白英皂苷各組分免疫佐劑活性研究.pdf

1、白英(Solanum Lyratum Thunb)茄科植物的全草,別名白毛藤、毛鳳藤等。其味苦,微寒,入肝、膽經(jīng),具有清熱解毒、祛風(fēng)化痰、利濕退黃、抗癌等功效,作為傳統(tǒng)中藥治療癌癥已有2000多年的歷史。本課題通過(guò)傳統(tǒng)提取分離方法獨(dú)步分離到白英總皂苷和其各組分。結(jié)合藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)白英中各皂苷組分對(duì)模式抗原卵清蛋白(OVA)和重組乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)疫苗的免疫佐劑活性作用進(jìn)行了研究,并以此來(lái)考察白英皂苷各組分中佐劑作用的強(qiáng)弱,找

2、出其中免疫作用最好的組分,為將來(lái)進(jìn)一步分離研究具有具有較強(qiáng)免疫佐劑作用的白英皂苷單體做好準(zhǔn)備。實(shí)驗(yàn)共分為三個(gè)部分:
　　 1白英皂苷各組分的分離與鑒定。白英中藥材以80％乙醇回流提取,醇提取物經(jīng)乙醚脫脂,以水飽和正丁醇萃取,減壓濃縮得到白英總皂苷?？傇碥战?jīng)大孔樹(shù)脂用四個(gè)濃度梯度的乙醇進(jìn)行洗脫分離,得到四個(gè)組分A、B、C和D,經(jīng)Molish反應(yīng)等多種方法鑒定都含有皂苷。
　　 2白英皂苷各組分對(duì)OVA免疫佐劑活性研究。采用

3、ELISA檢測(cè)白英皂苷各組分對(duì)OVA免疫小鼠血清中OVA特異性IgG抗體及抗體亞類IgG1,IgG2a效價(jià)的影響。結(jié)果表明白英皂苷各組分均能顯著提高OVA免疫小鼠血清特異性IgG和IgG1,IgG2a效價(jià)(P＜0.05或P＜0.01),其中以C組分的佐劑活性作用最優(yōu)。說(shuō)明白英皂苷各組分能同時(shí)顯著促進(jìn)OVA免疫小鼠Th1型細(xì)胞免疫應(yīng)答和Th2型體液免疫應(yīng)答。但實(shí)驗(yàn)結(jié)果同時(shí)表明,白英各皂苷組分的佐劑活性與各組分極性的大小沒(méi)有相關(guān)性,已有的研

4、究已發(fā)現(xiàn)皂苷極性的大小主要與所連接的糖鏈的大小有關(guān),而佐劑活性,主要與所連接的糖基種類有非常重要的關(guān)系。
　　 3白英皂苷各組分對(duì)重組乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)疫苗的免疫佐劑活性作用研究。采用ELISA檢測(cè)白英皂苷各組分對(duì)rHBsAg免疫小鼠血清中的特異性IgG抗體及其IgG1、IgG2a亞類抗體的效價(jià)的影響。結(jié)果表明各組分均能顯著提高免疫小鼠血清中特異性IgG抗體及其IgG1、IgG2a亞類抗體的效價(jià)(P＜0.05或P＜

5、0.01),Alum組也能顯著提高免疫小鼠血清中特異性IgG抗體及其IgG1水平,但在IgG2a亞類抗體方面,與單獨(dú)rHBsAg相比,差異不顯著。白英皂苷中的C組分佐劑活性極顯著優(yōu)于Alum(P＜0.01)。表明白英皂苷各組分對(duì)rHBsAg免疫小鼠細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答均有顯著的佐劑作用,且細(xì)胞免疫方面的佐劑活性效果顯著優(yōu)于Alum(P＜0.05 or P＜0.01)。
　　 MTT法檢測(cè)了白英皂苷各組分對(duì)rHBsAg受免小鼠脾

6、淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響。結(jié)果表明:與單獨(dú)rHBsAg組Alum組相比,合各組分均能顯著促進(jìn)Con A、LPS和rHBsAg誘導(dǎo)的rHBsAg受免小鼠淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)(P＜0.05orP＜0.01),其中C組分的佐劑活性最顯著,明顯優(yōu)于Alum(P＜0.01)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明,對(duì)比于Alum佐劑組,白英皂苷各組分對(duì)rHBsAg免疫小鼠自然殺傷細(xì)胞(NK)和抗原特異性細(xì)胞毒型T淋巴細(xì)胞(CTL)活性有顯著增強(qiáng)作用(P＜0.0