簡介：細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)以細(xì)胞為研究對象，應(yīng)用近代物理學(xué)、化學(xué)、實驗生物學(xué)及分子生物學(xué)的技術(shù)和方法，從細(xì)胞整體水平、亞顯微水平和分子水平三個層面來研究細(xì)胞的結(jié)構(gòu)及其生命活動規(guī)律的科學(xué)。醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)以細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)為基礎(chǔ)，研究和探討人體細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能、發(fā)生、發(fā)展、成長、衰老、死亡的生命活動規(guī)律及其發(fā)病機理和防治的科學(xué)。膜內(nèi)在蛋白膜內(nèi)在蛋白又稱膜整合蛋白質(zhì)或鑲嵌蛋白。占膜蛋白總量的7080，其部分鑲嵌于膜中，以非極性氨基酸與脂雙層膜脂疏水區(qū)共價緊密結(jié)合，不易從膜上分離下來，跨膜蛋白也屬此列。膜外在蛋白膜外在蛋白他們不直接與脂雙層疏水部分直接相連，而通過靜電作用、離子鍵、氫鍵與脂分子極性頭部或膜整合蛋白質(zhì)分子親水部分相互作用間接結(jié)合。主要分布在膜的內(nèi)在表面，為水溶性蛋白質(zhì)。細(xì)胞外被細(xì)胞外被存在于細(xì)胞表面的覆蓋物，富含糖類，也稱糖萼。一般指與質(zhì)膜相連的糖類物質(zhì)，是質(zhì)膜中糖蛋白和糖脂向外延伸的寡糖部分。脂筏模型脂筏模型脂筏是指質(zhì)膜外層富含膽固醇和鞘磷脂，富集而形成有序脂相的微結(jié)構(gòu)域，是一種動態(tài)結(jié)構(gòu)。脂筏像一個蛋白質(zhì)停泊的平臺，其上載有蛋白質(zhì)，與膜信號轉(zhuǎn)到有密切關(guān)系。①許多蛋白質(zhì)聚集于脂筏，便于相互作用②脂筏提供蛋白質(zhì)一個有利于構(gòu)象變化的環(huán)境，形成有效構(gòu)象。通道蛋白通道蛋白由A螺旋構(gòu)成的介導(dǎo)被動運輸?shù)目缒さ鞍?，其形成親水G蛋白蛋白一種鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白，是由Α、Β、Γ三個亞基組成的異三聚體的可溶性的膜蛋白。是一種具有GTP酶活性，在細(xì)胞信號通路中起信號轉(zhuǎn)換器或分子開關(guān)作用的蛋白質(zhì)NONO信號信號NO合成酶NOS催化精氨酸生成NO和瓜氨酸的信號。NOS活性受CA2/鈣調(diào)蛋白調(diào)控。NO是脂溶性的，血管內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞是NO主要生成細(xì)胞。NO功能,激活可溶性GC，刺激CGMP合成，引發(fā)多種生物學(xué)效應(yīng)。受體酪氨酸蛋白激酶受體酪氨酸蛋白激酶本身具有激酶活性，是單次跨膜蛋白，配體與受體結(jié)合導(dǎo)致受體二聚化，二聚體內(nèi)彼此相互磷酸化胞內(nèi)斷落氨酸殘基。內(nèi)膜系統(tǒng)內(nèi)膜系統(tǒng)指位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)在結(jié)構(gòu)、功能、乃至發(fā)生上相聯(lián)系的膜性細(xì)胞結(jié)構(gòu)的總稱。包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基復(fù)合體，溶酶體等細(xì)胞器和胞質(zhì)內(nèi)膜性轉(zhuǎn)運小泡。信號肽信號肽指新合成的蛋白質(zhì)端帶有的由1530個疏水氨基酸組成的肽段，能被SRP識別并引導(dǎo)蛋白質(zhì)在合成過程中轉(zhuǎn)移至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，最后被信號肽酶水解。蛋白質(zhì)糖基化蛋白質(zhì)糖基化指單糖或寡糖與蛋白質(zhì)共價結(jié)合成糖蛋白的過程。包括N連接的糖基化和O連接的糖基化。起始轉(zhuǎn)移序列起始轉(zhuǎn)移序列位于多肽鏈內(nèi)的一段疏水區(qū)段，具有與N端信號肽同樣的功能，只是不能被信號肽酶切除，從而成為膜蛋白的Α螺旋跨膜結(jié)構(gòu)。終止轉(zhuǎn)移序列終止轉(zhuǎn)移序列肽鏈上的一段特殊序列，與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的親和力很

簡介：國外醫(yī)學(xué)輸血及血液學(xué)分冊2004年第27卷第5期NK細(xì)胞的免疫生物學(xué)特性王荷花綜述韓明哲審校【摘要】人類NK細(xì)胞是機體抗腫瘤和抗病毒感染的天然免疫細(xì)胞，有自發(fā)的細(xì)胞毒功能，近1O年來人們發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞的識別也具有特異性。NK細(xì)胞表達(dá)多種受體，按受體識別的分子可分為HLAI類分子特異性受體、非HLAI類分子特異性受體和共受體三大類，功能上劃分為活化性受體和抑制性受體兩類，這些受體對NK細(xì)胞的功能有重要的調(diào)節(jié)作用。本文就NK細(xì)胞受體的特點和功能作一綜述，并探討開發(fā)NK細(xì)胞新型潛在細(xì)胞免疫治療的價值?！娟P(guān)鍵詞】自然殺傷細(xì)胞；受體；細(xì)胞免疫治療人類NK細(xì)胞由骨髓造血干細(xì)胞發(fā)育而來，約占外周血淋巴細(xì)胞的10～15，免疫表型特點為CD3一CD56，因細(xì)胞胞體大、胞漿量多、電鏡下觀察胞內(nèi)含有致密顆粒，故又稱為大顆粒淋巴細(xì)胞。NK細(xì)胞的發(fā)育成熟非胸腺依賴性，也無抗原特異性受體的表達(dá)，因此最初被認(rèn)為是一種天然免疫細(xì)胞，具有天然的和淋巴細(xì)胞因子活化的細(xì)胞毒活性、分泌有免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞因子以及抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒活性。早期人們發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞殺傷的靶細(xì)胞常有HLAI類分子表達(dá)水平的下調(diào)I1，另外NK細(xì)胞也能介導(dǎo)排斥同種異體的正常骨髓細(xì)胞_2。近來隨著NK細(xì)胞受作者單位300020天津，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)血液學(xué)研究所血液病醫(yī)院433綜述體的不斷發(fā)現(xiàn)及其對NK細(xì)胞功能調(diào)節(jié)的研究，使人們認(rèn)識到NK細(xì)胞識別功能的特異性，有利于開發(fā)新的細(xì)胞免疫治療。1NK細(xì)胞受體NK細(xì)胞表達(dá)多種不同的受體，按其識別的配體可分為三大類3HLAI類分子特異性受體、非HLAI類分子特異性受體和其他受體，根據(jù)受體的結(jié)構(gòu)特點又可劃分為免疫球蛋白樣超家族受體和C型凝集素超家族受體兩大家族I4。1．1HLAI類分子特異性受體這一大類受體識別的配體是HLAI類分子，它包括免疫球蛋白樣超家族受體殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體KILLERCELLIMMUNOGLOBULINLIKERECEPTORS，KIR23DRUKERBJ。SAWYERSCL，KANTARJIANH，ETA1．ACTIVITYOFASPECI．CINHIBITOROFTHEBETABLTYROSINEKINASEINTHEBLASTCRISISOFCHRONICMYELOIDLEUKEMIAANDACUTELYMPHOBLASTICLEUKEMIAWITHTHEPHILADELPHIACHROMOSOME．NENGLJMED，2001，34410381042．24KANTARJIANH，SAWYERSC，HOCHHAUSA，ETA1．HEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESTOIMATINIBMESYLATEINCHRONICMYELOGENOUSLEUKEMIA．NENGLJMED，2002，346645652．25TALPAZM，SILVERRT，DRUKERBJ，ETA1．IMATINIBINDUCESDURABLEHEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESINPATIENTSWITHACCELERATEDPHASECHRONICMYELOIDLEUKEMIA；RESULTSOFAPHASE2STUDY．