多型別HCV-E1表位復(fù)合抗原及CpG ODN免疫佐劑活性初步研究.pdf

1、丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)感染而引起的嚴(yán)重威脅人類健康的傳染病，目前還沒有研制成功有效的疫苗。HCV-E1包膜糖蛋白是HCV的結(jié)構(gòu)蛋白之一，具有重要的受體結(jié)合位點(diǎn)和抗原表位，在病毒感染和宿主免疫過(guò)程中起著十分重要的作用。其分子和功能特性的研究對(duì)HCV預(yù)防和治療的研究有重要意義。本研究通過(guò)構(gòu)建基于HCV-E1包膜糖蛋白B細(xì)胞表位序列，通過(guò)序列比較，選取幾個(gè)代表性基因型的中和性優(yōu)勢(shì)抗原表位的序列，

2、再結(jié)合泛DR輔助性T細(xì)胞表位(PADRE)，一起構(gòu)建嵌合免疫原基因，克隆表達(dá)以獲得HCV-E1免疫原。 同時(shí)，針對(duì)目前人用免疫佐劑的局限性，及具有高效免疫調(diào)節(jié)作用CpG ODN存在體內(nèi)不穩(wěn)定性，序列的多樣性，作用具有物種和個(gè)體差異性等問(wèn)題，研究設(shè)計(jì)并構(gòu)建了一個(gè)具有多個(gè)不同CpG ODN的重組質(zhì)粒，并將多個(gè)串連在一起，以克服CpG多樣性和個(gè)體差異性帶來(lái)的問(wèn)題。同時(shí)，質(zhì)粒在體內(nèi)可有較高的穩(wěn)定性，也可增加組織細(xì)胞對(duì)其的攝取以增加其和受

3、體結(jié)合并激活免疫活性細(xì)胞的機(jī)會(huì)，以使CpG能最大限度地發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用。通過(guò)免疫動(dòng)物，研究其免疫調(diào)節(jié)作用，以期該質(zhì)粒或可用于疫苗免疫佐劑，也可用于感染、癌癥和過(guò)敏性疾病的免疫治療。 根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)思路：(1)合成了包含多個(gè)基因型的具有免疫中和活性的表位基因，利用pBVILl載體，在大腸桿菌中獲得高效表達(dá)，并得到有效純化，獲得了多型別HCV-E1表位免疫原。 (2)構(gòu)建了一系列具有免疫激活作用的pUCpGs質(zhì)粒，根據(jù)該質(zhì)粒