體的構建及其在經(jīng)皮免疫中的應用.pdf

1、目的:探討以脂質體和納米粒為載體的卵清蛋白經(jīng)皮疫苗的制備方法及其對小鼠的免疫效果,以期作為有效的經(jīng)皮疫苗載體用于抗腫瘤治療。
　　 方法:1、采用逆向蒸發(fā)法和薄膜分散法制備了攜載卵清蛋白(OVA)的柔性脂質體,以殼聚糖、三聚磷酸鈉為材料運用離子凝膠化法制備了攜載OVA的殼聚糖納米粒,進行納米制劑的形態(tài)、粒徑與電位、體外釋放等一系列表征;2、比較不同制備方法對經(jīng)皮滲透的差異,考察不同類型脂質體制劑對藥物經(jīng)皮性能、在皮膚中的滯留及分

2、布的影響,評價制備工藝對脂質體與納米粒所攜載的卵清蛋白的影響,探討兩種納米制劑的經(jīng)皮途徑;3、通過不同免疫佐劑的篩選,選擇具有增強免疫效果的佐劑用于納米制劑體內經(jīng)皮免疫效果評價。4、以卵清蛋白為模型藥物,通過測定血清中的抗OVA免疫球蛋白G(IgG)含量,對不同卵清蛋白制劑經(jīng)皮免疫的效果進行評價,考察角質層分別對脂質體與納米粒經(jīng)皮效果的影響。5、通過考察朗格漢斯細胞識別攝取卵清蛋白殼聚糖納米粒與遷移至周圍淋巴結的能力,探索攜載卵清蛋白的

3、殼聚糖納米粒誘導經(jīng)皮免疫的發(fā)生機制。6、以優(yōu)選的制劑為載體,構建黑色素瘤相關抗原gp100抗腫瘤經(jīng)皮疫苗,考察其免疫預防治.療小鼠黑色素實體瘤效果。
　　 結果:脂質體和納米粒形態(tài)圓整,分布均勻,粒徑分布在200～300nm范圍內,柔性脂質體與殼聚糖納米粒能有效地攜載卵清蛋白并保持其不被降解,包裹了卵清蛋白的納米制劑能穿透皮膚角質層并貯存于皮膚中形成儲庫,保持較高的藥物濃度。通過對納米制劑經(jīng)皮機制的考察,攜載了FITC-OVA的

4、柔性脂質體與殼聚糖納米粒進入皮膚的機制主要是通過皮膚附屬器途徑,包括毛囊,汗腺,皮脂腺等。攜載了卵清蛋白的兩種柔性脂質體與卵清蛋白殼聚糖納米粒在經(jīng)皮免疫后能產(chǎn)生較高的特異性抗OVA的IgG,成功引發(fā)小鼠的免疫應答。咪喹莫特作為合適的經(jīng)皮免疫佐劑,能有效提高經(jīng)皮疫苗的免疫效果。角質層的存在對卵清蛋白柔性脂質體的體內經(jīng)皮免疫不產(chǎn)生明顯影響。相比兩種柔性脂質體,殼聚糖納米粒的體內免疫效果較強,但仍受角質層屏障作用所影響,在完整皮膚上,殼聚糖納

5、米粒的經(jīng)皮免疫效果有所減弱。在進一步的研究中,考察殼聚糖納米粒在經(jīng)皮免疫的發(fā)生機制,通過免疫磁珠法制備了皮膚朗格漢斯細胞進而比較其攝取抗原的能力,相比FITC-OVA溶液組,FITC-OVA殼聚糖納米粒更易被朗格漢斯細胞識別攝取,通過體內示蹤實驗觀察得到攜載了FITC-OVA的殼聚糖納米粒相比單純FITC-OVA溶液更易于被朗格漢斯細胞識別處理后遷移到周圍淋巴結,從而行使抗原遞呈功能。攜載gp100蛋白的殼聚糖納米粒經(jīng)皮疫苗顯示出一定的

6、抑制小鼠黑色素實體瘤的效果并能提高荷瘤小鼠生存率。
　　 結論:通過柔性脂質體和殼聚糖納米粒的攜載,卵清蛋白能更好地被保護而不受降解。在經(jīng)皮過程中,以納米制劑為載體的藥物更有效地通過皮膚附屬器途徑進入活性皮膚層,形成藥物的貯庫,逐漸擴散到周圍皮膚。角質層的存在,對卵清蛋白柔性脂質體的體內經(jīng)皮免疫效果不產(chǎn)生明顯影響,克服了常規(guī)經(jīng)皮疫苗時角質層存在阻滯經(jīng)皮吸收的負面影響。攜載卵清蛋白的殼聚糖納米粒在經(jīng)皮免疫后可促進小鼠體內免疫保護應