BLOOD，2002，9919281937．26SAWYERSCL。HOCHHAUSA，F(xiàn)ELDMANE。ETA1．IMATINIBINDUCESHEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESINPATIENTSWITHCHRONICMYELOIDLEUKEMIAINMYELOIDBLASTCRISISRESULTSOFAPHASE1STUDY．BLOOD，2002，9935303539．27KANTARJIANHJORGEC，O’BRIENS，ETA1．HIGHRATESOFEARLYMAJORANDCOMPLETECYTOGENETICRESPONSESWITHIMATINIBMESYLATETHERAPYGIVENAT400MGOR800MGORALLYDAILYINPATIENTSWITHNEWLYDIAGNOSEDPHILADELPHIACHROMOSOMEPOSITIVECHRONICMYELOIDLEUKEMIAINCHRONICPHASE．PROCAMSOCCLINONCO1．2002。21261AABSTR．28DRUKERBJ，F(xiàn)ORTHEIRISINTERNATIONALRANDOMIZEDIFNVS．STI571STUDYGROUPSTI571GLEEVEC／GLIVECIMATINIBVERSUSINTERFERONIFN一CYTARABINEASINITIALTHERAPYFORPATIENTSWITHCMLRESULTSOFARANDOMIZEDSTUDY．PROCAMSOCCLIN0NC。2002，21LAABSTR．29DRUKERBJ。SAWYERSCL，CAPDEVILLER，ETA1．CHRONICMYELOGENOUSLEUKEMIA．HEMATOLOGY，AMSOCHEMATOLEDUCPROGRAM2001，87112．3O0’BRIENSG，VALLANCESE，CRADDOCKC．ETA1．PEGINTRONANDST1571COMBINATIONEVALUATIONSTUDYPISCESINCHRONICPHASECHRONICMYELOIDLEUKAEMIA．BLOOD，2001。98846ASUPPL1，ABSTR．31DRUKERB，KANTARJIANH，TALPAZM，ETA1．APHASEISTUDYOFTHECOMBINATIONOFGLEEVECIMATINIBMESYLATEWITHLOWDOSEARAC．BLOOD，2001，98845ASUPPL1，ABSTR．32BRIANJ．DRUKER．IMATINIBALONEANDINCOMBINATIONFORCHRONIEMYELOIDLEUKEMIA．SEMINARSINHEMATOLOGY，2003，4015058．收稿日期2004一O4一O1本文編輯羅幼平IL￡}}維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM國外醫(yī)學(xué)輸血及血液學(xué)分冊2004年第27卷第5期HLAI類分子特異性活化性受體KIR和CD94／NKG2C、E、H的結(jié)構(gòu)共同點是受體胞質(zhì)尾短，無ITIM基序，受體活化信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)需DAP12_1。DAP12胞質(zhì)尾含有由YXXL／I氨基酸序列組成的2個ITAMIMMUNORECEPTORTYROSINEACTINGMOTIF基序。NK細(xì)胞活化性受體的集結(jié)導(dǎo)致YXXL序列中酪氨酸快速而短暫的磷酸化，隨后募集并活化蛋白酪氨酸激酶SYK或ZAP70轉(zhuǎn)導(dǎo)活化信號，使NK細(xì)胞活化。雖然NCR目前尚未明確配體，但與單克隆抗作用的研究發(fā)現(xiàn)其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)類似于上述途徑，其中NKP46和NKP30的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通過含經(jīng)典ITAM的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽CD3鏈，NKP44則與DAP12結(jié)合。NKG2D活化信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)由DAP10介導(dǎo)，與DAP12不同，DAP10分子胞質(zhì)尾無ITAM結(jié)構(gòu)，但含有一個YXXM氨基酸序列，其酪氨酸磷酸化后與PI一3亞單位P85結(jié)合，啟動活化信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)口。因此，NKG2D活化信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑完全不同于NK細(xì)胞HLAI類分子特異性活化性受體。3NK細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)很顯然，NK細(xì)胞的功能受其表達(dá)的抑制性受體和活化性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)性信號和活化信號之間平衡機制調(diào)節(jié)。NK細(xì)胞表達(dá)的受體中，HLAI類分子特異的抑制性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制NK細(xì)胞活化的負(fù)性信號，NCR、NKG2D和HLAI類分子特異的活化性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)活化信號，共受體則協(xié)同NK細(xì)胞功能的活化。對同一NK細(xì)胞表達(dá)的HIAI類分子特異性受體而言，雖然識別相同或相似HIAI類分子的KIR和CD94／NKG2抑制性受體和活化性受體都能與相應(yīng)的配體結(jié)合，但通常抑制性受體與HLAI類分子結(jié)合的親和力顯著高于活化性受體N。另外，僅少數(shù)NK細(xì)胞克隆同時表達(dá)識別相同HLAI類分子同種型的活化性受體和抑制性受體，通常大多數(shù)NK細(xì)胞克隆表達(dá)的是不同HLA1分子同種型的抑制性受體。所以，在正常情況下，NK細(xì)胞的抑制性受體與自身正常細(xì)胞表達(dá)的HLAI類分子結(jié)合后，轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制該NK細(xì)胞活化的負(fù)性信號，導(dǎo)致啟動NK細(xì)胞活化的早期階段分子失活，從而阻止NK細(xì)胞的活化，即NK細(xì)胞以轉(zhuǎn)導(dǎo)負(fù)性信號占優(yōu)勢。這也就阻止了NK細(xì)胞對宿主自身正常細(xì)胞的殺傷作用，避免自身免疫反應(yīng)的發(fā)生。病理情況下，當(dāng)NK細(xì)胞識別自身HIAI類分子水平下調(diào)或丟失的腫瘤細(xì)胞、病原體感染的細(xì)胞時，抑制性受體與HIAI類分子作用水平減低或不能與之結(jié)合，導(dǎo)致抑制NK細(xì)胞活化的信號減弱或缺乏，則啟動活化性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)的活化信號，使該NK細(xì)胞活化，發(fā)揮細(xì)胞毒功能，裂解靶細(xì)胞。若該靶細(xì)胞同時表達(dá)MLCA／MLCB分子，可激活不同信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的活化性受體NKG2D，進一步增強NK細(xì)胞的活化信號，提高宿主的疾病防御能力。綜上所述，NK細(xì)胞通過表達(dá)多種受體的調(diào)節(jié)方式，整合抑制性受體和活化性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)性信號和活化信號，使機體能夠區(qū)分自身正常細(xì)胞和HLA1分子水平下調(diào)或丟失的異常細(xì)胞，從而闡明了NK細(xì)胞免疫監(jiān)視“丟失自我”MISSINGSELF假說的機制。4NK細(xì)胞的免疫治療應(yīng)用NK細(xì)胞識別“自己”和“非己”的特性，調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的活性，可能為免疫治療提供新的途徑。理論上阻斷抑制性受體與MHCI類分子的相互作用，解除對NK細(xì)胞活化的抑制，能夠有效增強NK細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)。