簡介：多種原因均可引起急性肝損傷的發(fā)生，急性肝損傷后的高死亡率和預后差一直是醫(yī)學界的難題。目前如何更好地治療肝損傷仍是國內(nèi)外的一個難點。嚴重的急性肝功能損傷常引起急性肝功能衰竭，致肝功能不可逆轉而危及生命。終末期肝病目前最好的治療方法為原位肝移植，但供體有限及術后免疫排斥反應是兩個主要的障礙。卵圓細胞作為肝臟的干細胞，在肝損傷的修復中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，卵圓細胞不同時間點其增殖率不同，于此提出卵圓細胞在各時間點增殖動力存在差異，EPCAM和PCNA共表達反應卵圓細胞增殖活性，即各時間點EPCAM和PCNA共表達存在差異。卵圓細胞具有多向分化功能，其可分化為肝細胞、膽管細胞及肝癌細胞，甚至胰島細胞等，而在對卵圓細胞標記物的研究中發(fā)現(xiàn)膽管細胞表達CK19，肝母細胞表達AFP，可進行卵圓細胞分化方向的判斷。判斷卵圓細胞的分化研究有助于對肝臟疾病治療進行評估。近年，自噬與凋亡的研究是熱點問題。自噬是一個必不可少的，保守的通過消除蛋白質聚集和破壞細胞器來控制胞漿性質的溶酶體降解過程。自噬與凋亡存在密切關系，兩者相互協(xié)同而對細胞轉歸產(chǎn)生影響。而自噬與凋亡的確切關系仍存在爭議。卵圓細胞作為肝臟干細胞，參與肝臟的再生性修復及疾病演變，卵圓細胞是否存在自噬現(xiàn)象與其分化與增殖有無關聯(lián)本實驗建立了不同的急性肝損傷模型，對卵圓細胞在不同情況下增殖及分化有無差異，并對肝損傷修復中自噬及凋亡進行了初步研究。目的建立不同的肝卵圓細胞增殖模型，觀察其增殖、分化的差異及自噬的變化情況。方法①選擇健康SD大鼠隨機分為五組，分別為四氯化碳組、DGAL組、假手術組、2AAFPH組及空白對照組，建立肝損傷模型。分別于1D、7D、14D、21D處死動物取肝臟組織。②采用HEMATOXYLINEOSINSTAININGHE染色觀察大鼠肝組織病理組織學表現(xiàn)。③免疫熒光技術觀察不同時間點卵圓細胞表達，對陽性細胞進行定量技術分析。④免疫熒光雙標方法觀察卵圓細胞增殖動力變化。⑤免疫組織化學方法觀察卵圓細胞分化標記物AFP、CK19、CKIT的表達，并對其進行定量技術分析判斷其表達有無差異。⑥電鏡下觀察卵圓細胞自噬體超微結構。⑦WESTERNBLOTTING技術觀察自噬標記蛋白LC3Ⅱ蛋白及BECLIN1蛋白表達。⑧原位缺口末端標記法TUNEL檢測凋亡有無變化。結果①與空白對照組相比，應用四氯化碳組大鼠肝臟顏色為暗紅色，質脆，約14天后漸恢復正常DGAL組大鼠肝臟水腫明顯，色暗紅，質脆，約14天后漸恢復正常假手術組大鼠肝臟與之相比未見明顯差異2AAFPH組與之相比，1天肝臟呈淡紅色，質脆，約21天后肝臟大小及顏色恢復正常。②肝臟組織HE結果顯示，與空白對照組相比，四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組可見肝細胞腫脹，排列紊亂，于匯管區(qū)周圍可見細胞形態(tài)小于肝細胞，核質深染，細胞核呈卵圓形的卵圓細胞四氯化碳組和DGAL組炎癥細胞浸潤明顯比2AAFPH組少，卵圓細胞少。③血清肝功能檢測顯示，大鼠造模完成后第1天肝功能同空白對照組相比，假手術組肝功能變化無明顯差異。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組大鼠天門冬氨酸氨基轉移酶（ASPARTATEAMINOTRANSFERASE，AST）、丙氨酸氨基轉移酶（ALANINEAMINOTRANSFERASE，ALT）及堿性磷酸酶ALKALINEPHOSPHATASE，ALP水平明顯升高（AST13397±1435ULVS8247±2186ULP＜00534617±975ULVS8247±2186UL，P＜00555797±1285ULVS8247±2186UL，P＜005ALT47±935ULVS4197±664UL，P＜00510244±504ULVS4197±664UL，P＜0052491±1971ULVS4197±664ULP＜005ALP27033±3609UVS5327±850U，P＜00537933±2155UVS5327±850UP＜00552067±3302UVS5327±850UP＜005），白蛋白ALBUMIN，ALB水平明顯下降（2337±221GLVS3213±373GL，P＜005229±250GLVS3213±373GL，P＜005239±106GLVS3213±373GL，P＜005）。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組之間比較，2AAFPH組肝功能變化較大。