南荻3個(gè)抗逆相關(guān)NAC轉(zhuǎn)錄因子的功能研究.pdf

1、NAC轉(zhuǎn)錄因子在植物逆境脅迫響應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。南荻（Miscanthus lutarioriparius）為芒屬植物，原產(chǎn)于東亞地區(qū)，具有光合效率高、生物量大、水肥需求量低以及抗逆性強(qiáng)等特性，成為備受關(guān)注的纖維類(lèi)生物能源作物，發(fā)展?jié)摿薮蟆Ｄ壳澳陷叮∕.lutarioriparius）中與逆境脅迫相關(guān)的NAC轉(zhuǎn)錄因子的報(bào)道較少。本文針對(duì)南荻3個(gè)抗逆相關(guān) NAC轉(zhuǎn)錄因子（MlNAC4、MlNAC5和MlNAC12）的功能進(jìn)行了深入研究

2、，結(jié)果如下：
　?。?）通過(guò)序列分析和進(jìn)化分析，MlNAC4、MlNAC5和MlNAC12均屬于A(yíng)TAF亞家族；
　?。?）分別構(gòu)建了MlNAC蛋白融合YFP表達(dá)載體，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)在煙草葉片中瞬時(shí)表達(dá)，表明MlNAC4、MlNAC5和MlNAC12蛋白均定位于細(xì)胞核，符合轉(zhuǎn)錄因子的特性；
　　（3）分別將基因的全長(zhǎng)、N端和C端序列構(gòu)建到酵母表達(dá)載體，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄激活試驗(yàn)，結(jié)果表明：MlNAC4、MlNAC5和MlNAC1

3、2均為轉(zhuǎn)錄激活因子，其轉(zhuǎn)錄激活域均位于C端；
　?。?）通過(guò)hiTAIL-PCR技術(shù)克隆了MlNAC4、MlNAC5和MlNAC12的啟動(dòng)子序列，長(zhǎng)度分別為1296bp、726bp和1465bp，序列分析發(fā)現(xiàn)均包含多種脅迫響應(yīng)相關(guān)的順式作用元件；
　?。?）構(gòu)建了啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)GUS的表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化擬南芥，GUS染色結(jié)果表明，pMlNAC5::GUS主要在下胚軸（5天幼苗）、蓮座葉主脈和莖與葉柄的交匯處、花藥、成熟果莢的離層區(qū)表

4、達(dá)；pMlNAC12::GUS的表達(dá)較為廣泛；
　?。?）構(gòu)建了3個(gè)基因的過(guò)量表達(dá)載體（CaMV35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)）并轉(zhuǎn)化野生型擬南芥，在正常生長(zhǎng)條件下，MlNAC5和MlNAC12過(guò)表達(dá)擬南芥植株均表現(xiàn)出生長(zhǎng)抑制的表型，如植株矮化、開(kāi)花延遲、雄蕊短小、結(jié)實(shí)率降低等；
　　（7）MlNAC5和MLNAC12過(guò)表達(dá)植株表現(xiàn)出對(duì)ABA超敏感，在A(yíng)BA處理?xiàng)l件下，與野生型相比，過(guò)表達(dá)植株種子發(fā)芽率降低更為顯著，主根伸長(zhǎng)也受到更為顯著