蟬花免疫抑制活性成分的分離純化工藝研究.pdf

1、本論文對蟬花(Cordyceps cicadae)發(fā)酵產物中多球殼菌素的分離純化工藝進行了深入的研究。蟬花屬蟲生性藥用真菌，是我國傳統(tǒng)的一種名貴中藥材。蟬花與冬蟲夏草同屬蟲菌復合體，且具有相近的藥用價值。蟬花中主要成分為多球殼菌素，還有核苷類成分、麥角固醇及其過氧化物、環(huán)肽化合物、多糖、蟲草酸等化學成分，具有非常廣泛的塵物活性。但是天然蟬花受自然條件限制，產量有限，滿足不了國內外日益增長的需要，已成為稀世之珍，因而貨源奇缺，供不應求，價

2、格昂貴。多球殼菌素(ISP-1)是蟬花中一種重要的具有免疫抑制作用的物質，多用于器官移植、自身免疫性疾病等方面。除此之外，多球殼菌素還具有抗真菌、抗動脈粥樣硬化等藥理作用。
　　 本課題以液體深層發(fā)酵培養(yǎng)蟬花的發(fā)酵罐規(guī)模放大為基礎，對蟬花發(fā)酵產物(發(fā)酵液和菌絲體)中多球殼菌素進行分離純化研究，最后對目標物質進行含量鑒定和結構鑒定。此法工藝簡單，所用溶劑毒性小、安全，為進一步研究蟬花及制備醫(yī)藥工業(yè)所需的多球殼菌素提供了依據。粗分離

3、階段以大孔吸附樹脂為載體，通過靜態(tài)吸附實驗，優(yōu)選出對多球殼菌素吸附性能最佳的吸附劑，同時，還對其靜態(tài)吸附熱力學特性進行研究；通過動態(tài)吸附實驗，優(yōu)化了大孔吸附樹脂柱色譜的最佳工藝條件；精制階段以柱色譜用硅膠為載體，通過TLC篩選硅膠柱色譜流動相并小試進行驗證；通過抗真菌實驗活性跟蹤，采用NKA大孔吸附樹脂和200～300目柱色譜用硅膠兩步柱色譜對蟬花中抗真菌活性成分進行分離純化；并通過紅外、質譜等方法對目標化合物進行結構鑒定；還對大孔樹脂

4、吸附多球殼菌素的動力學模型進行探討。
　　 通過對不同類型的大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附性能的考察，優(yōu)選出對蟬花中多球殼菌素吸附和解析性能最佳的非極性大孔吸附樹脂NKA，對吸附等溫線的研究表明NKA大孔吸附樹脂對多球殼菌素的吸附符合Freundlich模型；對熱力學特性進行研究，結果表明多球殼菌素在大孔樹脂上的吸附是一個吸熱過程，吸附是自發(fā)進行的；通過對NKA大孔吸附樹脂動態(tài)吸附性能的研究，優(yōu)化了最佳的工藝條件：上樣液濃度3.0 mg/

5、mL，pH 5.5，流速1.5 BV/h，洗脫劑為60％～70％乙醇溶液。分離純化流程依次采用NKA大孔吸附樹脂吸附、硅膠柱色譜系統(tǒng)，實驗證明NKA大孔吸附樹脂用于初步分離蟬花抗真菌活性成分是可行的，主要抗菌活性成分在60％乙醇洗脫液中；進一步通過硅膠柱色譜純化得到單一活性成分。綜合TLC、HPLC、FTIR、MS等數據確定目標物質為多球殼菌素單體。在假設和簡化的基礎上對大孔吸附樹脂柱色譜吸附過程進行物料衡算，建立了理論穿透曲線模型，結