④免疫熒光檢測小鼠抗大鼠OV6抗體表達顯示四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組對OV6抗體表達均在1～14天表達呈上升趨勢，14～21天呈下降趨勢，14天表達量最高。假手術組與空白對照組比較表達無明顯規(guī)律性。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組與空白對照組相比OV6抗體的表達在術后1天、7天、14天及21天均明顯增高，尤以14天升高最明顯10967±404VS567±153，P＜00515467±802VS567±153，P＜00529267±850VS567±153，P＜005，假手術組表達無明顯變化267±058VS567±153，P＞005。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組之間相比，2AAFPH組對OV6抗體的表達明顯增高。⑤EPCAM和PCNA熒光雙標檢測反映卵圓細胞增殖動力四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組卵圓細胞增殖率在術后1天、7天、14天及21天呈下降趨勢，并在術后7～14天下降明顯，2AAFPH組在7天時為（828±260）％，在14天則下降至5190±201％，P＜005有統(tǒng)計學意義。假手術組與空白對照組比較無明顯差異。⑥免疫組織化學染色顯示與空白對照組相比，四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組對AFP、CK19及CKIT的表達均增加，且為1～14天呈上升趨勢，14天達高峰值，14～21天呈下降趨勢（AFP、CK19及CKIT四氯化碳組11667±351VS433±231，P＜00510867±651VS267±089P＜00510533±416VS400±100，P＜005DGAL組15533±569VS433±231P＜00514867±603VS267±089P＜00515767±322VS767±208，P＜0052AAFPH組26533±808VS433±231，P＜0052610±1868VS267±089，P＜00523633±651VS400±100P＜005）。假手術組與空白對照組比較無明顯變化（467±115VS433±231，P＞005300±100VS267±089P＞005367±058VS400±100P＞005）。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組對AFP的表達存在差異（F值為260421，P＜001）對CK19的表達有差異（F值為144632，P＜005）對CKIT的表達有差異（F值為273875，P＜005），表現(xiàn)為2AAFPH組對AFP、CK19及CKIT的表達高于其余各組。⑦透射電鏡顯示1天、7天、14天及21天卵圓細胞內(nèi)均未發(fā)現(xiàn)自噬體。1天時電鏡下觀察卵圓細胞體積小，胞核與胞漿比值較高，細胞器組成為散在明顯的微絲束和較多的核糖體及少許粗面內(nèi)質網(wǎng)，7天到21天觀察卵圓細胞體積多較1天時大，此時含有較多的粗面內(nèi)質網(wǎng)及糖元，也可見少量的張力微絲。⑧WESTERNBLOT檢測結果顯示四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組大鼠肝臟組織中BECLIN1及LC3Ⅱ蛋白隨時間變化表達水平明顯增加，各組間對BECLIN1蛋白的表達存在差異（F值為7811，P＜005），各組間對LC3Ⅱ蛋白的表達亦存在差異（F值為27592，P＜005）。假手術組與空白對照組大鼠肝組織BECLIN1及LC3Ⅱ蛋白表達水平與時間變化無明顯變化BECLIN1F值為0413，P＞005LC3ⅡF值為1173，P＞005。⑨TUNEL檢測結果顯示2AAFPH組凋亡細胞表達在1～14天呈上升趨勢，14～21天凋亡細胞表達呈下降趨勢。結論不同模型的急性肝損傷肝臟的損傷程度不同，以2AAFPH組為重，四氯化碳組和DGAL組次之。2AAFPH組肝臟的修復通過肝卵圓細胞的活化來完成。四氯化碳組和DGAL組作為中等程度的肝損傷，其修復主要通過肝細胞的再生及少量卵圓細胞的活化來完成2AAFPH模型卵圓細胞增殖活化數(shù)量多于其他模型，卵圓細胞增殖的高峰出現(xiàn)于術后7～14天卵圓細胞增殖動力在卵圓細胞數(shù)達高峰前開始下降不同卵圓細胞處于不同的分化階段，在不同時間卵圓細胞處于不同的分化階段自噬增強可能促進肝損傷的修復的完成自噬可能抑制肝損傷大鼠肝細胞的凋亡。

