胸腺五肽的固相合成及免疫學(xué)初步研究.pdf

1、以H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH為序列的胸腺五肽(TP5)是胸腺生成素II（Thymopoietin II）中第32～36位的氨基酸殘基片段，它保留了胸腺生成素II原有的生物活性，對機體的免疫系統(tǒng)具有雙向調(diào)節(jié)作用，現(xiàn)已作為藥物投放市場。本文研究了固相法合成胸腺五肽，并對合成的多肽進(jìn)行理化檢測，研究了其純度及活性。主要內(nèi)容如下： ⑴采用Fmoc固相肽合成法，通過C18反相HPLC分析柱摸索純化條件，以C18反相H

2、PLC制備柱純化。將制備的TP5樣品旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)以除去殘存的乙腈、三氟乙酸等，經(jīng)凍干后制成白色粉末，以質(zhì)譜儀測定其分子量，以反相HPLC分析其純度，以E玫瑰花實驗檢測其生物活性。 ⑵采用小鼠免疫抑制模型，分別測定了不同劑量TP-5對免疫抑制小鼠的脾指數(shù)、胸腺指數(shù)、巨噬細(xì)胞吞噬功能、體內(nèi)T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能、IL-2水平、血清溶血素含量等指標(biāo)的影響；同時體外培養(yǎng)正常小鼠脾細(xì)胞，分別以不同濃度的TP-5處理，然后測定大鼠的脾指數(shù)、胸腺指數(shù)

3、，觀察脾臟和胸腺的病理組織學(xué)變化及T淋巴細(xì)胞亞群等指標(biāo)的改變。 ⑶共合成三批胸腺五肽，純化后制備成凍干粉末。精肽產(chǎn)量分別為27 mg，34 mg，32 mg。質(zhì)譜檢測證明合成TP-5分子量為679.8，與理論分子量相符。反相HPLC測定其純度大于95％，表明該純化方法有效。三批樣品的玫瑰花結(jié)百分率均大于10％，證明合成的TP-5有生物活性。 ⑷活性測定表明，濃度為0.2 mg/kg、0.4 mg/kg、0.8 mg/kg