用加壓CO-,2-從乙醇-水溶液中沉淀蛋白質(zhì)的研究.pdf

1、首先,建立了一套用于SAS沉淀分離的實(shí)驗(yàn)裝置,以牛奶中蛋白質(zhì)為模擬對(duì)象,考察了在混合溶劑中超(近)臨界抗溶劑CO<,2>沉淀蛋白質(zhì)時(shí),助溶劑——乙醇對(duì)蛋白質(zhì)沉淀的影響.第二,通過(guò)對(duì)乙醇-水混合溶劑中纖維素酶、α-淀粉酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶等在超(近)臨界CO<,2>中沉淀情況的考察和酶活變化的測(cè)定,表明不同的酶在實(shí)驗(yàn)條件下沉淀現(xiàn)象和酶活變化規(guī)律各異,并總結(jié)出含蛋白質(zhì)(酶)混合物在乙醇-水溶液中進(jìn)行超(近)臨界CO<,2>處理的三個(gè)前

2、提條件,確定了超(近)臨界CO<,2>處理纖維素酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶等的溫度、CO<,2>壓力、乙醇濃度的操作范圍.第三,通過(guò)對(duì)牛奶、纖維素酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶等在混合溶劑中進(jìn)行超(近)臨界CO<,2>沉淀的研究,得到了實(shí)驗(yàn)條件下上述溶液中總蛋白質(zhì)的溶解度數(shù)據(jù).第四,將實(shí)驗(yàn)體系近似為CO<,2>-C<,2>H<,5>-H<,2>O0三元系,并通過(guò)該三元系的相平衡研究,提出了可用于實(shí)際工程計(jì)算的MESV方程和相應(yīng)的驗(yàn)算方法,得

3、到了實(shí)驗(yàn)條件下可信的相平衡各組分組成數(shù)據(jù).第五,首次建立了在超(近)臨界條件下蛋白質(zhì)在液相中的溶解度數(shù)學(xué)模型,并利用MESV方程的推算結(jié)果.最后,將首次提出的用加壓CO<,2>從混合溶劑中沉淀蛋白質(zhì)的新方法,運(yùn)用于纖維素酶分離純化和酸性蛋白酶、堿性蛋白酶去除雜蛋白過(guò)程.在分析纖維素酶的分離純化時(shí),引入了"分級(jí)沉淀線圖",結(jié)果表明最大純化因子和得率分別可達(dá)6.33和62﹪,省去了脫鹽、冷凍干燥等過(guò)程.該法對(duì)酸性蛋白酶、堿性蛋白酶等也有較好