熒光標記試劑制備及在高效液相色譜-質譜中的應用.pdf

1、高效液相色譜(HPLC)因其強大的分離分析能力已被廣泛應用于許多研究和應用領域，如化學、生物化學、臨床醫(yī)學、藥物學、神經生物學及食品衛(wèi)生、環(huán)保檢測、質量控制等。該法也是分析化學中發(fā)展最快、應用最廣泛的領域之一。然而，由于樣品中被測組分本身性質及其低含量的限制，并非所有化合物都可直接用于液相色譜分析。熒光檢測具有很高的靈敏度，利用熒光標記技術使本身不發(fā)熒光的化合物(如氨基酸、脂肪胺、脂肪酸等)轉化成發(fā)射熒光的衍生物，能夠實現高靈敏熒光檢測

2、。本文重點研究了幾種新熒光標記試劑的合成和表征，考察了熒光標記試劑的光譜性質，優(yōu)化了衍生反應條件、色譜分離條件，并將建立的方法應用于不同生物樣品的分析中。具體工作內容如下： 第一章：介紹了熒光原理及熒光標記法。簡述了高效液相色譜的發(fā)展及其基礎知識。綜述了熒光標記試劑在羧酸類和氨基類化合物的高效液相色譜分析中的應用。 第二章：五種熒光標記試劑：吖啶酮-9-乙基對甲苯磺酸酯(AETS)、1-[2-(對甲苯磺酸酯)-乙基]-2

3、-苯基咪唑[4，5-f]9,10-菲(TSPP)、2-(9-吖啶酮)-乙酸(AAA)、2-(2-苯基-1-氫-菲[9，10-d]咪唑-乙酸(PPIA)、1.2-苯并-3.4-二氫咔唑-9-乙基氯甲酸酯(BCEOC)的設計合成、結構表征、光譜性質研究，以及TSPP晶體結構解析。 第三章：兩種熒光標記試劑AETS和TSPP分別用于脂肪酸的高效液相色譜-質譜分析。通過對衍生化條件和色譜分離條件的優(yōu)化，建立了脂肪酸的柱前衍生化高效液相色

4、譜熒光檢測法，并將方法應用于土壤、苔蘚、阿拉斯加深海魚油、川西獐牙菜、肋柱花、麻花艽、秦艽樣品的測定，實現了這些樣品中脂肪酸的高靈敏檢測?？疾炝巳芤褐械沫h(huán)境因素如溶劑極性、溫度、鹵素離子、重金屬離子對TSPP-C8衍生物熒光光譜的影響。 第四章：兩種熒光標記試劑AAA和PPIA分別用于脂肪胺的高效液相色譜-質譜分析。通過對衍生化條件和色譜分離條件的優(yōu)化，建立了脂肪胺的柱前衍生化高效液相色譜熒光檢測法，并將方法應用于土壤、酸奶、大

5、鼠端腦、造紙廠廢水實際樣品的測定。結果表明，衍生反應條件溫和，衍生產率高，該方法的線性范圍寬，重現性好，靈敏度高。 第五章：1，2-苯并-3,4-二氫咔唑-9-乙基氯甲酸酯(BCEOC)用于氨基酸和神經遞質的高效液相色譜-質譜分析。建立了BCEOC用于五種神經遞質的熒光標記液相色譜分析法，實現了氨基酸類神經遞質和含有一級胺與二級胺的單胺類神經遞質的同時標記，對大鼠端腦中的神經遞質實現了準確測定。采用二十種氨基酸的BCEOC柱前衍