丹參酮IIA-納米銀復合物凝膠的制備及其用于中耳炎的治療.pdf

1、中耳炎作為耳科臨床常見病與多發(fā)病，嚴重影響著人類的健康和生活質量。局部應用抗生素在中耳炎治療方面有重要意義，但其耐藥性及潛在耳毒性卻限制了抗生素的廣泛應用。為了更好的實現(xiàn)中耳炎的治療，本文設計了一種結合中藥活性成分丹參酮IIA和無機材料納米銀的新型藥物遞送系統(tǒng)。該系統(tǒng)由正電性的殼聚糖或溶菌酶與負電性的納米銀通過靜電吸附作用包裹納米銀，隨后將其與丹參酮 IIA包合物相結合，發(fā)揮協(xié)同抗菌作用，同時減少銀的用量，從而構建得到抗菌性能更優(yōu)、無潛

2、在耳毒性及耐藥性的新型抗菌制劑。進一步以聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）為基質，制備成丹參酮 IIA/納米銀復合物凝膠，將其應用于局部治療中耳炎，并就該復合物凝膠對中耳和內耳的安全性進行評價。
　　本研究主要內容包括：⑴利用蘭花蕉內生真菌菌體水浸液與硝酸銀生物合成納米銀顆粒，采用紫外全波長掃描（UV-vis）、粒徑和電位分析（DLS）、透射電子顯微鏡（TEM）、X射線衍射分析（XRD）、及傅立葉變換紅外光譜分析（FTIR）等表征

3、手段對生物合成的納米銀進行表征。結果表明，利用蘭花蕉OC14菌株水浸液與硝酸銀孵育合成了球形或近球形納米銀顆粒，平均粒徑約為46.1nm，納米銀分散性好，結晶性良好，屬于面心立方結構。⑵采用共孵育法制備殼聚糖納米銀復合物和溶菌酶納米銀復合物，通過改變殼聚糖分子量、濃度以及納米銀膠體溶液與殼聚糖溶液的投料比，考察復合物的粒徑分布和抗菌性能。使用不飽和醇溶液法制備丹參酮IIA的羥丙基-β-環(huán)糊精包合物，將兩者共孵育形成丹參酮IIA/銀復合物

4、的納米粒體系。采用K-B紙片擴散法、二倍稀釋法和對細菌的抑制率評價丹參酮IIA/納米銀復合物的抗菌性能。結果發(fā)現(xiàn)在24 h時與丹參酮IIA和納米銀相比，復合物的最低抑菌濃度更低，且具有更高的抑制率，表現(xiàn)為協(xié)同作用。⑶利用聚合物沉淀型原位凝膠的形成原理，選擇凝膠基質材料PLGA，輔以適量的N-甲基吡咯烷酮，制備丹參酮IIA/納米銀復合物凝膠，得到黃棕色或紅棕色半透明液體，質地均勻細膩，有一定粘稠度。在PBS中可迅速形成球狀液滴，完成溶劑交

5、換后形成黃橙色或紅褐色的半固體凝膠儲庫。體外釋放結果顯示丹參酮IIA/納米銀復合物溶液的體外釋藥周期約為7天，而丹參酮IIA對照品的釋藥周期僅為1.5天，表明該制劑有較為明顯的緩釋效果。而凝膠劑顯示比溶液劑具有更為顯著的緩釋作用。⑷收集中耳腔灌洗液和上皮組織，應用HPLC法測定中耳腔注入丹參酮IIA/納米銀復合物溶液劑和凝膠劑后的藥時曲線。運用軟件分析數(shù)據(jù)得丹參酮IIA/納米銀復合物凝膠劑的血藥濃度Cmax分別為8.05±3.49μg/

6、mL和10.67±4.27μg/mL，明顯高于溶液劑的3.08±1.73μg/mL和3.93±1.10μg/mL。凝膠劑的藥物曲線下面積AUC0-t與溶液劑曲線下面積AUC0-t相比，提高了近3倍。結果表明丹參酮IIA/納米銀復合物凝膠可顯著提高生物利用度，使藥物充分發(fā)揮藥效。⑸通過鼓膜穿刺注入金黃色葡萄球菌菌懸液建立豚鼠中耳炎模型，鼓室注射給藥后分別在不同時間點進行細菌培養(yǎng)菌落計數(shù)。結果發(fā)現(xiàn)各藥物和生理鹽水組比較，細菌培養(yǎng)菌落計數(shù)皆有

7、下降，表明各藥物具有一定的藥效，且丹參酮IIA/納米銀復合物細菌培養(yǎng)菌落計數(shù)顯著低于納米銀和丹參酮 IIA，在24 h的細菌數(shù)分別為243×104CFU/mL、371×104CFU/mL和530×104CFU/mL。并且各丹參酮 IIA/納米銀復合物治療組顯示出更明顯的TNF-α和IL-8水平下降趨勢（P＜0.05）。治療結束后觀察中耳粘膜切片的炎細胞浸潤情況，可見氧氟沙星滴耳液組和丹參酮IIA/納米銀復合物組炎性細胞顯著減少。說明丹參