體細(xì)胞核移植牛肺臟中印記基因的DNA甲基化狀態(tài)分析.pdf

1、目前，體細(xì)胞克隆雖然在多種哺乳動(dòng)物中獲得后代，但其效率仍然很低，只有2-5％，而且核移植過(guò)程中存在孕期流產(chǎn)率高、圍產(chǎn)期死亡率高、新生兒死亡率高及動(dòng)物出生后發(fā)育異常的問(wèn)題，這嚴(yán)重制約了體細(xì)胞核移植技術(shù)在醫(yī)藥行業(yè)、動(dòng)物生產(chǎn)及拯救瀕危動(dòng)物等方面的應(yīng)用。在體細(xì)胞克隆中，供體核來(lái)自高度分化了的體細(xì)胞，在分化過(guò)程中，體細(xì)胞核獲得了高度特異的DNA和組蛋白的表觀遺傳修飾，而發(fā)生在克隆后幾小時(shí)內(nèi)供體核的表觀遺傳修飾重編程，決定了克隆胚胎的發(fā)育能力。通常

2、認(rèn)為，供體核的不完全或異常重編程導(dǎo)致在發(fā)育過(guò)程中有重要作用的基因異常表達(dá)或沒(méi)有表達(dá)是克隆效率低下的主要原因。
　　 基因組印記是由等位基因表觀遺傳修飾的不對(duì)稱(chēng)導(dǎo)致的基因表達(dá)具有親本選擇性。發(fā)生在DNA‘CG'二核苷酸上的甲基化是基因組印記的一個(gè)普遍調(diào)控方式。大多數(shù)印記基因在調(diào)控胚胎生長(zhǎng)和出生后的發(fā)育中起重要作用。H19基因與胚胎形成和胎兒生長(zhǎng)的調(diào)控有關(guān)；Xist基因是一種非編碼的RNA，在X染色體失活過(guò)程中起著關(guān)鍵性作用；Mas

3、h2基因刺激單核滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖和抑制雙核細(xì)胞形成。
　　 為了探求新生死亡的體細(xì)胞核移植牛中印記基因的DNA甲基化表觀重編程是否充分，本研究利用亞硫酸氫鹽測(cè)序法分析了H19、Xist和Mash2三個(gè)基因在出生48 h內(nèi)死亡的克隆牛和正常對(duì)照牛肺臟中的DNA甲基化狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，H19基因在體細(xì)胞核移植牛中甲基化程度較低，與正常對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)，并且9C3個(gè)體有3個(gè)CpG(第1,2,3位)表現(xiàn)出完全非甲基化；

4、正常對(duì)照組中甲基化模式種類(lèi)復(fù)雜，克隆組中甲基化模式的整齊度較好。Xist基因甲基化程度在體細(xì)胞核移植牛和正常對(duì)照牛中都較高，且沒(méi)有顯著差異。Mash2基因的平均甲基化水平在正常對(duì)照與體細(xì)胞核移植組中分別為20.04±9.99％和5.55±5.36％，組間差異顯著(P<0.05)，尤其是9C5個(gè)體在所檢測(cè)的28個(gè)CpG位點(diǎn)中甲基化百分比為0.4％。
　　 上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)的印記基因DNA甲基化的不完全重編程在體細(xì)