雷公藤紅素納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體及其經(jīng)皮給藥研究.pdf

1、雷公藤紅素(Tripterine)是中藥雷公藤(TripterygiumwilfordiiHoogf.)的主要活性成分之一，具有抗腫瘤、抗炎、抗生育、抗菌、免疫抑制、止痛等多種藥理活性。尤其是其抗腫瘤效果，近來受到國內(nèi)外的廣泛關(guān)注。但雷公藤紅素不溶于水，口服給藥生物利用度低，且會(huì)產(chǎn)生全身性的毒副作用。因此，提高雷公藤紅素的溶解度，增加其生物利用度，減小其毒性，是雷公藤紅素應(yīng)用于臨床亟待解決的問題。采用經(jīng)皮給藥方式可提高局部藥物濃度，避免

2、口服給藥等引起的血藥濃度峰谷現(xiàn)象，降低口服給藥后產(chǎn)生的全身性的毒副作用；其次，可避免肝臟的首過效應(yīng)，生物利用度高；此外，可減少給藥次數(shù)、延長給藥間隔，使用方便，可隨時(shí)中斷給藥，減少耐藥性，對(duì)降低藥物尤其是有毒藥物的毒副作用、提高藥物的治療效果具有重大的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(Nanostructuredlipidcarriers，NLC)具有良好的皮膚粘附性，可在皮膚表面形成具有“閉塞效應(yīng)”的膜，調(diào)整脂質(zhì)細(xì)胞的緊密排

3、列，使其流動(dòng)性增加，從而提高藥物在角質(zhì)層中的濃度和藥物的透皮吸收；其次，納米級(jí)顆粒能提高角質(zhì)層的水合程度，促進(jìn)藥物透過；最后，NLC生物相容性好，對(duì)皮膚無刺激作用，且具有緩釋作用，可以提高難溶性藥物生物利用度并極大地降低藥物因口服產(chǎn)生的毒性。
　　將雷公藤紅素制備成納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，并采用經(jīng)皮給藥的方式，有望得到皮膚滲透能力強(qiáng)，并具有緩釋作用的新型制劑，從而提高雷公藤紅素的治療效果，避免雷公藤紅素口服后產(chǎn)生全身性的毒副作用及胃腸道

4、刺激，降低其毒性反應(yīng)。納米粒的表面電荷可能影響其透皮吸收行為，因此，本文通過溶劑擴(kuò)散法制備了正電位雷公藤紅素NLC，中電位雷公藤紅素NLC及負(fù)電位雷公藤紅素NLC，并采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化出雷公藤紅素NLC的最佳制備工藝，在此基礎(chǔ)上考察了三種電位NLC的理化性質(zhì)及體外透皮行為，通過人正常皮膚細(xì)胞(HaCaT細(xì)胞)，對(duì)雷公藤紅素NLC的毒性進(jìn)行了考察，通過黑色素瘤細(xì)胞(B16BL6細(xì)胞)及小鼠黑色素瘤模型，研究了三種電位NLC的體外和體內(nèi)藥

5、效，并考察了NLC的表面電荷對(duì)藥效的影響。
　　本研究主要包括以下五個(gè)部分：
　　1.處方前研究
　　首先建立了雷公藤紅素的體外分析方法，并進(jìn)行了方法學(xué)考察。結(jié)果顯示，該方法專屬性好，雷公藤紅素在0.1－80μg·mL-1濃度之間線性良好；日內(nèi)精密度RSD值小于1.5％，日間精密度RSD值小于1.3％；穩(wěn)定性RSD值為1.33％；重復(fù)性RSD值為1.44％，包封率測定方法及透皮接收液處理方法的回收率分別為98.3％－1

6、00.3％及97.3％-99.9％。所建立的雷公藤紅素NLC的HPLC分析方法，穩(wěn)定可靠、專屬性和重復(fù)性好，為雷公藤紅素NLC的制備奠定了基礎(chǔ)。其次，測定了雷公藤紅素在不同介質(zhì)中的溶解度，并選擇了pH7.4磷酸鹽緩沖液(含20％乙醇)+0.5％吐溫80溶液作為雷公藤紅素及其制劑的體外釋放介質(zhì)和透皮接收液。油/水分配系數(shù)的分析結(jié)果表明雷公藤紅素的LogP為5.33表明其分配系數(shù)較大，脂溶性較強(qiáng)。雷公藤紅素穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，雷公藤紅素在實(shí)