KOH等N實驗研究證明，采用單克隆抗體封閉同基因小鼠NK細(xì)胞抑制性受體或者過繼性MHCI不相合異基因NK細(xì)胞凈化骨髓和自體骨髓移植后的維持治療，有效提高了白血病小鼠長期無白血病復(fù)發(fā)存活率，同時對造血重建無明顯影響。這一效應(yīng)同樣能在病毒感染如巨細(xì)胞病毒感染時巨細(xì)胞病毒能夠編碼MHCI類分子樣類似物以逃逸免疫系統(tǒng)的殺傷發(fā)揮作用。在異基因造血干細(xì)胞移植中ALLOSCT，供一受者問NK細(xì)胞識別的特異性主要指抑制性受體識別的特異性，即兩者抑制性受體識別的配體是否相合，另外由于移植預(yù)處理的作用使受者NK細(xì)胞基本被清除，所以移植后主要存在的是供者NK細(xì)胞的同種反應(yīng)性，即指受者MHCI類基因不編碼供者所有NK細(xì)胞抑制性受體識別的MHCI類分子。因此，此NK細(xì)胞亞群KIR抑制性受體不能與受者MHCI類分子結(jié)合，從而阻斷抑制信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)，有利于供者NK細(xì)胞的活化，增強移植后抗殘留腫瘤細(xì)胞的功能。RUGGERI等發(fā)現(xiàn)在白血病患者HLA半相合干細(xì)胞移植后，供一受者方向KIR一配體不相合的受者體內(nèi)可檢測到供者同種反應(yīng)性NK細(xì)胞克隆，并證明供一受者方向KIR一配體不相合有利于患者的長期無病生存，同時防止急性移植物抗宿主病GVHD的發(fā)生。小鼠移植模型證明供者同種反應(yīng)性NK細(xì)胞不僅能夠有效清除殘留白血病細(xì)胞，而且分別通過進一步清除受者預(yù)處理殘留的T細(xì)胞和抗原遞呈細(xì)胞，促進植入以及阻止AGVHD。后來GIEBEL等223在白血病患者無關(guān)供者造血干細(xì)胞移植中也證明供一受者方向KIR表位不相合有助于患者的無病生存，減少Ⅲ～Ⅳ度AGVHD的發(fā)生。實際上，同種反應(yīng)性NK細(xì)胞主要攻擊受者造血細(xì)維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM

簡介：午曉群等NKG2D真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對YT細(xì)胞生物學(xué)功能的影響第L2期分子與細(xì)胞免疫學(xué)NKG2D真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對YT細(xì)胞生物學(xué)功能的影響①許曉群張建⑦④張彩游力張建華劉金生王郡甫高春義田志剛⑦山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，濟南250062885中國圖書分類號92．12文獻標(biāo)識碼A文章編號100X20O5120885．04摘要目的建立NK細(xì)胞受體NKG2D真核表達(dá)載體，通過轉(zhuǎn)染NK細(xì)胞系YT，初步探討NKG2D分子對YT細(xì)胞系殺傷功能的增強作用。方法用RTPCR方法從NK92細(xì)胞中調(diào)取NKG2D基因片段，克隆到PGEM．TEASY載體并對克隆的DNA片段進行序列分析。用限制內(nèi)切酶EEORI和BAMHI消化PCEM．TEASY／NKG2D重組質(zhì)粒，分離NKG2D片段，并插入真核表達(dá)質(zhì)粒PEGFPN1的相應(yīng)限制酶位點，酶譜分析鑒定重組表達(dá)載體PEGFPN1／NKG2D。然后經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞和YT細(xì)胞。應(yīng)用熒光顯微鏡觀測、WESTERNBLOT方法和免疫組化染色對轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)PEGFPNI／NKG2D的表達(dá)進行鑒定，MTR方法觀察YT細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷功能。結(jié)果RTPCR擴增獲得650BP基因片段，經(jīng)DNA序列分析證明所獲得的DNA序列與文獻報道的NKG2D序列一致。轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞在熒光顯微鏡下發(fā)出強綠色熒光，WESTERNBLOT分析顯示重組蛋白能特異地與抗人NKG2D單克隆抗體結(jié)合；免疫組化檢測顯示，轉(zhuǎn)染的CHO中有棕色顆粒，證明所構(gòu)建的NKG2D真核表達(dá)載體可以在細(xì)胞中表達(dá)；轉(zhuǎn)染NKG2D真核表達(dá)載體的YT細(xì)胞對乳腺癌細(xì)胞具有更強的殺傷效果。結(jié)論所獲得的表達(dá)NKG2D分子的真核表達(dá)載體，通過轉(zhuǎn)染YT細(xì)胞，初步鑒定所表達(dá)NKG2D分子具有生物學(xué)功能，可以提高NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性。關(guān)鍵詞NKG2D受體；NK細(xì)胞；基因轉(zhuǎn)染；真核表達(dá)CONSTRUCTIONOFNKG2DEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORANDEFECTONYTCELLBIOLOGICALFUNCTIONXU‰，ZHANGJ／AN，ZHANGCAI，YOU12，ZHANGANHNA，刪J／NSHENG，WANGJUNFU，GAOCHUNYI，TIANZHIGANG．INSTITUEOFBASICMEDICINE，SHANDONGACADEMYOFMEDICALSCIENCE，J／NAN250062，CHINAABSTRACTOBJECTIVETOESTABLISHNKCELLRECEPTORNKG2DEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORANDINVESTIGATEONTHECYT0CITYOFNKCELLFINYTTRAECTEDWITHNKG2D．METHODSANKG2DGENEFRAGMENT，WITHALENGTH0FABOUT650BP，WASAMPLIFIEDFROMTHENK一92CEILLINEBYRTPCRANDWASSEQUENCEDBYCLONEDTOPNIDPGEMTEASY．THERECOMBINANTPLMIDPCTEASY／NKG2DWASDIGESTEDWITHECOR工ANDBAMH工，THENNKG2DFRAGMENTWASISOLATEDANDINSERTEDINTOTHECORRESPONDINGRESTRICTIONSITEONEUKARYOFIEEXPRESSIONVECTORPEGFPN1．THELIPOFECTINWASUSEDTOTRANSECTMCOMBIMNTEUKARYO6EEXPRESSIONPLASMIDINTOTHECHOANDYRCELLS．THEEXPRESSIONLEVELOFNKG2DGENEINTMECTEDCHOCEILSWASDETECTEDBYFLUORESCENCEMICROSCOPY，WESTERNBLOTANDIMMUNOHISTOEHOMICALSTAINING．RESULTSTHENGTHOFEDNAFRAGMENTAMPLIFIEDBYRTPCRWASCONSISTENTWITHTHAT0FNKG2D．DNASEQUENCING0FPGEMTEASY／NKG2DREVEALEDTHATTHECLONEDDNASQUENCEWASIDENTICALTOTHAT0FREPORTEDNKG2D．THEEENFLUORESCENCECOULDBESEENINTRANSFECTEDCHOCELLSUNDERFLUORESCCNEEMICROSCOPE．WESTERNBLOTANDIMMUNOHISTOCHEMICALSTAI,DETECTIONSHOWEDTHATNKG2DEXPRESSEDINTRANSFECTEDCELLS．TRANSFECTEDYTCELLSHAVESTRONGEREYTOTOXICITYAGAINSTTUMORCEIL．CONDUSIONNKG2DEUKARYOAEEXPRESSIONVECTORSHOWEDBIOLOGICALFUNCTIONBYTRANSFEETEDINTONKCEILLINEYTANDCOULDINCREASEYTCYTOLYFIEACTIVITY．KEYWORDSNKG2DRECEPTOR；NKCEIL；GENETRANSFECFION；EUKARYOFICEXPRESSIONNKG2D是近年來發(fā)現(xiàn)的表達(dá)于NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、7KI細(xì)胞及CD8細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞表面的NK細(xì)胞受體，是NK細(xì)胞識別靶細(xì)胞的一種主要結(jié)構(gòu)“。