蟬花免疫抑制活性成分的分離純化工藝研究.pdf

1、本論文對(duì)蟬花(Cordyceps cicadae)發(fā)酵產(chǎn)物中多球殼菌素的分離純化工藝進(jìn)行了深入的研究。蟬花屬蟲生性藥用真菌，是我國(guó)傳統(tǒng)的一種名貴中藥材。蟬花與冬蟲夏草同屬蟲菌復(fù)合體，且具有相近的藥用價(jià)值。蟬花中主要成分為多球殼菌素，還有核苷類成分、麥角固醇及其過氧化物、環(huán)肽化合物、多糖、蟲草酸等化學(xué)成分，具有非常廣泛的塵物活性。但是天然蟬花受自然條件限制，產(chǎn)量有限，滿足不了國(guó)內(nèi)外日益增長(zhǎng)的需要，已成為稀世之珍，因而貨源奇缺，供不應(yīng)求，價(jià)

2、格昂貴。多球殼菌素(ISP-1)是蟬花中一種重要的具有免疫抑制作用的物質(zhì)，多用于器官移植、自身免疫性疾病等方面。除此之外，多球殼菌素還具有抗真菌、抗動(dòng)脈粥樣硬化等藥理作用。
　　 本課題以液體深層發(fā)酵培養(yǎng)蟬花的發(fā)酵罐規(guī)模放大為基礎(chǔ)，對(duì)蟬花發(fā)酵產(chǎn)物(發(fā)酵液和菌絲體)中多球殼菌素進(jìn)行分離純化研究，最后對(duì)目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行含量鑒定和結(jié)構(gòu)鑒定。此法工藝簡(jiǎn)單，所用溶劑毒性小、安全，為進(jìn)一步研究蟬花及制備醫(yī)藥工業(yè)所需的多球殼菌素提供了依據(jù)。粗分離

3、階段以大孔吸附樹脂為載體，通過靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選出對(duì)多球殼菌素吸附性能最佳的吸附劑，同時(shí)，還對(duì)其靜態(tài)吸附熱力學(xué)特性進(jìn)行研究；通過動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化了大孔吸附樹脂柱色譜的最佳工藝條件；精制階段以柱色譜用硅膠為載體，通過TLC篩選硅膠柱色譜流動(dòng)相并小試進(jìn)行驗(yàn)證；通過抗真菌實(shí)驗(yàn)活性跟蹤，采用NKA大孔吸附樹脂和200～300目柱色譜用硅膠兩步柱色譜對(duì)蟬花中抗真菌活性成分進(jìn)行分離純化；并通過紅外、質(zhì)譜等方法對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定；還對(duì)大孔樹脂

4、吸附多球殼菌素的動(dòng)力學(xué)模型進(jìn)行探討。
　　 通過對(duì)不同類型的大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附性能的考察，優(yōu)選出對(duì)蟬花中多球殼菌素吸附和解析性能最佳的非極性大孔吸附樹脂NKA，對(duì)吸附等溫線的研究表明NKA大孔吸附樹脂對(duì)多球殼菌素的吸附符合Freundlich模型；對(duì)熱力學(xué)特性進(jìn)行研究，結(jié)果表明多球殼菌素在大孔樹脂上的吸附是一個(gè)吸熱過程，吸附是自發(fā)進(jìn)行的；通過對(duì)NKA大孔吸附樹脂動(dòng)態(tài)吸附性能的研究，優(yōu)化了最佳的工藝條件：上樣液濃度3.0 mg/

5、mL，pH 5.5，流速1.5 BV/h，洗脫劑為60％～70％乙醇溶液。分離純化流程依次采用NKA大孔吸附樹脂吸附、硅膠柱色譜系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)證明NKA大孔吸附樹脂用于初步分離蟬花抗真菌活性成分是可行的，主要抗菌活性成分在60％乙醇洗脫液中；進(jìn)一步通過硅膠柱色譜純化得到單一活性成分。綜合TLC、HPLC、FTIR、MS等數(shù)據(jù)確定目標(biāo)物質(zhì)為多球殼菌素單體。在假設(shè)和簡(jiǎn)化的基礎(chǔ)上對(duì)大孔吸附樹脂柱色譜吸附過程進(jìn)行物料衡算，建立了理論穿透曲線模型，結(jié)