蟬花發(fā)酵生產(chǎn)免疫活性組分ISP的研究.pdf

1、蟬花(Cordyceps cicadae)是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴藥用蕈菌(medicinal mushroom)。因其與冬蟲(chóng)夏草一樣同屬蟲(chóng)菌復(fù)合體，且含有相近的化學(xué)成分，所以醫(yī)家常作冬蟲(chóng)夏草的代用品，具有極高的藥用價(jià)值。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，ISP是其重要的生物活性組分，具有顯著的免疫抑制作用，其中主要成分為多球殼菌素(ISP-1)。無(wú)論在細(xì)胞生長(zhǎng)周期，對(duì)環(huán)境的污染還是產(chǎn)物的積累方面，發(fā)酵培養(yǎng)蟬花生產(chǎn) ISP都具有其獨(dú)特的優(yōu)越性，具有重要的應(yīng)用價(jià)

2、值。本論文研究了大孔吸附樹(shù)脂分離純化蟬花ISP的洗脫工藝，并建立起一種新的快捷有效測(cè)定ISP的方法。在此基礎(chǔ)上，為獲得高產(chǎn)ISP的最佳培養(yǎng)條件，考察了培養(yǎng)基碳源和氮源對(duì)蟬花細(xì)胞生長(zhǎng)和ISP生產(chǎn)的影響，并且通過(guò)對(duì)碳源和氮源的優(yōu)化，顯著提高了蟬花發(fā)酵生產(chǎn) ISP的產(chǎn)量。
　　(1)研究了大孔吸附樹(shù)脂分離純化蟬花ISP的洗脫工藝，探討了乙醇解吸濃度對(duì)分離純化效果的影響。采用薄層色譜對(duì)ISP的分離純化進(jìn)行定性的跟蹤檢測(cè)，并使用HPLC-M

3、S聯(lián)用確證了我們的結(jié)論。建立起蟬花ISP的分離純化工藝為：選用NKA型非極性大孔吸附樹(shù)脂對(duì)其進(jìn)行分離純化，上柱液以1BV/h的速度流過(guò)樹(shù)脂，待吸附平衡后，用4BV的水以2BV/h的速度淋洗樹(shù)脂，再用4BV的50％乙醇以2BV/h的速度淋洗樹(shù)脂，流出液棄之，然后用95%的乙醇溶液以1BV/h的流速進(jìn)行洗脫，收集4BV的洗脫液，60℃減壓濃縮至干，甲醇溶解，即得ISP類(lèi)次生代謝產(chǎn)物甲醇溶液。將ISP甲醇溶液通過(guò)正丁醇萃取，可顯著提高ISP的

4、含量，達(dá)到蟬花免疫抑制有效部位的標(biāo)準(zhǔn)。
　　(2)使用茚三酮比色法測(cè)定蟬花發(fā)酵液中的ISP的含量，探討了此顯色反應(yīng)的影響因素、反應(yīng)條件，通過(guò)線性和范圍、精密度、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度等指標(biāo)評(píng)價(jià)該方法，并通過(guò)與薄層色譜結(jié)果之比較印證該方法的準(zhǔn)確性，建立起一種快捷有效測(cè)定蟬花免疫活性組分ISP的方法。
　　(3)通過(guò)搖瓶培養(yǎng)，研究了蟬花細(xì)胞生長(zhǎng)和ISP產(chǎn)物積累的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，蟬花細(xì)胞生長(zhǎng)和ISP產(chǎn)量并不同步，分別在第8天和