簡介：納米材料具有獨特的物理和化學性質，如大的比表面積、高的催化活性和生物相容性，已被廣泛地用于催化、能源、生物和分析等領域。隨著傳統(tǒng)的物理和化學制備納米材料方法的發(fā)展，近年來采用生物方法制備和組裝納米結構材料的研究引起了廣泛的關注。生物合成的納米材料因富集大量生物活性分子被賦予獨特的物理化學特性、生物活性以及良好的分散性和穩(wěn)定性，使其在生物化學等領域具有廣泛的應用前景。目前，已有多種生物包括細菌、放線菌、真菌以及一些高等植物用于合成金、銀、硫化鎘、硫化鋅以及磁性氧化鐵等納米材料。與此同時，實現(xiàn)納米材料尺寸、形貌生物可控合成也成為納米生物合成新技術前沿研究領域之一。在本研究小組已有的納米生物技術研究工作基礎上，本論文瞄準這一前沿研究方向，開展了納米材料生物可控合成技術的研究。以4株真菌包括青霉PENICILLIUMSP、出芽短梗霉AUREOBASIDIUMPULLULAN、鐮刀菌FUSARIUMSP及尖孢鐮刀霉FUSARIUMOXYSPUM和尖葉擬船蘚植物DOLICHOMITRIOPSISDIVERSIFMIS為生物材料，研究了不同真菌合成AU納米顆粒的生化合成機制；發(fā)展了細胞內(nèi)調控合成不同尺寸AU納米顆粒新方法；探索了DDIVERSIFMIS植物細胞外調控合成不同形貌AU納米材料的規(guī)律；并進一步考察了富集不同生物活性分子AU納米顆粒的細胞生物學效應，以及對腫瘤細胞毒性作用機制。以期為生物調控合成納米材料基礎性研究和進一步應用提供有益的探索。本論文研究工作具體包括以下幾方面1不同真菌合成AU納米顆粒生化合成機制研究利用環(huán)境分離的APULLULANS、FUSARIUMSP及FOXYSPUM3株真菌發(fā)展了真菌細胞內(nèi)合成AU納米材料的生物方法，并對其合成的生化合成機制進行了比較分析。將APULLULANS、FUSARIUMSP和FOXYSPUM細胞與氯金酸共孵育，3株真菌均可細胞內(nèi)合成AU納米顆粒；生化成分分析及FTIR光譜表征發(fā)現(xiàn)，A。PULLULANS細胞以還原糖為生物活性分子介導細胞內(nèi)AU納米顆粒合成，而FUSARIUMSP及FOXYSPUM以蛋白質為生物活性分子介導細胞內(nèi)AU納米顆粒組裝進一步SDSPAGE蛋白質電泳分析表明，F(xiàn)USARIUMSP細胞內(nèi)分子量為100KDA，25KDA和19KDA的蛋白質參與AU納米顆粒合成，而FOXYSPUM細胞內(nèi)分子量為25KDA和19KDA蛋白質參與AU納米顆粒合成，APULLULANS合成的AU納米顆粒不存在蛋白質。研究結果將揭示3株真菌細胞不同的生物活性分子介導了AU納米材料的合成。通過采用LCMSMS法對蛋白質分子進行鑒定，結果表明FUSARIUMSP參與合成的AU納米顆粒的3個蛋白質分別為脂膜ATP酶PLASMAMEMBRANEATPASE、3葡聚糖結合蛋白3GLUCANBINDINGPROTEIN及3磷酸甘油脫氫酶GLYCERALDEHYDE3PHOSPHATEDEHYDROGENASE，這些蛋白均為細胞能量代謝相關蛋白。細胞超薄切片表征發(fā)現(xiàn)，細胞內(nèi)合成的AU納米顆粒均存在真菌細胞液泡中。時間動力學TEM結果表明，還原糖易于合成球形、單分散性AU納米顆粒，蛋白質易于介導AU納米顆粒聚合體的組裝。2基于溫度調控真菌細胞內(nèi)合成不同尺寸AU納米顆粒研究以溫度為調控因子，利用環(huán)境分離的真菌PENICILLIUMSP發(fā)展了一種細胞內(nèi)調控合成尺寸可控的AU納米顆粒新方法。將真菌PENICILLIUMSP細胞與氯金酸共培育后，可在細胞內(nèi)合成球形的、單分散性的AU納米顆粒，粒徑分布1835NM。合成動力學TEM表征發(fā)現(xiàn)，細胞吸收反應溶液AUCL4，在細胞內(nèi)首先被還原形成AU核，再組裝成AU納米顆粒。生物組分分析結果表明，PENICILLIUMSP細胞內(nèi)還原糖為活性組分介導細胞內(nèi)AU納米顆粒的合成。通過控制合成反應溫度，在4℃條件下，PENICILLIUMSP細胞可細胞內(nèi)合成410NM粒徑的AU納米顆粒。在28℃則合成2037NM粒徑顆粒，在不恒定的溫度條件下，PENICILLIUMSP細胞則合成多分散性的AU納米顆粒。TEM結果表明，純化的AU納米顆粒也表現(xiàn)為球形、單分散性等相似的特征。FTIR光譜表征表明，純化的AU納米顆粒存在1405CM1多糖羰基伸縮振動。