由于腫瘤細(xì)胞不表達(dá)或低表達(dá)MHC．I①本文受國家自然科學(xué)基金項目30371302、3047152和山東省自然科學(xué)基金資助項目YMCZ4資助②山東大學(xué)藥學(xué)院，濟南250012③通訊作者作者簡介許曉群1975年一，男，碩士，助理研究員，主要從事基因工程和分子免疫學(xué)研究。類分子，使得腫瘤特異性MHC限制性細(xì)胞毒性T細(xì)胞CTL不能發(fā)揮作用。在這種情況下，識別非MHC．I類分子的NKG2D在介導(dǎo)NK細(xì)胞識別并溶解腫瘤細(xì)胞及感染細(xì)胞的免疫應(yīng)答中可能發(fā)揮關(guān)鍵作用L2】。近年來，對于NK細(xì)胞的分化發(fā)育、識別殺傷和功能調(diào)節(jié)的分子機制的研究日益引起重視。我們旨在構(gòu)建NKG2D基因的真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染NK細(xì)胞系，為進一步研究NKG2D如何在NK細(xì)胞中發(fā)揮效應(yīng)功能及其腫瘤生物治療的應(yīng)用提供一種研究工具。維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM午曉群等NKG2D真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對YR細(xì)胞生物學(xué)功能的影響第12期ECORLBAMHLIECORLIBAMHLECORI_PG．FPNN／NKG2D535BPIFEGFP／KANNEOR／／HIE．1?1D川R圖1重組質(zhì)粒PEGFP．N1／NKG2D構(gòu)建示意圖№．1SCHEMATICCONSTRUCTIONOFPLASMIDPEGFPN1／NKG2D圖2重組質(zhì)粒PEGFPN1／NKG2D的酶切鑒定№．2RESTRICTIVEENZYMEDIGESTIONANALYSISOFRECOMBINANTPLASMIDPEGFP．N1／NKG2DNOTE1．NKG2DGENEFR,TNONT；2．PEGFPNI／NKG2DDIGESTEDWITHECORIANDBANLHI3．PCEM．TEASY／NKG2DDIGESTEDTHECORIANDBAMHI；4．1KBDNAMARKER．圖3GFP在CHO中的表達(dá)200№．3EXPRESSIONOFGFPINCHOS200NOTECHOSTRANSFECTEDBYPEGFPNI／NKG2DAFTER24HOURS．KDA6050402520一L5一88728圖4WESTERNBLOT鑒定NKG2D重組蛋白№．4ANALYSISOFRECOMBINANTPROTEINNKG2DBYWESTERNBLOTNOTE1．PRESTAINEDPROTEINLADDER；2．NONTRANDECTEDCHOS；3．CHOSTLDBFTEDBYPEGFPNI／NKG2D．AB圖5免疫組化染色檢測NKG2D在CHO中表達(dá)200№．5DETECTIONOFNKG2DEXPRESSIONINCHOSBYILI,DNUNOHISTOCHEMICALSTALG200NOTEA．CHOTRANSFECTEDBYEMPTYPLASMID；B．CHOTRANDECTEDBYPEG}3NI／NKG2D．圖6NKG2D對YT細(xì)胞殺傷OMDA231乳腺癌細(xì)胞的影響№．6INFLUENCEOFNKG2DONYT曲AGAINSTOMDA231CELLS2．3NKG2D真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞中NKG2D表達(dá)水平的鑒定①綠色熒光鑒定將重組質(zhì)粒PEGFPN1／NKG2D轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24、．旌一譬鬻辨。踟∞鯽加加一O／0一魯I3L蓉；U維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM

簡介：1干細(xì)胞生物學(xué)干細(xì)胞生物學(xué)一、緒論；干細(xì)胞概述；干細(xì)胞增殖、分化與調(diào)控；一、緒論；干細(xì)胞概述；干細(xì)胞增殖、分化與調(diào)控；1、干細(xì)胞、干細(xì)胞（STEMCELLS，SCS）是機體在整個生命期中具有自我更新、增殖能力和分化潛能的未分化細(xì)胞群。干細(xì)胞群的功能是控制和維持細(xì)胞、組織、器官的再生及生命體的相對穩(wěn)態(tài)。2、干細(xì)胞生物學(xué)、干細(xì)胞生物學(xué)（STEMCELLBIOLOGY）是以干細(xì)胞為研究對象，應(yīng)用現(xiàn)代物理學(xué)、化學(xué)和實驗生物學(xué)技術(shù)、方法，從顯微、亞顯微、分子水平等多層次研究干細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)育、分化等生命活動機制、規(guī)律以及應(yīng)用的一門新興科學(xué)。簡單說，研究干細(xì)胞及其生物學(xué)特性的科學(xué)稱干細(xì)胞生物學(xué)。3、干細(xì)胞生物學(xué)研究內(nèi)容、干細(xì)胞生物學(xué)研究內(nèi)容?1基因治療?2干細(xì)胞生物工程，細(xì)胞、組織、器官移植治療?3研究胚胎發(fā)生、發(fā)育機制、組織細(xì)胞分化、基因表達(dá)調(diào)控?4新型生物材料工程、新藥的研制、開發(fā)與藥效、毒性評估?5基因嫁接與物種改良、轉(zhuǎn)基因動物?6做實驗平臺進行疾病發(fā)病學(xué)研究?7新基因發(fā)掘、基因功能分析?8制造新物種4、生物經(jīng)濟與第四次浪潮、生物經(jīng)濟與第四次浪潮在信息經(jīng)濟時代進入成熟階段之前，生物經(jīng)濟即在孕育，但其孕育期遠(yuǎn)長于信息經(jīng)濟時代的孕育期。以1953年弗蘭西斯克拉克（FRANCISCRICK）和詹姆斯沃森（JAMESWATSON）發(fā)現(xiàn)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)為標(biāo)志，生物經(jīng)濟時代進入孕育階段。人類基因組破譯的完成和發(fā)表標(biāo)志著孕育階段的終結(jié)，當(dāng)前人類社會已進入生物經(jīng)濟的成長階段1。正如只有當(dāng)信息經(jīng)濟發(fā)展到成熟階段才能稱為進入信息經(jīng)濟時代一樣，只有當(dāng)生物經(jīng)濟進入其成熟階段，才可以稱為進入了生物經(jīng)濟時代。5、干細(xì)胞分類、干細(xì)胞分類21根據(jù)發(fā)育階段分為二類211胚胎干細(xì)胞212成體干細(xì)胞22按其分化潛能，分為三類221全能干細(xì)胞2221三胚層多能干細(xì)胞2222單胚層多能干細(xì)胞223單能干細(xì)胞23根據(jù)發(fā)生、來源分為四類231胚胎干細(xì)胞232胎兒干細(xì)胞233成體干細(xì)胞234人造干細(xì)胞2341核移植干細(xì)胞2342細(xì)胞融合雜交干細(xì)胞2343基因改造干細(xì)胞25根據(jù)組織性質(zhì)分類251上皮組織干細(xì)胞252結(jié)締組織干細(xì)胞253肌肉組織干細(xì)胞254神經(jīng)組織干細(xì)胞255器官組織干細(xì)胞256胚胎組織干細(xì)胞257腫瘤組織干細(xì)胞26根據(jù)發(fā)育進程分類261干細(xì)胞262短暫增殖細(xì)胞263祖細(xì)胞6、干細(xì)胞特點、干細(xì)胞特點干細(xì)胞本身不是處于分化途徑的終端；332根據(jù)個體克隆對象個體克隆對象分類分為動物克隆、植物克隆等2種類型。33根據(jù)供體細(xì)胞來源供體細(xì)胞來源分類分為同種胚胎細(xì)胞克隆、同種成體細(xì)胞克隆、異種胚胎細(xì)胞克隆、異種成體細(xì)胞克隆等4種類型。34根據(jù)克隆應(yīng)用目的克隆應(yīng)用目的分類分為治療性克隆、生殖性克隆或繁殖性克隆、克隆人等2種類型。國際人類基因組倫理委員會國際人類基因組倫理委員會關(guān)于克隆的聲明，將克隆分為生殖性克隆、基礎(chǔ)性研究和治療性克隆3類。分子克隆分子克隆指利用DNA重組技術(shù)將特定基因或DNA序列插入載體以獲得大量相同基因DNA序列的過程；細(xì)胞克隆細(xì)胞克隆指由一個單一的共同祖先細(xì)胞分裂所形成的一個細(xì)胞群體即細(xì)胞克?。粋€體克隆個體克隆指基因型完全相同的2個或更多個體組成的一個群體，也可指代群體中的一個個體。