石楠擬盤多毛孢(Pestalotiopsis photiniae)次級代謝產(chǎn)物DMMP抗腫瘤機理的初步研究.pdf

1、DMMP(4-(3',3'-dimethylallyloxy)-5-methyl-6-methoxyphthalide)，是從石楠擬盤多毛孢菌(Pestalotiopsis photiniae)次級代謝產(chǎn)物中分離得到的酚肽類化合物。利用MTT比色法計算其對細胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)，結(jié)果得出 DMMP對 HeLa、MCF7、MDA-MB-231和MRC5的IC50分別為36、54、78和123μg/mL，對人宮頸癌HeLa細胞的抑制

2、性最強，而人胚肺成纖維細胞MRC5對DMMP最不敏感。DMMP對HeLa不同時間的IC50分別為24h：36μg/mL、48h：22μg/mL、72h：13μg/mL。通過MTT法檢測DMMP抗腫瘤活性可知DMMP作用細胞具有一定的細胞選擇性，并且有時間依賴性和劑量依賴性。DAPI染色觀察細胞核形態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)細胞出現(xiàn)凋亡特征。JC-1染色結(jié)果顯示DMMP可以誘導HeLa細胞線粒體膜電位發(fā)生變化。又通過流式細胞術(shù)檢測了DMMP作用后的He

3、La細胞的凋亡情況，發(fā)現(xiàn)DMMP可以促進細胞早期凋亡的發(fā)生，并且將HeLa細胞周期抑制在G1/S期。用Western blot免疫印記法和實時熒光定量PCR檢測線粒體通路相關(guān)蛋白發(fā)現(xiàn)截短型Caspase9、Caspase3和AIF蛋白均出現(xiàn)表達量升高的現(xiàn)象，因此可以證實DMMP通過線粒體凋亡途徑使HeLa細胞發(fā)生凋亡。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)可以抑制細胞周期G1/S期的p53蛋白和pRb蛋白相關(guān)信號通路中的蛋白、mRNA表達均發(fā)生變化，說明兩條信號通