研究結果揭示通過控制反應溫度條件，可實現(xiàn)真菌細胞內(nèi)對納米顆粒的尺寸控制。3基于PH調控植物細胞外合成不同形貌AU納米顆粒研究利用尖葉擬船蘚DDIVERSIFMIS植物體為生物材料，以PH為調控因子，發(fā)展了一種細胞外生物調控合成AU納米顆粒的新方法。將氯金酸鈉與過夜浸泡于不同PH溶液的蘚植物體混合液共孵育后，在PH36條件下，蘚植物體可合成球形、三角形、立方體等形貌的AU納米顆粒。生物組分分析發(fā)現(xiàn)，蘚植物蛋白質為活性分子介導AU納米顆粒合成。PAGE分析表明，該蛋白質分子量為71KDA、等電點PI49。圓二色譜CIRCULARDICHROISM，CD表征發(fā)現(xiàn)，在不同的PH溶液中該蛋白質的二級構象可以被誘導而改變。在PH3溶液中其二級結構為無規(guī)則卷曲；PH4溶液中其二級結構為中間過渡類型；PH5溶液中其二級結構為Α螺旋；而在PH6條件下其二級結構為無規(guī)則卷曲，并伴隨三級的改變。進一步的重組裝實驗結果揭示，該蘚植物蛋白在AU納米顆粒合成過程起著模板作用，并控制不同形貌AU納米顆粒的組裝。在PH3溶液中具有無規(guī)則卷曲二級結構的蛋白質，可組裝三角形和球形兩種形貌AU納米顆粒，多分散性特征。PH4溶液中具有中間過渡類型二級結構的蘚蛋白質，可組裝球形AU納米顆粒，單分散性好。PH5溶液中具有Α螺旋二級結構的蘚蛋白質，可組裝立方體形形貌的AU納米顆粒。在PH6條件下具有無規(guī)則卷曲二級結構，并伴隨三級改變的蛋白質，組裝的AU納米顆粒為多分散性的球形。研究結果揭示通過控制合成PH條件，可實現(xiàn)以蛋白質為活性分子的生物調控合成不同形貌納米顆粒。4不同真菌合成的AU納米顆粒細胞生物學效應研究利用PENICILLIUMSP、FUSARIUMSP和FOXYSPUM真菌調控合成了不同生物分子組成的球形AU納米顆粒，研究了3種AU納米顆粒引起的肝癌細胞株BEL7404細胞生物學形態(tài)變化，細胞粘附性改變，以及對細胞活性影響等一系列細胞生物學效應。實驗結果揭示，不同生物分子組成納米顆粒引起的細胞生物學效應差異很大。PENICILLIUMSP細胞合成具有還原糖組成的AU納米顆粒對供試細胞BEL7404有較強的毒性，IC50為51ΜG。而FUSARIUMSP和FOXYSPUM細胞合成的具有蛋白質組成的AU納米顆粒對供試細胞BEL7404無毒性，具有較好的生物相容性?？梢?，利用生物合成不同生化組成的AU納米顆粒有望發(fā)展為納米載體或者潛在納米藥物應用于生物醫(yī)學等領域。5基于蘚植物合成的蛋白質AU納米顆粒細胞毒性機制研究利用植物尖葉擬船蘚DDIVERSIFMIS合成了具有蛋白質組成的球形AU納米顆粒，研究了蛋白質AU納米顆粒與肝癌細胞株BEL7404及肝正常細胞株L02孵育后引起的細胞生物學效應和細胞毒性及機制。實驗結果發(fā)現(xiàn)，蘚合成具有蛋白質組成的AU納米顆粒對細胞的毒性作用具有一定的選擇性，對肝癌細胞株BEL7404具有較強的毒性作用，且具有濃度依賴性。但對肝正常細胞株L02毒性較小于肝癌細胞株。進一步將蛋白質AU納米顆粒與MCF7及HELA等腫瘤細胞共孵育，結果發(fā)現(xiàn)該顆粒對這2種腫瘤細胞均較強的毒性作用。利用流式細胞術分析該納米顆粒的選擇性作用機制表明，蛋白質AU納米顆粒對細胞毒性作用源于蘚蛋白質，當?shù)鞍踪|AU納米顆粒的蛋白質解離后，其AU溶液對細胞沒有毒性。該實驗結果將為蘚植物合成的蛋白質納米顆粒發(fā)展為用于腫瘤治療的納米組合藥物提供實驗參考。

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簡介：糖蜜是制糖工業(yè)的副產(chǎn)物，具有生產(chǎn)集中，產(chǎn)量大等特點。目前糖蜜主要用來發(fā)酵生產(chǎn)酒精。本研究主要是對糖蜜酒精酵母細胞固定化進行多尺度的優(yōu)化篩選發(fā)酵性能優(yōu)良的固定化酵母菌選擇優(yōu)良的固定化載體優(yōu)化載體固定化成型工藝對固定化酵母發(fā)酵條件進行優(yōu)化。主要研究結果如下1通過比較六株釀酒酵母菌篩選出最適合用于糖蜜酒精發(fā)酵的固定化酵母菌株以淀粉酵母A為對照菌株，對由AS21190馴化篩選得到的A8、A43、A61、B2、D4五株酵母菌進行菌落形態(tài)特征比較、發(fā)酵性能等方面比較，結果表明糖蜜酒精酵母菌A43、A61、D4三株酵母菌具有典型的酵母菌落形態(tài)，發(fā)酵性能強，發(fā)酵糖蜜酒精含量高，殘?zhí)橇康?