4、核移植、核移植利用顯微操作儀將外源細(xì)胞的核移入去核卵母細(xì)胞或其它具有重編程（REPROGRAMMING）能力的細(xì)胞中，經(jīng)人工活化以及體內(nèi)或體外培養(yǎng)后如果目的是克隆出一個人胚胎獲取全能干細(xì)胞，然后利用干細(xì)胞誘導(dǎo)、分化獲得各種組織特異性細(xì)胞、組織甚至器官移植以治療疾病的則稱為治療性克隆THERAPEUTICCLONING；如果目的是為了克隆出一個人的胚胎而移植入代孕母體發(fā)育為含有與供體細(xì)胞相同遺傳物質(zhì)的個體則稱為生殖性克隆（REPRODUCTIVECLONING）。5、治療性克隆、治療性克隆治療性克隆是指通過核移植技術(shù)構(gòu)建來源于病人成體細(xì)胞的胚胎，待胚胎發(fā)育至胚泡階段后取出內(nèi)細(xì)胞團，在體外培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞，然后定向誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞分化成病人所需要的細(xì)胞類型，再移植回病人身上；或通過組織工程構(gòu)建病人所需要的組織或器官，移植給病人，來替代或補充病變或受到損傷的細(xì)胞、組織或器官，從而實現(xiàn)對疾病的治療。6、細(xì)胞核重編程、細(xì)胞核重編程細(xì)胞核重編程細(xì)胞核重編程使在正常胚胎發(fā)育中表達(dá)、而在成體細(xì)胞中被關(guān)閉的基因重新激活、供體細(xì)胞核完全恢復(fù)全能性的過程稱為細(xì)胞核重編程。外生性重編程機制體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移入卵細(xì)胞后在外生性重編程序中可能受到影響的機制有DNA甲基化、基因“印記”、X染色體的失活、染色質(zhì)的重新塑造、組蛋白的變更、端粒體的維持以及外生標(biāo)記的遺傳傳遞等。7、生命起點的科學(xué)爭論、生命起點的科學(xué)爭論科學(xué)的爭論人胚胎干細(xì)胞創(chuàng)造胚胎干細(xì)胞在一個完整的鏈條中，通過每一個母親的卵子都可追溯到30億年前地球表面的第一個細(xì)胞。精子和卵子相遇的那一刻，為生命提供了一個浪漫的起點，但事實上那一刻相當(dāng)模糊。如果DNA結(jié)合是一個標(biāo)志性事件，那么就不能說生命的起點在受精的那一刻。從生物學(xué)的觀點看，受精不足以作為新生命的標(biāo)志。直到大約第14天，胚泡有了分裂形成孿生的能力。我們不習(xí)慣看著一個人分裂成兩個。第8周腦開始成形。感覺能力是否可以作為生命開始的有用的標(biāo)志呢這或許也是生命結(jié)束的很好分界點。三、成體干細(xì)胞概述成體干細(xì)胞概述、上皮組織干細(xì)胞上皮組織干細(xì)胞、結(jié)締組織干細(xì)胞結(jié)締組織干細(xì)胞、肌肉組織干細(xì)胞肌肉組織干細(xì)胞1、成體干細(xì)胞、成體干細(xì)胞（ADULTADULTSTEMSTEMCELLSCELLS，ASCSASCS）是指存在于胎兒、兒童和成人已經(jīng)分化的各）是指存在于胎兒、兒童和成人已經(jīng)分化的各組織器官中尚未分化的、具有自我更新潛能并負(fù)有構(gòu)建和補充組織各種類型細(xì)胞的細(xì)胞組織器官中尚未分化的、具有自我更新潛能并負(fù)有構(gòu)建和補充組織各種類型細(xì)胞的細(xì)胞群，又名組織干細(xì)胞（群，又名組織干細(xì)胞（TISSUETISSUESTEMSTEMCELLSCELLS）、體細(xì)胞干細(xì)胞（）、體細(xì)胞干細(xì)胞（SOMATICSOMATICSTEMSTEMCELLSCELLS）。）。2、成體干細(xì)胞來源、分布、分類、成體干細(xì)胞來源、分布、分類2121細(xì)胞來源細(xì)胞來源①胚胎細(xì)胞由胚胎干細(xì)胞定向分化，或移植分化而成；胚胎細(xì)胞由胚胎干細(xì)胞定向分化，或移植分化而成；

簡介：中文中文3825字出處出處KRISTMUNDSDóTTIRT,JóNSDóTTIRE,?GMUNDSDóTTIRHM,ETALSOLUBILIZATIONOFPOORLYSOLUBLELICHENMETABOLITESFORBIOLOGICALTESTINGONCELLLINESJEUROPEANJOURNALOFPHARMACEUTICALSCIENCES,2005,245539543不溶性地衣代謝產(chǎn)物的增溶作用在細(xì)胞系的生物學(xué)測試不溶性地衣代謝產(chǎn)物的增溶作用在細(xì)胞系的生物學(xué)測試摘要摘要荔枝素縮酚酸和富馬原島衣酸縮酚酸環(huán)醚，分別是從珊瑚枝屬的高山柳葉菜地衣和冰島地衣屬提取出來的，分別被選做為不溶性天然化合物的原型，以方便在藥理模型中的測試。增溶劑在之前就被認(rèn)定是做為從無毒性走向一個惡性白血?。↘562）細(xì)胞株和氧芴地衣代謝物（）地衣酸溶解研究中使用的縮酚酸及縮酚酸環(huán)醚的反增生性活動的測試。環(huán)糊精衍生物是之前發(fā)現(xiàn)的最適合增溶的地衣化合物，已經(jīng)確認(rèn)在富馬原島衣酸的溶解度上有了最大的提高，從水中003MG/ML到898MG/ML在10的2羥丙基Β環(huán)糊精（HPΒCD），提高了將近300倍。隨后,地衣化合物包括（）地衣酸，溶解在10的HPΒCD中，測試在3種惡性的人類細(xì)胞系T47D（胸腺），PANC胰腺和PC3（前列腺）的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞增殖實驗。荔枝素和富馬原島衣酸沒有展現(xiàn)出有反增殖影響，但是地衣酸可以有效的對抗所有測試細(xì)胞系和半數(shù)效應(yīng)濃度值4382ΜG/ML。在本實驗中使用的無毒的增溶劑可以證明其他可溶性就差的天然產(chǎn)品的藥理學(xué)測試。?2005ELSEVIERPV，保留最終解釋權(quán)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞地衣代謝物；溶解度；細(xì)胞系；富馬原島衣酸；荔枝素；地衣酸。11介紹介紹冰島地衣中的一些次級代謝產(chǎn)物在人類惡性細(xì)胞系測試中展現(xiàn)了可喜的反增殖結(jié)果。相同原料的代謝產(chǎn)物在無毒溶劑中的進一步測試是存在的但是經(jīng)常被不溶性的所阻礙。許多方法是可以試著去增加不溶性物質(zhì)的溶解度，比如使用助溶劑，表面活性劑，有機絡(luò)合劑。然而這些方法必須是對培養(yǎng)基中的細(xì)胞無害的溶劑系統(tǒng)。在先前研究地衣代謝物（）地衣酸（圖1）中，氧芴衍生物作為原型的目的是找到一個既能夠溶解地衣酸，同時不會對細(xì)胞系的測試產(chǎn)生影響的不溶于水的天然產(chǎn)物。各種溶劑和絡(luò)合劑的直接產(chǎn)物是用來在人類白血病細(xì)胞K562標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞增殖實驗中的測試。大部分的化合物是有毒的，除了聚乙二醇400（PEG400）和2羥丙基Β環(huán)糊精絡(luò)合劑（HPΒCD）。地衣酸的反增生活性可以證明使用PEG400和HPΒCD的半數(shù)有效濃度47ΜG/ML，但是只有后者給出了滿意的溶解度。2羥丙基Β環(huán)糊精因此被作為一種增溶劑，因為它同時滿足溶解度以及對細(xì)胞測試的無毒性。地衣酸在每日攝取100200MG劑量時會引發(fā)肝中毒。除了氧芴衍生物比如地衣酸，地衣類的次級代謝產(chǎn)物有很大數(shù)量的縮酚酸和縮酚酸環(huán)醚的化學(xué)分類。兩者都是通過芳香羧酸的酯化反應(yīng)形成的單位。除了酯鍵和含有一個分子內(nèi)氧橋的縮酚酸環(huán)醚。許多這種化合物在地衣類是結(jié)構(gòu)獨特的，很值得去進行藥理測試。然而很多時候他們的溶解性很差。目前調(diào)查的目標(biāo)是雙重的，首先是選擇一個說溶性很差縮酚酸和縮酚酸環(huán)醚的典型，并且在使用之前找到的對細(xì)胞系毒性很小的溶劑和絡(luò)合劑時能夠明顯提高他們?nèi)芙舛取７謩e選中了從冰島珊瑚枝屬高山柳葉菜中提取的荔枝素和從冰島衣多毛屬提取的富馬原島衣酸。其次是在3中人類惡性為6的10HPΒCD溶解度很低，但是在PH為8時，有更高的溶解度00055MG/ML。盡管PH為8的荔枝素溶解度比PH為74的生理的高，但是后者是選擇作為細(xì)胞實驗的。由于荔枝素在HPΒCD中的溶解度很小，所以嘗試去選擇HPΓCD增加溶解度。Γ環(huán)糊精的中心空腔比Β環(huán)糊精的要大，因此它可能使地衣化合物的溶解度更高。但是，這并非如此。圖3顯示的是環(huán)糊精濃度在PH為74的荔枝素的溶解度。溶解度的增加與增溶劑濃度做了一個函數(shù)，但是還是有很小的不同在后面得到的兩個環(huán)糊精和HPΓCD在高得濃度測試中相對要好。3232增溶劑對富馬原島衣酸溶解度的影響。增溶劑對富馬原島衣酸溶解度的影響。