TaEDS1及TaPAD4參與小麥慢葉銹抗性調(diào)控的研究.pdf

1、小麥葉銹菌是一種活體寄生真菌，由葉銹菌引起的小麥葉銹病對(duì)小麥生產(chǎn)危害嚴(yán)重。小麥慢葉銹抗性表現(xiàn)為菌絲擴(kuò)展延緩、吸器數(shù)量減少，該抗性具有數(shù)量遺傳特性，一般沒(méi)有明顯的生理小種專(zhuān)化性，因此有利于保持抗病的穩(wěn)定和持久性。本試驗(yàn)以小麥品種冀麥3號(hào)和5389分別與葉銹菌生理小種260組成慢葉銹性及親和性組合，探討TaEDS1和TaPAD4在慢銹性抗性中的作用及其作用機(jī)制，獲得如下結(jié)果:
　　1.通過(guò)Filourescent Brightener

2、染色明確慢葉銹性組合中葉銹菌的發(fā)育進(jìn)程。
　　2.利用RT-qPCR檢測(cè)TaEDS1和TaPAD4在慢葉銹及親和組合中接菌后不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)特點(diǎn)。結(jié)果表明，在慢銹組合接種后48h，兩基因均被誘導(dǎo)表達(dá)，而在親和組合中，兩個(gè)基因的表達(dá)沒(méi)有明顯變化。
　　3.利用VIGS技術(shù)在慢葉銹小麥品種冀麥3號(hào)葉片沉默TaEDS1和TaPAD4基因，然后接種葉銹菌小種260，發(fā)現(xiàn)TaEDS1及TaPAD4基因沉默后，接種葉銹菌后48h的單侵染

3、點(diǎn)吸器母細(xì)胞數(shù)和接種96h菌絲擴(kuò)展面積均大于對(duì)照組。說(shuō)明TaEDS1及TaPAD4的沉默均可促進(jìn)葉銹菌的發(fā)育;通過(guò)對(duì)沉默葉片進(jìn)行苯胺藍(lán)染色，發(fā)現(xiàn)接種葉銹菌后48h、96h，對(duì)照組中各侵染點(diǎn)寄主葉肉細(xì)胞均有胼胝質(zhì)的產(chǎn)生，而TaEDS1及TaPAD4的沉默葉片均沒(méi)有胼胝質(zhì)的形成。說(shuō)明TaEDS1及TaPAD4是通過(guò)影響寄主胼胝質(zhì)沉積而參與慢葉銹性抗性的調(diào)控。
　　4.構(gòu)建p-Super1300∷TaEDS1-GFP和p-Super13

4、00∷TaPAD4-GFP載體，通過(guò)農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)化煙草，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)蛋白都定位在細(xì)胞核中。
　　5.構(gòu)建酵母雙雜交載體pGADT7-TaPAD4，與實(shí)驗(yàn)室已有的pGBKT7-TaEDS1共轉(zhuǎn)化酵母，結(jié)果顯示TaEDS1和TaPAD4可發(fā)生相互作用。
　　6.構(gòu)建pSPYNE173-TaEDS1、pSPYNE173-TaPAD4、pSPYCE(MR)-TaEDS1、pSPYCE(MR)-TaPAD4雙分子熒光互補(bǔ)載體，通過(guò)農(nóng)