，尤其是糖蜜酒精酵母A43表現(xiàn)出很強的發(fā)酵能力，酒精含量高達到1118％VV，殘?zhí)橇康蜑?13GL且優(yōu)于對照用淀粉酒精酵母A，綜上實驗結果選擇糖蜜酒精酵母A43為最佳固定化酵母源。2經(jīng)過對海藻酸鈣、聚乙烯醇、聚乙烯醇海藻酸鈣三種固定化載體從機械強度、傳質性能、發(fā)酵性能等方面的比較，得出聚乙烯醇海藻酸鈣固定化載體機械強度高，優(yōu)良的傳質性能，發(fā)酵性能強，且價廉易得，具有很好的工業(yè)化應用前景。比較不同的處理方法和成型工藝手段對復合材料固定化酵母的影響，通過單因素和正交試驗優(yōu)化制備復合材料聚乙烯醇海藻酸鈣固定化載體的工藝條件聚乙烯醇濃度9％WV、海藻酸鈉濃度10％WV，制備成顆粒狀的固定化酵母。從實際工業(yè)化生產(chǎn)和糖蜜酒精連續(xù)化發(fā)酵工藝兩方面方面考慮，決定采取反復冷凍解凍的固定化方法制備成蜂窩煤狀的固定化酵母。按照最優(yōu)工藝制備的復合材料聚乙烯醇海藻酸鈣固定化糖蜜酒精酵母的機械強度為3752GMM2，傳質系數(shù)為01935，酒精含量1218％。3選取發(fā)酵初始糖蜜的錘度、發(fā)酵PH值、發(fā)酵溫度、固定化酵母接種量四個影響因素，通過單因素實驗選用表L1645進行正交實驗優(yōu)化固定化酵母的發(fā)酵條件，確定以聚乙烯醇海藻酸鈣固定化糖蜜酒精酵母發(fā)酵糖蜜酒精的最優(yōu)發(fā)酵條件發(fā)酵初始糖蜜的錘度32°BX、發(fā)酵溫度34℃、固定化酵母接種量4％WV、發(fā)酵PH值35。其中發(fā)酵初始糖蜜的錘度對發(fā)酵的影響最為顯著，發(fā)酵液的PH值對發(fā)酵的影響效果不顯著。

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簡介：中圖分類號UDC】S26‘90學校代碼10055密級公開尚越大法博士學位論文納米氧化鋅對海馬神經(jīng)元電生理特性的影響及對PCI2細胞生物學效應的機制研究INFLUENCESOFNANOPARTICLEZINCOXIDEINTHEELECTROPHYSIOLOGICALPROPERTIESOFHIPPOCAMPALNEURONSANDTHEMECHANISMOFTHEBIOLOGICALEFFECTSONPC12CELLS評閱人南開大學研究生院二。一O年五月南開大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師指導下進行研究工作所取得的研究成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本學位論文的研究成果不包含任何他人創(chuàng)作的、已公開發(fā)表或者沒有公開發(fā)表的作品的內(nèi)容。對本論文所涉及的研究工作做出貢獻的其他個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本學位論文原創(chuàng)性聲明的法律責任由本人承擔。學位論文作者簽名趙量霞2010年6月3日非公開學位論文標注說明根據(jù)南丌大學有關規(guī)定，非公開學位論文須經(jīng)指導教師同意、作者本人申請和相關部門批準方能標注。未經(jīng)批準的均為公丌學位論文，公開學位論文本說明為空白。論文題目申請密級口限制≤2年口秘密≤10年口機密≤20年保密期限20年月日至20年月日審批表編號批準日期20年月同限制★2年最長2年，可少丁2年秘密★10年最長5年，可少于5年機密★20年最長10年，可少于10年

簡介：納米材料因在光催化、電化學、生物醫(yī)學等領域都有著廣泛的應用前景，成為當今社會人們研究探索的熱點問題。納米硒因具有較高的生物活性、抗氧化性和低毒性被應用于機體新陳代謝和生物醫(yī)學等領域，并取得了很好的臨床結果；硫則是在光催化方面有很大的優(yōu)勢。硫元素因與硒元素同主族，也應該存在著很好的生物活性。論文應用水熱法與歧化法分別合成單質納米SE、S。利用X射線衍射和元素能譜對產(chǎn)物的組成進行分析。利用掃描電鏡和透射電鏡對樣品的形貌進行研究。利用熱重與紅外光譜等手段對其穩(wěn)定性能進行分析。通過研究單質納米SE、S在體外對細胞活性的影響，推測可能的反應機理。此論文主要研究成果總結如下（1）納米SE的制備和抗腫瘤活性研究采用水熱法制備納米SE，以牛血清白蛋白做表面活性劑，通過改變反應時間來調控納米SE顆粒的粒徑大小。取納米硒在體外作用于乳腺癌與肝癌細胞，結果顯示，納米SE對肝癌細胞的抑制作用隨著濃度的增加和時間延長而增強，對乳腺癌細胞影響不大。（2）單質S的制備和抗腫瘤活性研究在酸性條件下，以硫代硫酸鈉為硫源，利用表面活性劑的添加與否控制合成單質S。由X射線衍射圖中衍射峰的變化，可得知兩組樣品為兩種形態(tài)，即結晶狀態(tài)與無定形狀態(tài)。取無定形單質硫在體外作用于肝癌細胞與正常細胞，結果顯示，單質硫對肝癌細胞的抑制作用隨著濃度的增加和時間延長而增強，對正常細胞影響不明顯。

