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1、斯托克斯位移大的熒光蛋白在多色雙光子成像方面,具有重要的應(yīng)用價值。斯托克斯位移指的是熒光物質(zhì)的最大發(fā)射波長和最大激發(fā)波長之差。該差值若大于100 nm,則認為該熒光蛋白具有大斯托克斯位移的特性。部分熒光蛋白具有大斯托克斯位移的特性。mAmetrine是一個黃色熒光蛋白,其激發(fā)峰波長λex=406 nm,發(fā)射峰波長λem=526 nm,斯托克斯位移達120 nm。mAmetrine大斯托克斯位移的特性源自激發(fā)態(tài)質(zhì)子轉(zhuǎn)移(ESPT)和π-π
2、電子與發(fā)光團之間的堆積相互作用。但是,其熒光發(fā)射的激發(fā)態(tài)質(zhì)子轉(zhuǎn)移具體路徑和機制尚未知。為了更好地理解mAmetrine的功能及ESPT或者其他途徑對大斯托克斯位移的作用,我們利用懸滴蒸汽擴散法進行mAmetrine蛋白結(jié)晶,然后通過蛋白結(jié)晶學方法確定其晶體結(jié)構(gòu)。其中涉及到一系列的步驟:基因克隆,表達,大量純化,結(jié)晶,衍射數(shù)據(jù)的采集、整合和提煉,原子位置的確定等等。我們得到的mAmetrine的三維結(jié)構(gòu)的晶體分辨率達2.1?,其結(jié)果可用于
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