富馬原島衣酸在水中的溶解度是00325MG/ML，在PH為4時溶解度是00069MG/ML，并且隨著PH的增加溶解度也在增長，在PH為74時，溶解度是283MG/ML。在同時使用PEG400和丙二醇時，富馬原島衣酸的溶解度要比只有水的時候要好，但是由于在這些溶液中的化合物的分解是通過HPLC測量的，所以它不能反應(yīng)溶解度。富馬原島衣酸的溶解度在PH為74的10的HPΒCD中是898MG/ML。分解在環(huán)糊精溶液中可能是看不到的，因為一部分富馬原島衣酸的很適合非極性的環(huán)糊精空腔并可以從外界環(huán)境中保護它。3333地衣化合物對細(xì)胞吸收胸苷的影響。地衣化合物對細(xì)胞吸收胸苷的影響。將地衣酸、荔枝素和富馬原島衣酸三種地衣化合物溶解在10的HPΒCD溶液中，并分別在PANC1、T47D和PC3的PH為74的細(xì)胞系中進行測試。松蘿酸在溶劑濃度為10ΜL/ML中抑制PANC1的半數(shù)有效濃度是43ΜG/ML，與之相比松蘿酸對K562的半數(shù)有效濃度是47ΜG/ML。松蘿酸抑制T47D的半數(shù)有效濃度是29ΜG/ML，抑制PC3的半數(shù)有效濃度是相對高的82ΜG/ML。計算得到這個半數(shù)有效濃度對溶劑有直接的影響。HPΒCD這個增溶劑對PC3和PANC1沒有明顯的作用，但是T47D是更加敏感的，而且在有效的劑量范圍內(nèi)對胸苷的吸收有一個明顯的3080的減少。荔枝素對T47D的溶劑和溶解度的抑制作用就像那個是很有限的，也是因此決定不在其他細(xì)胞表面進行試驗。富馬原島衣酸對T47D和PANC1并沒有一個很好的抑制作用。44討論。討論?，F(xiàn)在溶解度研究是選擇最好的使用溶劑，并且它有很小的溶解度，而且還是在地衣類中是廣泛分布的。盡管它們相對其他地衣代謝物相對豐度是很高的，這些化合物在藥理的觀點內(nèi)從未收到應(yīng)有的重視。先前的工作已經(jīng)確定了在細(xì)胞培養(yǎng)中的適合的增溶劑丙二醇、PEG400、HPΒCD。HPΒCD是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的有增加氧芴衍生物地衣酸抑制惡性細(xì)胞系測試的溶解度（KRISTMUNDSDOTTIRETAL,2002）在試圖使用增溶的化合物去增加及其不佳溶解度的縮酚酸衍生物荔枝素和縮酚酸環(huán)醚衍生物富馬原島衣酸后，發(fā)現(xiàn)縮酚酸環(huán)醚比縮酚酸更容易溶解。荔枝素溶解度的增加順序是無HPLC在水中檢測的HPLC使用HPΒCD和HPΓCD。這種增加不能足夠的曾明明顯的反增生實驗，荔枝素也不能證明是及其困難增溶的候選物。荔枝素在細(xì)胞增長方面與它的溶劑相比不能引起明顯的減少，因此不可能做出任何假設(shè)在荔枝素的反增生反應(yīng)是由于它的很差的溶解性。另一方面富馬原島衣酸在水中的溶解度從003MG/ML增加到了在10HPΒCD的898MG/ML，因此具有更多剛性環(huán)的富馬原島衣酸比荔枝素更適合環(huán)糊精空腔。除了增加溶解度，HPΒCD溶液也可以增加富馬原島衣酸的穩(wěn)定性。大概延胡索酸酯可以保護環(huán)糊精復(fù)合物的水解，由于

簡介：EUROPEANJOURNALOFPHARMACEUTICALSCIENCES242005539–543SOLUBILIZATIONOFPOORLYSOLUBLELICHENMETABOLITESFORBIOLOGICALTESTINGONCELLLINESTH′ORD′ISKRISTMUNDSD′OTTIRA,?,ELSAJ′ONSD′OTTIRA,HELGAM¨OGMUNDSD′OTTIRB,C,KRIST′INING′OLFSD′OTTIRAAFACULTYOFPHARMACY,UNIVERSITYOFICELAND,HAGI,HOFSVALLAGATA53,REYKJAVIKIS107,ICELANDBFACULTYOFMEDICINE,UNIVERSITYOFICELAND,REYKJAVIK,ICELANDCMOLECULARANDCELLBIOLOGYRESEARCHLABORATORY,ICELANDICCANCERSOCIETY,REYKJAVIK,ICELANDRECEIVED8JULY2004RECEIVEDINREVISEDFORM11JANUARY2005ACCEPTED14JANUARY2005ABSTRACTTHEDEPSIDEATRANORINANDDEPSIDONEFUMARPROTOCETRARICACID,ISOLATEDFROMTHELICHENSSTEREOCAULONALPINUMANDCETRARIAISLANDICA,RESPECTIVELY,WERECHOSENASPROTOTYPESFORPOORLYSOLUBLENATURALCOMPOUNDSINANEFFORTTOFACILITATETESTINGINPHARMACOLOGICALMODELSSOLUBILIZINGAGENTSPREVIOUSLYIDENTIFIEDASBEINGNONTOXICTOWARDSAMALIGNANTLEUKEMICK562CELLLINEANDSUITABLEFORTESTINGOFANTIPROLIFERATIVEACTIVITYOFTHEDIBENZOFURANLICHENMETABOLITEUSNICACIDWEREUSEDINSOLUBILIZATIONSTUDIESOFTHEDEPSIDEANDDEPSIDONECYCLODEXTRINDERIVATIVESWEREFOUNDTOBEMOSTSUITABLEFORSOLUBILIZINGTHELICHENCOMPOUNDS,THEGREATESTRISEINSOLUBILITYBEINGWITNESSEDFORFUMARPROTOCETRARICACID,INCREASINGALMOST300FOLDFROM003MG/MLINWATERTO898MG/MLIN102HYDROXYPROPYL?CYCLODEXTRINHP?CDSUBSEQUENTLY,THELICHENCOMPOUNDS,INCLUDINGUSNICACID,WERESOLUBILIZEDIN10HP?CDANDTESTEDFOREFFECTSONTHREEMALIGNANTHUMANCELLLINEST47DBREAST,PANC1PANCREASANDPC3PROSTATEINASTANDARDPROLIFERATIONASSAYATRANORINANDFUMARPROTOCETRARICACIDDIDNOTEXHIBITANTIPROLIFERATIVEEFFECTSBUTUSNICACIDWASACTIVEAGAINSTALLTESTCELLLINESWITHEC50VALUESOF43–82?G/MLTHENONTOXICSOLUBILIZINGAGENTSUSEDINTHISSTUDYCOULDPROVEUSEFULFORPHARMACOLOGICALTESTINGOFOTHERPOORLYSOLUBLENATURALPRODUCTS?2005ELSEVIERBVALLRIGHTSRESERVEDKEYWORDSLICHENMETABOLITESSOLUBILITYCELLLINESFUMARPROTOCETRARICACIDATRANORINUSNICACID1INTRODUCTIONSOMESECONDARYMETABOLITESFOUNDINICELANDICLICHENSHAVESHOWNPROMISINGANTIPROLIFERATIVERESULTSININVITROTESTSONMALIGNANTHUMANCELLLINES¨OGMUNDSD′OTTIRETAL,1998HARALDSD′OTTIRETAL,2004FURTHERTESTINGOFOTHERCANDIDATESOFTHESAMEORIGINHASHOWEVEROFTENBEENHAMPEREDBYTHEPOORSOLUBILITYTHATMANYOFTHESEMETABOLITESSHOWINNONTOXICSOLVENTSNUMEROUSWAYSAREPOSSIBLEWHENTRYINGTOINCREASETHESOLUBILITYOFPOORLYSOLUBLESUBSTANCES,FOREXAMPLETHEUSEOFCOSOLVENTS,SURFACANTSANDCOMPLEXFORMINGAGENTSTINWALLAETAL,1993JONKMANDEVRIESETAL,1996LIETAL,1999A,BTHESEMETHODSMUSTHOWEVER?CORRESPONDINGAUTHORTEL3545254370FAX3545254071EMAILADDRESSTHORDISKHIISTKRISTMUNDSD′OTTIRPRODUCESOLVENTSYSTEMSTHATARENONTOXICFORTHECELLSINCULTUREINAPREVIOUSSTUDYTHELICHENMETABOLITEUSNICACIDFIG1,ADIBENZOFURANDERIVATIVE,WASUSEDASAPROTOTYPEFORAWATERINSOLUBLENATURALPRODUCTWITHTHEAIMTOFINDASOLVENTTHATWASBOTHCAPABLEOFSOLUBILIZINGUSNICACIDANDWASFREEOFDIRECTACTIVITYAGAINSTATESTCELLLINETHEDIRECTEFFECTSOFVARIOUSSOLVENTSANDCOMPLEXANTSWERETESTEDONTHEHUMANLEUKEMIACELLLINEK562INASTANDARDPROLIFERATIONASSAYMOSTOFTHECOMPOUNDSPROVEDTOXICWITHTHEEXCEPTIONOFTHESOLVENTSPROPYLENEGLYCOLANDPOLYETHYLENEGLYCOL400PEG400ANDTHECOMPLEXANT2HYDROXYPROPYL?CYCLODEXTRINHP?CDANTIPROLIFERATIVEACTIVITYOFUSNICACIDCOULDBEDEMONSTRATEDWITHANEC50OF47?G/MLUSINGPEG400AND2HYDROXYPROPYL?CYCLODEXTRINBUTONLYTHELATTERGAVESATISFACTORYSOLUBILITY2HYDROXYPROPYL?CYCLODEXTRINWASTHUSIDENTIFIEDASASOLUBILIZINGAGENTTHAT09280987/–SEEFRONTMATTER?2005ELSEVIERBVALLRIGHTSRESERVEDDOI101016/JEJPS200501011TKRISTMUNDSD′OTTIRETAL/EUROPEANJOURNALOFPHARMACEUTICALSCIENCES242005539–543541CELLSWERECULTUREDUNDERSTANDARDCONDITIONSINRPMI1640MEDIUMWITHLGLUTAMINEANDSUPPLEMENTEDWITH50IU/MLPENICILLINAND50?G/MLSTREPTOMYCINWITH10FETALCALFSERUMALLFROMGIBCOLIFETECHNOLOGIES,PAISLEY,UKFORTESTINGCELLSWEREPLACEDIN96WELLPLATESAT104CELLSPERWELLONEOFTHETESTSUBSTANCESWASADDEDINSTEPWISEDILUTIONS3HTHYMIDINEAMERSHAMPHARMACIABIOTECH,UKWASADDEDAT1?CIPERWELLAFTER24HOFCULTUREANDCULTURECONTINUEDFORFURTHER6HTHECELLSWERETHENHARVESTEDONTOGLASSFIBREFILTERSINAPACKARDC961960FILTERMAIDCELLHARVESTERANDTHENPLACEDINMICROSCINTOSCINTILLATIONLIQUIDTHERADIOACTIVITYWASCOUNTEDINATOPCOUNTSCINTILLATIONCOUNTERALLFROMPACKARDINSTRUMENTS,CONNECTICUT,USATHERESULTSAREEXPRESSEDASPERCENTAGEOFUNTREATEDCONTROL3RESULTS31EFFECTOFSOLUBILIZINGAGENTSONTHESOLUBILITYOFATRANORINTHESOLUBILITYOFATRANORININWATERWASNONDETECTABLEUSINGHPLCANATTEMPTWASMADETOSOLUBILIZEATRANORINUSINGTHESOLVENTSANDCOMPLEXANTSPREVIOUSLYFOUNDTOBESUITABLEFORTESTINGONCELLLINES,IEPROPYLENEGLYCOL,PEG400ANDHP?CDTHESOLUBILITYOFATRANORININPUREPEG400WASFOUNDTOBE037MG/MLANDINPROPYLENEGLYCOL0017MG/MLBUTTHEREWASNOMEASURABLESOLUBILITYOFATRANORININ10AQUEOUSMIXTURESOFTHESESOLVENTSHOWEVER,ATRANORINWASFOUNDTOBESOLUBLEINHP?CDFIG2SHOWSTHATTHESOLUBILITYOFATRANORININ10HP?CDISVERYLOWATPH6BUTISCONSIDERABLYHIGHERATPH80,00055MG/MLINSPITEOFHIGHERSOLUBILITYOFATRANORINATPH80THANTHEPHYSIOLOGICALPH74THELATTERWASCHOSENFORTHECELLEXPERIMENTSASTHESOLUBILITYOFATRANORININHP?CDWASLOWITWASATTEMPTEDTOUSEHP?CDTOINCREASEITSSOLUBILITYTHECENTRALCAVITYOFTHE?CYCLODEXTRINISLARGERTHANTHATOF?CYCLODEXTRINANDMIGHTTHEREFOREBEABLETOSOLUBILIZEMOREOFTHELICHENCOMPOUNDFIG2EFFECTOFPHONTHESOLUBILITYOFATRANORININ10?HYDROXYPROPYL?CYCLODEXTRINEACHPOINTREPRESENTSTHEMEAN±SDOFTHREEEXPERIMENTSFIG3EFFECTOFSOLUBILIZERCONCENTRATIONONATRANORINSOLUBILITYATPH74INSOLUTIONSOFHP?CD?ANDHP?CD?EACHPOINTREPRESENTSTHEMEAN±SDOFTHREEEXPERIMENTSTHIS,HOWEVER,WASNOTTHECASEFIG3SHOWSTHEEFFECTOFCYCLODEXTRINCONCENTRATIONONATRANORINSOLUBILITYATPH74THESOLUBILITYINCREASESASAFUNCTIONOFSOLUBILIZERCONCENTRATIONBUTTHEREISLITTLEDIFFERENCEINTHERESULTSOBTAINEDFORTHETWOCYCLODEXTRINSWITHTHEHP?CDBEINGSLIGHTLYBETTERATTHEHIGHESTCONCENTRATIONTESTED32EFFECTOFSOLUBILIZINGAGENTSONTHESOLUBILITYOFFUMARPROTOCETRARICACIDTHESOLUBILITYOFFUMARPROTOCETRARICACIDINWATERWASFOUNDTOBE00325MG/MLATPH4THESOLUBILITYWAS00069MG/MLBUTINCREASEDWITHINCREASINGPHANDWAS283MG/MLATPH74INSOLUTIONSOFBOTHPEG400ANDPROPYLENEGLYCOLTHESOLUBILITYOFFUMARPROTOCETRARICACIDAPPEAREDTOBEBETTERTHANINWATERALONE,BUTDUETODECOMPOSITIONOFTHECOMPOUNDINTHESESOLVENTSASWASAPPARENTFROMHPLCMEASUREMENTSITWASNOTPOSSIBLETODETERMINETHESOLUBILITYTHESOLUBILITYOFFUMARPROTOCETRARICACIDWASINCREASEDTO898MG/MLIN10HP?CDATPH74DECOMPOSITIONWASNOTSEENINTHECYCLODEXTRINSOLUTIONSPRESUMABLYBECAUSEAPARTOFTHEFUMARPROTOCETRARICACIDMOLECULEFITSINTOTHENONPOLARCYCLODEXTRINCAVITYANDISPROTECTEDFROMTHEENVIRONMENT33EFFECTOFTHELICHENCOMPOUNDSONTHYMIDINEUPTAKEOFCELLLINESTHETHREELICHENCOMPOUNDS,USNICACID,ATRANORINANDFUMARPROTOCETRARICACIDWERESOLUBILIZEDIN10SOLUTIONSOFHP?CDANDTESTEDATPHYSIOLOGICALPH74ONTHECELLLINESPANC1,T47DANDPC3THEEC50FORUSNICACIDAGAINSTPANC1WAS43?G/MLATASOLVENTCONCENTRATIONOF10?L/ML,WHICHISCOMPARABLETOTHEEC50PREVIOUSLYFOUNDAGAINSTK562OF47?G/MLTHEEC50FORUSNICACIDAGAINSTT47DWAS29?G/MLBUTAGAINSTPC3ITWASHIGHER,AT82?G/MLINCALCULATINGTHEEC50ACCOUNTWASTAKENOFDIRECTEFFECTSOFTHESOLVENTSTHESOLUBILIZINGAGENTHP?CDHADNOSIGNIFICANTEFFECTONPC3ANDPANC1BUTT47DWASMORESENSITIVE