簡介：目的探討人體瘢痕疙瘩KELOIDKD中是否存在多能間充質干細胞MSCS并對其進行分離培養(yǎng)及初步研究其生物學特性。方法采用兩步酶消化法從人的瘢痕疙瘩中分離培養(yǎng)瘢痕疙瘩來源間充質干細胞KELOIDDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLKMSCS觀察其貼壁、增殖等生物學特性應用流式細胞技術FCM檢測培養(yǎng)細胞的表面標志CD29、CD34、CD44、CD45及CD90的表達以及檢測細胞周期通過免疫細胞化學法檢測該細胞CK19、OCT4、波形蛋白的表達情況逆轉錄多聚酶鏈反應REALTIMEPOLYMERASECHAINREACTIONRTPCR檢測細胞OCT4MRNA的表達情況實驗同時對該細胞進行成骨細胞、成軟骨細胞以及成脂細胞多向誘導分化能力鑒定。結果從人的瘢痕疙瘩中分離出間充質樣干細胞原代細胞形態(tài)多為長梭形或多角形呈放射狀集落樣生長體外培養(yǎng)連續(xù)傳代后形態(tài)較為均一排列不規(guī)則以梭形為主細胞生長曲線顯示細胞開始12天生長較慢從第三天左右細胞生長增快到第8天左右生長進入平臺期細胞周期顯示細胞群中有6518±396％的細胞處于G0G1期S期的細胞占692±182％G2M的細胞占2790±219％流式細胞儀檢測細胞表型分析表明該細胞均高表達CD29、CD44、CD90等間充質干細胞表面標志、不表達CD34、CD45等造血干細胞表面標志且原代及P3代細胞無明顯變化RTPCR法檢測多能干細胞標志物OCT4表達呈陽性免疫細胞化學法檢測間充質細胞標志物波形蛋白、多能干細胞標志物OCT4呈陽性表達、上皮細胞標志物CK19呈陰性表達多向誘導分化實驗顯示該細胞可以向成骨細胞、軟骨細胞和成脂細胞分化具有多向分化潛能。結論人體瘢痕疙瘩內(nèi)存在間充質樣干細胞這種干細胞可能在瘢痕疙瘩發(fā)生中發(fā)揮重要作用。

簡介：背景和目的隨著納米技術日新月異的進步，各種各樣的納米產(chǎn)品充斥著人們的生產(chǎn)生活。但對于納米粒子如何侵入機體細胞，如何移行分布，代謝排出，及其產(chǎn)生的生物醫(yī)學效應等問題仍存在爭議。本實驗采用目前研究較廣泛的ACNP、SWCNT、QDS納米粒子，體外研究其對HELA細胞的影響，探討侵入細胞的方式及作用機制。體內(nèi)研究其在小鼠體內(nèi)的移行分布，組織損傷，探討體內(nèi)的排泄方式，為進一步研究納米粒子的生物安全性及臨床前研究提供依據(jù)。方法MTT法、LDH法及AFM觀察評價ACNP、SWCNT、QDS對HELA細胞的毒性；胞吞抑制劑和4℃下低溫孵育處理細胞后TEM觀察ACNP、SWCNT、QDS跨膜方式及對HELA細胞超微結構的影響；FCM檢測細胞的凋亡；SCGE檢測三種納米粒子對HELA細胞遺傳物質的損傷；通過尾部靜脈注射，組織切片研究納米粒子在小鼠體內(nèi)的移形分布及對組織的損傷情況，TEM觀察其可能的排泄器官。結果ACNP、SWCNT、QDS有一定的細胞毒性并與時間和劑量成正相關。細胞形態(tài)觀察顯示，ACNP、SWCNT均能引起HELA細胞體積縮小，細胞貼壁能力下降，游離細胞增多等現(xiàn)象。AFM結果顯示，ACNP吸附在細胞膜表面，看不清完整的細胞形態(tài)；SWCNT引起細胞皺縮、分泌的黏附物減少；QDS引起細胞高度變低，且細胞膜表面有很多不規(guī)則凹陷。ACNP、SWCNT、QDS均能誘導HELA細胞凋亡及DNA損傷。不同方式處理細胞后TEM觀察發(fā)現(xiàn)，ACNP能通過細胞膜進入細胞質進而進入細胞核，引起細胞表面微絨毛消失，線粒體腫脹，細胞核皺縮等現(xiàn)象；尺度較短的SWCNT進入細胞能引起細胞核固縮，空泡增多等現(xiàn)象，經(jīng)不同方式處理細胞后未發(fā)現(xiàn)有SWCNT進入細胞內(nèi)部；QDS結合在細胞膜上，不能進入細胞內(nèi)部，但也能引起細胞線粒體腫脹，細胞質內(nèi)的空泡增多等現(xiàn)象。