7、驗(yàn)所述不同溫度和pH條件下穩(wěn)定性較好，所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為后續(xù)制備工藝的選擇提供參考。
　　2.雷公藤紅素納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體制備工藝的研究及理化性質(zhì)考察
　　采用溶劑揮發(fā)法制備NLC納米粒，并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行考察。在單因素考察的基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選、優(yōu)化了最佳制備工藝和處方。以雙硬脂酸甘油酯為固體脂質(zhì)，肉豆蔻酸異丙酯為液體脂質(zhì)，制備負(fù)電位NLC；以硬脂胺為固體脂質(zhì)，肉豆蔻酸異丙酯為液體脂質(zhì)，制備正電位NLC；以山崳酸甘油酯

8、為固體脂質(zhì)，以中鏈脂肪酸甘油脂為液體脂質(zhì)，制備中電位NLC。對(duì)三種不同電位NLC的理化性質(zhì)進(jìn)行了考察，透射電鏡下正電位NLC，中電位NLC及負(fù)電位NLC為球狀或類球狀粒子，且粒子之間幾乎沒有粘連。電位分別為26.4±4.2，－2.7±0.9和－24.3±3.7mv；粒徑分別為138.2±9.7，127.8±7.4和114.5±10.2nm；包封率分別為69.3±5.1％，67.8±4.4％和72.5±4.9％。差示掃描量熱法(DSC)的

9、結(jié)果說明雷公藤紅素以無定形狀態(tài)包封于NLC中。穩(wěn)定性研究結(jié)果表明雷公藤紅素NLC在4℃條件下貯存時(shí)穩(wěn)定性較好。通過對(duì)釋放曲線的擬合，發(fā)現(xiàn)三種電位NLC的釋放基本符合一級(jí)釋藥模型，說明NLC的釋放為持續(xù)而緩慢的過程。
　　3.雷公藤紅素納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體體外透皮研究
　　由體外經(jīng)皮滲透實(shí)驗(yàn)可知，正電位NLC，中電位NLC，負(fù)電位NLC及雷公藤紅素溶液12h的累積滲透量分別為23.32±0.92，21.04±0.93，12.46±

10、0.81及30.55±1.09μg·cm-2；12h后正電位NLC、中電位NLC及負(fù)電位NLC在皮膚中的滯留總量分別為雷公藤紅素溶液的4.65，3.52及2.39倍。不同深度皮膚中的藥物滯留量的結(jié)果表明，三種電位NLC及雷公藤紅素溶液的皮膚滯留量均以0-30μm最高，正電位NLC該層皮膚中的滯留量分別是中電位NLC，負(fù)電位NLC及雷公藤紅素溶液的1.23，1.70及3.92倍。實(shí)驗(yàn)表明，納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體能顯著增加藥物在角質(zhì)層中的滯留，且

11、其透皮行為與其表面電荷有關(guān)，與中電位NLC及負(fù)電位NLC相比，正電位NLC更能提高藥物在角質(zhì)層中的滯留量。
　　4.雷公藤紅素納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體細(xì)胞抑制作用及細(xì)胞攝取研究
　　由細(xì)胞抑制實(shí)驗(yàn)可知，正電位NLC，中電位NLC，負(fù)電位NLC及雷公藤紅素溶液對(duì)HaCaT細(xì)胞的IC50分別為9.24，10.43，11.14，8.96μg·mL-1。對(duì)B16BL6細(xì)胞的IC50分別為6.33，6.61，7.99，9.21μg·mL-1。

12、說明NLC可以降低雷公藤紅素對(duì)HaCaT細(xì)胞的毒性，增加其對(duì)B16BL6細(xì)胞的毒性。由細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)可知，在孵育4h后，HaCaT細(xì)胞對(duì)正電位NLC、中電位NLC及負(fù)電位NLC的攝取率分別為44.59％，37.81％及35.56％，B16BL6細(xì)胞對(duì)正電位NLC、中電位NLC及負(fù)電位NLC的攝取率分別為54.20％，47.41％及40.89％。結(jié)果表明，兩種細(xì)胞對(duì)正電位NLC的攝取均高于中電位NLC及負(fù)電位NLC，且B16BL6細(xì)胞對(duì)NL

13、C的攝取率高于HaCaT細(xì)胞，說明NLC對(duì)B16BL6細(xì)胞可能具有選擇性。
　　5.雷公紅素納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體體內(nèi)藥效學(xué)研究
　　實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，環(huán)磷酰胺陽性對(duì)照組、雷公藤紅素溶液凝膠組、正電位NLC凝膠組、中電位NLC凝膠組及負(fù)電位NLC凝膠組的抑瘤率分別為：63.37％，29.65％，50.58％，43.02％及38.95％。上述結(jié)果表明，各NLC組對(duì)腫瘤的抑制作用均強(qiáng)于雷公藤紅素溶液，且正電位NLC的抑瘤作用最強(qiáng)。