納米-微米球疫苗遞送系統(tǒng)免疫佐劑效應的研究.pdf

1、生物材料疫苗遞送系統(tǒng)的免疫佐劑效應在增強抗原或免疫增強劑的免疫應答方面具有重要作用。較常規(guī)載體，納米/微米球形顆粒疫苗遞送系統(tǒng)可高效包載抗原及免疫增強劑，增強抗原穩(wěn)定性，促進抗原遞呈細胞(antigen presenting cell，APC)對抗原的胞吞，加工，促進抗原的交叉呈遞，引起更強的體液免疫和細胞免疫反應。本課題以高分子生物材料為載體，負載抗原后構建抗原遞送系統(tǒng)，研究其體內外的免疫反應與佐劑機制。研究內容包括以下三個方面:

2、r>　　1)負載百日咳毒素(PTd)的PLGA納米/微米球疫苗的制備及其免疫學機制研究。近年來，美國、澳大利亞、英國等國家，具高致病率、致死率的百日咳大量復發(fā)，研發(fā)有效預防百日咳新型疫苗具有重大意義。以FDA認證，具有良好生物相容性的聚乳酸-聚羥基乙酸(poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA)為載體，以脫毒百日咳毒素(Pertussis Toxin，PTd)為抗原，經(jīng)雙乳化法制備PTdPLGA納米/微米球混

3、合制劑(PTd PLGA NP./MP.)。較裸抗原，PTd PLGA NP./MP.疫苗制劑有效地促進了抗原被巨噬細胞的吞噬。小鼠體內免疫結果表明，較裸抗原，PTd PLGA NP./MP.引起的特異性IgG分泌無顯著性差異，但可是顯著增強脾臟淋巴細胞分泌細胞因子IFN-γ，IL-17。因此，PTd PLGA NP./MP.可引起更加平衡地Th1/Th17免疫應答，可作為替代無細胞型百日咳疫苗的新選擇。
　　(2)酸敏感PEDG

4、納米顆粒遞送卵清白蛋白（Ovalbumin，OVA）及其免疫學效應研究。免疫原性弱及免疫應答持續(xù)時間短是當前亞單位蛋白疫苗的主要缺點。此部分工作中，我們以胍基修飾的甲氧基聚乙二醇-聚（2-（二異丙基氨基）-乙基甲基丙烯酸酯）-聚（2-（胍基）乙基甲基丙烯酸酯）（monomethoxypoly（ethylene glycol）-block-poly(2-(diisopropylamino)ethylmethacrylate)-block-

5、poly(2-(guanidyl)ethylmethacrylate），mPEG-b-PDPA-b-PGEM，PEDG）為載體，該共聚物可在水中自組裝成為納米粒，通過靜電吸附和氫鍵共同作用負載OVA，制成疫苗Nano.OVA。酸性環(huán)境(pH≤6.3)PDPA段發(fā)生質子化致納米粒解體從而實現(xiàn)抗原溶酶體逃逸。Nano.OVA可顯著促進抗原被小鼠骨髓來源的樹突狀細胞BMDCs捕獲，上調BMDCs表面分子CD40，CD86，CCR7的表達并促進

6、其分泌細胞因子IL-12。另外，Nano.OVA促進了巨噬細胞(Raw264.7)分泌細胞因子TNF-α、IL-6、IL-10。納米載體的引入能夠延長抗原在接種部位及回流淋巴結的滯留時間。小鼠皮內免疫接種后，與裸OVA相比，Nano.OVA大大提高了抗原特異性抗體IgG滴度，和細胞因子IFN-γ、IL-2的分泌，引起了以IgG2a為主的Th1型體液免疫應答。Nano.OVA顯著性的增強了OVA的交叉呈遞反應，促進抗原特異性CD8+T細胞

7、增殖?？傊?，酸敏感PEDG納米粒子作為蛋白疫苗遞送系統(tǒng)，可有效引起較強的體液和細胞免疫應答。
　　(3)新型可降解陽離子納米載體的佐劑效應機制。以側鏈胍基修飾的聚乙二醇-聚己內酯(PEG-PCL)為載體，考察表面電荷對陽離子納米粒免疫佐劑效果的影響。經(jīng)研究，陽離子納米粒經(jīng)過細胞膜凹陷小窩介導內吞方式進入BMDCs。表面電荷增加可顯著性上調BMDCs表面分子CD86、CD40、MHCⅡ及CCR7的表達。納米粒負載OVA后，抗原OVA