體內(nèi)試驗結果顯示，三種納米粒子在肝、脾、肺中分布較多并造成肝實質細胞變性，細胞間距變大；肺泡處細胞充血；而對心、脾、腦、空腸、回腸、結腸等組織結構沒有產(chǎn)生明顯改變組織TEM觀察發(fā)現(xiàn)ACNP可通腎小球濾過，在空腸、回腸、結腸杯狀細胞及絨毛結構中均發(fā)現(xiàn)較多的ACNP且對細胞結構沒有造成明顯影響；SWCNT能機械性的插入細胞內(nèi)的細胞器引起細胞不同程度的損傷，除在結腸中發(fā)現(xiàn)少量的SWCNT外，其他器官未發(fā)現(xiàn)有明顯的SWCNT存在。QDS組中發(fā)現(xiàn)除對小鼠的肺造成出血性損傷外在腎臟中也有較多分布，但對腎臟沒有造成明顯的損傷。結論ACNP、SWCNT、QDS均可抑制HELA細胞的增值、誘導細胞凋亡及產(chǎn)生DNA損傷。其機制可能為，損傷核DNA，破壞細胞膜使膜通透性改變進而造成細胞壞死。ACNP可通過胞吞機制之外的方式進入細胞質，進而進入細胞核；尺寸較小的SWCNT可通過能量依賴的胞吞作用進行跨膜轉運。QDS結合在細胞膜上不受胞吞抑制劑和低溫孵育的影響，也不能進入細胞內(nèi)。三種納米粒子在KM小鼠體內(nèi)代謝、分布不同，損傷程度也不一樣。ACNP主要通過腎臟排泄，也可通過空腸、回腸、結腸等組織排出體外；SWCNT由于縱橫比大、較難排出體外；QDS可能通過腎臟而被清除體外。

簡介：點擊查看更多臍帶間充質干細胞生物學特性及功能研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：隨著納米科技的迅速發(fā)展，多功能納米顆粒為生物成像、納米藥物載體、疾病治療等臨床醫(yī)學應用提供了更加有效的手段。納米顆粒在細胞內(nèi)轉運行為對生物安全以及高效納米藥物載體的構建非常重要，因此研究納米顆粒穿過各種生物障礙比如細胞膜進入細胞、細胞內(nèi)轉運的機制以及納米顆粒的最終歸屬非常關鍵。但是，現(xiàn)在對納米顆粒從一種細胞器轉運到另一種細胞器的過程了解還很欠缺，認識納米顆粒引起的細胞內(nèi)環(huán)境的變化以及納米顆粒轉運過程中伴隨著的細胞作用機制仍然是很大的挑戰(zhàn)。我們利用信號肽修飾EUPOMSPAA納米顆粒并研究其在細胞內(nèi)的轉運行為，對細胞和納米顆粒之間的相互作用有了新的理解。這種納米顆粒適用于生物成像，而且在基于同步輻射的X射線高分辨成像中也有著很大的應用潛力。通過線粒體信號肽的修飾，使納米顆?？梢暂p易的穿過細胞膜，并且成功的靶向到線粒體。而經(jīng)過一段時間后該納米顆粒在溶酶體中出現(xiàn)的幾率顯著增加，因此在不同時間階段納米顆粒在細胞內(nèi)各種細胞器中的分布是動態(tài)變化的。值得注意的是，我們的實驗結果證實，隨著納米顆粒在線粒體上的積累，會對線粒體產(chǎn)生一定程度的損傷，因此引起了線粒體自噬的發(fā)生。通過對相關蛋白進行分析以及線粒體膜電位染色，我們得出這種現(xiàn)象是PARKIN蛋白介導的、由納米顆粒引起的線粒體膜電位降低導致的。這種納米顆粒引起的細胞自噬反應反過來會影響納米顆粒在細胞內(nèi)的轉運及分布，同時為納米顆粒提供了另一種可供選擇的轉運途徑。在我們的研究工作中發(fā)現(xiàn)的這類納米顆粒和細胞內(nèi)細胞器相互作用的新現(xiàn)象，包括納米材料的生物學效應以及宿主細胞對納米材料代謝過程的影響變化，有可能為發(fā)展新型納米生物技術和納米藥物，并最終為人類健康醫(yī)療服務提供所必要的知識和手段。

簡介：開發(fā)高效低毒的基因轉染載體是基因治療領域中的關鍵技術問題。近年來，憑借其獨特的理化性質，功能化石墨烯在生物醫(yī)學領域引起了人們的廣泛關注，顯示出良好的應用前景。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，與傳統(tǒng)的轉染試劑相比，聚乙二醇與聚乙烯亞胺共同修飾的氧化石墨烯NGOPEGPEI對質粒DNA和SIRNA的轉染效率更加理想，然而在高濃度下仍表現(xiàn)出一定的細胞毒性。因此，本課題將系統(tǒng)研究并揭示其細胞毒性機理，以便將其進一步優(yōu)化，并為開發(fā)出理想的基因轉染載體提供重要的理論依據(jù)。本研究主要內(nèi)容包括⑴對NGOPEGPEI的細胞毒性進行了研究。MTT實驗結果顯示，10ΜGML左右的NGOPEGPEI處理可造成多種細胞活性降低。ANNEXINⅤFITCPI雙染實驗表明該材料的細胞毒性是通過細胞壞死途徑產(chǎn)生，而非細胞凋亡途徑。通過比較MTT實驗與ANNEXINⅤFITCPI雙染實驗的結果，發(fā)現(xiàn)兩種實驗方法的結果存在一定差異，結合其實驗原理，分析得出NGOPEGPEI可能影響了細胞周期。