胸腺免疫抑制五肽(TIPP)的抗癌活性研究.pdf

1、研究目的:
　　癌癥，是一類細(xì)胞異常生長且不受控制，并且可以滲透或擴(kuò)散到身體其他部位的疾病。癌癥被認(rèn)為是世界上主要的死亡原因。在2008年全球約有1270萬例癌癥病例和760萬例癌癥死亡，而在2012，全球約有1410萬例新癌癥病例和820萬例癌癥死亡。因此，研究有效且毒性低的抗腫瘤藥物一直是藥物研究的熱點(diǎn)。
　　我們實(shí)驗(yàn)室從20世紀(jì)80年代開始研究胸腺免疫抑制提取物(TISE)。研究發(fā)現(xiàn)，TISE在體內(nèi)體外均能顯著的抑制淋

2、巴細(xì)胞增殖以及免疫和過敏反應(yīng)。此外， TISE可以顯著抑制小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)和大鼠被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)，并且能明顯延長大鼠移植皮膚存活時(shí)間，對(duì)卵蛋白誘導(dǎo)的豚鼠哮喘的發(fā)生也有顯著的抑制作用。為深入研究免疫抑制活性和機(jī)制，對(duì)小牛胸腺來源的TISE通過微球菌核酸酶酶解和反相高效液相色譜法分離，得到了一種新的序列為Ala-Glu-Trp-Cys-Pro的五肽(分子量為604.68)，并命名為胸腺免疫抑制肽(thymic immunosuppress

3、ive pentapeptide，TIPP)。廉倩倩等證明了TIPP能通過阻斷MAPK激酶/NF-κB信號(hào)通路從而有效抑制過敏性小鼠的過敏和炎癥反應(yīng)，他們也證實(shí)了TIPP可以靶向抑制MEK/ERK/NF-κB信號(hào)通路進(jìn)而抑制IgE刺激的RBL-2H3細(xì)胞的活化，同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，TIPP對(duì)人類髓性白血病細(xì)胞K562增殖有顯著的抑制作用。鑒于TIPP的廣泛的藥理學(xué)作用，我們決定研究其抗癌活性。這是對(duì)TIPP的抗癌活性的首次研究?；趯?duì)K562

4、細(xì)胞系的抑制作用和其作用機(jī)制，我們假設(shè)TIPP也可能同樣具有抗癌活性并且可以用于癌癥治療。為了證實(shí)這一假定，我們首先研究了TIPP在細(xì)胞水平的抗癌活性，然后評(píng)價(jià)了其在腫瘤動(dòng)物模型體內(nèi)的治療作用，最后檢測了它對(duì)正常器官的影響。本課題的研究結(jié)果可能會(huì)提供一種癌癥治療的新方法，也為TIPP的進(jìn)一步研究與開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
　　研究方法:
　　1 TIPP體外抗腫瘤活性研究
　　用MCF-7及K562癌細(xì)胞系對(duì)TIPP的細(xì)胞毒性及

5、癌細(xì)胞增殖抑制活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。MCF-7及K562培養(yǎng)至所需要的數(shù)量，然后接種于96孔板。細(xì)胞在經(jīng)過五種不同濃度的TIPP給藥48 h后，加入5 mg/ml MTT(Sigma)溶液20μl繼續(xù)孵育4h。離心后，甲躦藍(lán)沉淀溶解于DMSO150μl。用酶標(biāo)儀檢測該DMSO溶液在570 nm處的吸光值。
　　2 TIPP體內(nèi)抗腫瘤活性研究
　　五周齡雌性Bablc/c裸鼠(無特定病原體的)皮下接種慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系K562細(xì)

6、胞和乳腺癌MCF-7細(xì)胞。裸鼠的平均腫瘤體積達(dá)到100 mm3時(shí)，將接種K562裸鼠隨機(jī)分為3組，將接種MCF-7裸鼠隨機(jī)分為6組，每組7只。對(duì)于K562荷瘤小鼠模型，第1組經(jīng)尾靜脈注射PBS，第2組注射TIPP25 mg/kg(溶解于0.1 ml PBS)，第3組注射放線菌素D0.1 mg/kg。對(duì)于乳腺癌模型，總共6組分別注射PBS、TIPP25 mg/kg、TIPP25 mg/kg聯(lián)合放線菌素D0.1 mg/kg、 TIPP25

7、mg/kg聯(lián)合紫杉醇7.5 mg/kg、紫杉醇7.5mg/kg和放線菌素D。給藥3周，每3天測量腫瘤體積。
　　研究結(jié)果:
　　1 TIPP具有體外抗腫瘤活性
　　增殖實(shí)驗(yàn)表明，TIPP與腫瘤細(xì)胞一起孵育48 h后可顯著地以劑量依賴的方式抑制K562和MCF-7細(xì)胞的增殖。TIPP還可以顯著抑制兩種腫瘤細(xì)胞系的存活率。TIPP對(duì)于兩種不同的腫瘤細(xì)胞株抑制活性表明了TIPP的體外有抗腫瘤活性。
　　2 TIPP體內(nèi)

8、抗腫瘤活性
　　體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明，TIPP可明顯抑制K562和MCF-7腫瘤的生長，體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果與體外細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果完全吻合。TIPP對(duì)K562瘤的抑制率為26％，而對(duì)MCF-7瘤的抑制率達(dá)到54％。在乳腺癌模型中，TIPP也分別與另外兩種有效的抗癌藥物放線菌素D和紫杉醇聯(lián)合給藥，TIPP聯(lián)合放線菌素D組的抑瘤率為58％，TIPP聯(lián)合紫杉醇組的抑瘤率為74％。
　　3 TIPP誘導(dǎo)腫瘤凋亡
　　對(duì)乳腺癌小鼠的肝臟和腫

9、瘤組織進(jìn)行HE染色觀察TIPP的安全性及對(duì)腫瘤的促凋亡能力。結(jié)果表明，TIPP和紫杉醇無論單獨(dú)給藥還是聯(lián)合給藥，都對(duì)肝組織無明顯損害，放線菌素-D無論單獨(dú)還是聯(lián)合TIPP給藥都發(fā)現(xiàn)有輕微的肝毒性;不管TIPP和紫杉醇單獨(dú)還是聯(lián)合給藥都可以顯著的誘導(dǎo)乳腺腫瘤組織細(xì)胞凋亡，放線菌素-D無論單獨(dú)還是聯(lián)合TIPP給藥都引起輕度的腫瘤組織壞死。上述表明TIPP單獨(dú)或與紫杉醇聯(lián)合給藥是一種安全且能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而抑制腫瘤生長的治療方案。
　　結(jié)

10、論及意義:
　　(1)對(duì)TIPP體外抗癌活性進(jìn)行了研究。TIPP顯著抑制K562和MCF-7細(xì)胞的增殖，并且有劑量和時(shí)間依賴性。
　　(2)首次對(duì)TIPP在慢性粒細(xì)胞白血病和乳腺癌小鼠模型的體內(nèi)抗腫瘤作用進(jìn)行了研究。TIPP有效抑制慢性粒細(xì)胞白血病和乳腺癌小鼠腫瘤的生長。
　　(3)對(duì)肝臟和乳腺腫瘤組織進(jìn)行了HE染色和免疫組化檢測。HE染色結(jié)果顯示TIPP通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來抑制乳腺癌。
　　(4)對(duì)于正常組織如肝