白英皂苷各組分免疫佐劑活性研究.pdf

1、白英(Solanum Lyratum Thunb)茄科植物的全草,別名白毛藤、毛鳳藤等。其味苦,微寒,入肝、膽經(jīng),具有清熱解毒、祛風化痰、利濕退黃、抗癌等功效,作為傳統(tǒng)中藥治療癌癥已有2000多年的歷史。本課題通過傳統(tǒng)提取分離方法獨步分離到白英總皂苷和其各組分。結(jié)合藥效學實驗對白英中各皂苷組分對模式抗原卵清蛋白(OVA)和重組乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)疫苗的免疫佐劑活性作用進行了研究,并以此來考察白英皂苷各組分中佐劑作用的強弱,找

2、出其中免疫作用最好的組分,為將來進一步分離研究具有具有較強免疫佐劑作用的白英皂苷單體做好準備。實驗共分為三個部分:
　　 1白英皂苷各組分的分離與鑒定。白英中藥材以80％乙醇回流提取,醇提取物經(jīng)乙醚脫脂,以水飽和正丁醇萃取,減壓濃縮得到白英總皂苷?？傇碥战?jīng)大孔樹脂用四個濃度梯度的乙醇進行洗脫分離,得到四個組分A、B、C和D,經(jīng)Molish反應等多種方法鑒定都含有皂苷。
　　 2白英皂苷各組分對OVA免疫佐劑活性研究。采用

3、ELISA檢測白英皂苷各組分對OVA免疫小鼠血清中OVA特異性IgG抗體及抗體亞類IgG1,IgG2a效價的影響。結(jié)果表明白英皂苷各組分均能顯著提高OVA免疫小鼠血清特異性IgG和IgG1,IgG2a效價(P＜0.05或P＜0.01),其中以C組分的佐劑活性作用最優(yōu)。說明白英皂苷各組分能同時顯著促進OVA免疫小鼠Th1型細胞免疫應答和Th2型體液免疫應答。但實驗結(jié)果同時表明,白英各皂苷組分的佐劑活性與各組分極性的大小沒有相關(guān)性,已有的研

4、究已發(fā)現(xiàn)皂苷極性的大小主要與所連接的糖鏈的大小有關(guān),而佐劑活性,主要與所連接的糖基種類有非常重要的關(guān)系。
　　 3白英皂苷各組分對重組乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)疫苗的免疫佐劑活性作用研究。采用ELISA檢測白英皂苷各組分對rHBsAg免疫小鼠血清中的特異性IgG抗體及其IgG1、IgG2a亞類抗體的效價的影響。結(jié)果表明各組分均能顯著提高免疫小鼠血清中特異性IgG抗體及其IgG1、IgG2a亞類抗體的效價(P＜0.05或P＜

5、0.01),Alum組也能顯著提高免疫小鼠血清中特異性IgG抗體及其IgG1水平,但在IgG2a亞類抗體方面,與單獨rHBsAg相比,差異不顯著。白英皂苷中的C組分佐劑活性極顯著優(yōu)于Alum(P＜0.01)。表明白英皂苷各組分對rHBsAg免疫小鼠細胞免疫和體液免疫應答均有顯著的佐劑作用,且細胞免疫方面的佐劑活性效果顯著優(yōu)于Alum(P＜0.05 or P＜0.01)。
　　 MTT法檢測了白英皂苷各組分對rHBsAg受免小鼠脾

6、淋巴細胞增殖反應的影響。結(jié)果表明:與單獨rHBsAg組Alum組相比,合各組分均能顯著促進Con A、LPS和rHBsAg誘導的rHBsAg受免小鼠淋巴細胞增殖反應(P＜0.05orP＜0.01),其中C組分的佐劑活性最顯著,明顯優(yōu)于Alum(P＜0.01)。
　　 實驗結(jié)果也表明,對比于Alum佐劑組,白英皂苷各組分對rHBsAg免疫小鼠自然殺傷細胞(NK)和抗原特異性細胞毒型T淋巴細胞(CTL)活性有顯著增強作用(P＜0.0