后續(xù)一系列研究表明，NGOPEGPEI引起HELA細胞的S期細胞阻滯現(xiàn)象，且絕大部分死亡細胞處于S期這些細胞因為不能順利完成由S期向G2期的轉變，導致細胞壞死。將細胞同步化在G1期后再經(jīng)NGOPEGPEI處理，發(fā)現(xiàn)，NGOPEGPEI處理組的細胞整個細胞周期變長，且進入S期時有顯著的延遲。⑵對NGOPEGPEI引發(fā)S期細胞阻滯的分子機理進行了深入研究。實驗表明，NGOPEGPEI引起了嚴重的DNA損傷，而且引發(fā)S期檢驗點活化所必需的CDC25A高度磷酸化。免疫印跡的結果表明，NGOPEGPEI處理后的細胞中，CDC25A活化通路中的相關蛋白質，包括ATMATR及其它們對應的底物CHK2和CHK1，其磷酸化水平均顯著提高。此外，NGOPEGPEI引發(fā)的S期細胞阻滯及細胞形態(tài)的改變可被CDC25A磷酸化抑制劑AZD7762所抑制。由以上結果分析可知，NGOPEGPEI進入細胞后，通過某種未知途徑引起DNA損傷，而DNA損傷通過ATMCHK2及ATRCHK1兩條信號通路激活CDC25A，從而激活S期檢驗點，最終引起S期細胞阻滯和細胞周期的延長，嚴重時，造成細胞壞死。⑶揭示了NGOPEGPEI介導的真核細胞壞死的分子機制，為深入探索GO及其衍生物的細胞學效應，尤其是其對真核細胞的細胞周期的影響方面，提供了重要的理論依據(jù)，同時也為GO及其衍生物的改性以成為高效無毒的基因轉染載體提供了重要信息，在納米材料的生物學效應及生物醫(yī)學應用研究等方面有重大理論與實踐意義。

簡介：點擊查看更多不同管徑Ti-TiO2納米管對成纖維細胞和成骨細胞生物學行為的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的觀察碳化二亞胺EDC交聯(lián)改性的脫細胞版納近交系微型豬肌腱的組織形態(tài)變化，檢測其體外降解特性、細胞毒性、免疫原性以及生物力學性能，探討其作為肌腱移植支架材料的可行性，為異種肌腱移植的進一步研究提供實驗依據(jù)。方法1、將取自版納近交系微型豬的趾伸肌腱按不同處理方法分為新鮮肌腱組FT、深低溫凍存肌腱組DFT、單純脫細胞肌腱組SDT和EDC交聯(lián)的脫細胞肌腱組EAT，通過HE染色光鏡觀察、掃描電鏡觀察，比較各處理組肌腱的組織結構，觀察EDC交聯(lián)對肌腱結構的改變；2、各組肌腱加入含Ⅰ型膠原酶60UGML的PBS降解液中，于開始降解后第1、2、3、4、5、6、7天計算降解率，比較各組肌腱降解率；3、提取各組肌腱浸提液，以浸提液為培養(yǎng)基和人成纖維細胞共培養(yǎng)，于培養(yǎng)后第1、2、3、4、5、6、7D用MTT法檢測細胞活性，評價各組肌腱的細胞毒性；4、以各組肌腱浸提液作為抗原，淋巴細胞增殖實驗評價各組肌腱免疫原性；各組肌腱行大鼠皮下包埋術，分別于術后第1、2、3、4周行包埋肌腱HE染色組織學觀察，比較各組炎癥反應；5、檢測各處理組肌腱的拉伸強度、斷裂伸長率和彈性模量，比較生物力學性能。結果1、新鮮肌腱和深低溫凍存肌腱組織結構相似，膠原纖維排列整齊、規(guī)則，纖維間肌腱細胞散在排列；單純脫細胞肌腱腱束粗細不一，結構松散，束間空隙、微孔形成，大小不等，束間相連疏松，未見腱細胞，經(jīng)EDC交聯(lián)后腱束表面光滑，腱束間連接緊密，束間形成形態(tài)大小相似的孔隙狀結構；2、降解后第7天新鮮肌腱、深低溫凍存肌腱、單純脫細胞肌腱和EDC交聯(lián)的脫細胞肌腱降解率分別為25560±0948％、25950±0890％、72154±0926％和23550±0890％，新鮮肌腱、深低溫凍存肌腱和EDC交聯(lián)的脫細胞肌腱三組間兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義P005，而這三組肌腱和單純脫細胞肌腱間相比差異均有統(tǒng)計學意義P005；4、單純脫細胞肌腱和深低溫凍存肌腱相比差異無統(tǒng)計學意義P005，經(jīng)EDC交聯(lián)后單純脫細胞肌腱免疫原性較深低溫凍存肌腱明顯降低P005；5、生物力學檢測結果顯示，單純脫細胞肌腱和深低溫凍存肌腱相比，拉伸強度、彈性模量顯著下降，而斷裂應變顯著增加P005。結論1EDC交聯(lián)改性的版納微型豬脫細胞肌腱，微結構更加緊密、腱束排列有序、形成大小形狀相似的孔隙狀結構；2EDC交聯(lián)改性可提高脫細胞肌腱的抗降解能力；3EDC交聯(lián)改性后的肌腱支架材料無明顯細胞毒性；4EDC交聯(lián)改性可降低脫細胞肌腱的免疫原性；5EDC交聯(lián)可提高脫細胞肌腱材料的拉伸強度、彈性模量，降低斷裂伸長率。