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簡介：第一章、緒論第一章、緒論11細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)研究細(xì)胞基本生命活動規(guī)律的科學(xué)，它從不同層次上組要研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能，細(xì)胞增殖、分化、衰老與凋亡，細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，細(xì)胞基因表達(dá)與調(diào)控，細(xì)胞起源于進化等22細(xì)胞生物學(xué)研究內(nèi)容細(xì)胞生物學(xué)研究內(nèi)容①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究②生物膜與細(xì)胞器的研究③細(xì)胞骨架體系的研究④細(xì)胞增殖及其調(diào)控⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控⑥細(xì)胞的衰老與凋亡⑦細(xì)胞的起源與進化⑧細(xì)胞工程3細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)①1665英國人胡克用自己設(shè)計與制造的顯微鏡觀察了軟木（櫟樹皮的薄片。②荷蘭人列文虎克是第一個看到活細(xì)胞的人。4．細(xì)胞學(xué)說的建立及其意義細(xì)胞學(xué)說的建立及其意義18381839德國人SCHLEIDEN和SCHWANN提出CELLTHEORY（①有機體是由細(xì)胞構(gòu)成的；②細(xì)胞是構(gòu)成有機體的基本單位；③新細(xì)胞來源于已存在細(xì)胞的分裂。）1858德國人VIRCHOW提出“一切細(xì)胞來源于細(xì)胞”的著名論斷，進一步完善了細(xì)胞學(xué)說。5細(xì)胞學(xué)形成細(xì)胞學(xué)形成①細(xì)胞學(xué)的經(jīng)典時期②實驗細(xì)胞學(xué)與細(xì)胞學(xué)的分支及發(fā)展6相關(guān)期刊、雜志相關(guān)期刊、雜志NATURESCIENCECELL中國科學(xué)科學(xué)通報ZZZZZZＺＺＺＺＺＺＺ分子細(xì)胞生物學(xué)報第二章、細(xì)胞的統(tǒng)一性與多樣性第二章、細(xì)胞的統(tǒng)一性與多樣性1細(xì)胞的統(tǒng)一性細(xì)胞的統(tǒng)一性基本單位細(xì)胞共性①一切有機體都由細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞是構(gòu)成有機體的基本單位②細(xì)胞具有獨立的、有序的自控代謝體系，細(xì)胞是代謝與功能的基本單位③細(xì)胞是有機體生長與發(fā)育的基礎(chǔ)④細(xì)胞是遺傳的基本單位，細(xì)胞具有遺傳的全能性⑤沒有細(xì)胞就沒有完整的生命⑥關(guān)于細(xì)胞概念的一些新思考2細(xì)胞的多樣性細(xì)胞的多樣性原核原核細(xì)胞原核細(xì)胞沒有核膜，DNA為裸露的環(huán)狀分子，通常沒有結(jié)合蛋白。沒有恒定的內(nèi)膜系統(tǒng)，核糖體為70S型，通常稱為細(xì)菌基本特點基本特點①遺傳信息量小，主要的遺傳信息載體僅由一個環(huán)狀DNA構(gòu)成②細(xì)胞內(nèi)沒有分化出以膜為基礎(chǔ)的具有專門結(jié)構(gòu)與功能的細(xì)胞器和細(xì)胞核真核真核細(xì)胞特點1、細(xì)胞分裂分為核分裂和細(xì)胞質(zhì)分裂，并且分開進2、DNA和蛋白質(zhì)結(jié)合壓縮成染色體結(jié)構(gòu)，形成有絲分裂的結(jié)構(gòu)3、具有復(fù)雜的內(nèi)膜系統(tǒng)和細(xì)胞內(nèi)的膜結(jié)構(gòu)如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體、過氧化物酶體、乙醛酸循環(huán)體、胞內(nèi)體等4、具有特異的進行有氧呼吸的細(xì)胞器線粒體和光合作用的細(xì)胞器葉綠體5、具有復(fù)雜的骨架系統(tǒng)包括微絲、中間纖維和微管6、有復(fù)雜的鞭毛和纖毛7、具有小泡運輸系統(tǒng)胞吞作用和胞吐作用8、含有纖維素的細(xì)胞壁如植物細(xì)胞9、利用微管形成的紡錘體進行細(xì)胞分裂和染色體分離10、每個細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)成雙存在，二倍體分別來自于兩個親本11、通過減數(shù)分裂和受精作用進行有性生殖相同點相同點1都具有類似的細(xì)胞質(zhì)膜結(jié)構(gòu)2都以DNA作為遺傳物質(zhì)，并使用相同的遺傳密碼3都是以一分為二的方式進行細(xì)胞分裂4具有相同的遺傳信息轉(zhuǎn)錄和翻譯機制，有類似的核糖體結(jié)構(gòu)5代謝機制相同如糖酵解和TCA循環(huán)6具有相同的化學(xué)能貯能機制，如ATP合成酶原核位于細(xì)胞質(zhì)膜，真核位于線粒體膜上（三）激光掃描共焦顯微境特點①用激光作掃描光源，逐點、逐行、逐面快速掃描成像②分辨率大約是普通光學(xué)顯微鏡的3倍③能顯示細(xì)胞樣品的立體結(jié)構(gòu)④用途類似熒光顯微鏡,但能掃描不同層次,形成立體圖像⑤掃描的激光與熒光收集共用一個物鏡，物鏡的焦點即掃描激光的聚焦點，也是瞬時成像的物點四相差顯微鏡在構(gòu)造上，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個特殊之處①環(huán)形光闌位于光源與聚光器之間，作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐，焦聚到標(biāo)本上。②相位板在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4Λ五暗視野顯微鏡六倒置顯微鏡用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞，通常具有相差或DIC物鏡，有的還具有熒光裝置電子顯微鏡電子顯微鏡超薄切片超薄切片厚度僅50NM左右，用超薄切片機制作超薄切片技術(shù)的過程為超薄切片技術(shù)的過程為固定、脫水、包埋、切片、染色。冰凍蝕刻標(biāo)本置于100度的干冰或196度的液氮中，進行快速冰凍。用冷刀驟然將標(biāo)本斷開，升溫，冰在真空條件下迅即升華，暴露出斷面結(jié)構(gòu)蝕刻向斷面以45度角噴涂一層蒸汽鉑，再以90度角噴涂一層碳，加強反差和強度。然后用次氯酸鈉溶液消化樣品，把碳和鉑的膜剝下來，此膜即為復(fù)膜。復(fù)膜顯示出了標(biāo)本蝕刻面的形態(tài)，在電鏡下得到的影像即代表標(biāo)本中細(xì)胞斷裂面處的結(jié)構(gòu)。22細(xì)胞組分的分析方法細(xì)胞組分的分析方法一、離心技術(shù)一、離心技術(shù)細(xì)胞破碎細(xì)胞破碎差速離心在密度均一的介質(zhì)中由低速到高速逐級離心，用于分離不同大小的細(xì)胞和細(xì)胞器。差速離心只用于分離大小懸殊的細(xì)胞，更多用于分離細(xì)胞器。通過差速離心可將細(xì)胞器初步分離密度梯度離心1、速度沉降用途用于分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器特點介質(zhì)密度較低，介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的最小密度原理介質(zhì)密度梯度十分平緩,生物顆粒（細(xì)胞或細(xì)器）按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達(dá)到分離2、等密度沉降用途用于分離密度不等的顆粒特點介質(zhì)密度較高,陡度大,介質(zhì)的最高密度應(yīng)大于被分離組分的最大密度所需要的力場通常比速率沉降法大10100倍，故往往需要高速或超速離心原理細(xì)胞或細(xì)胞器在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)足夠大離心力或足夠長時間則沉降或漂浮到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達(dá)到平衡，從而將不同密度的細(xì)胞或細(xì)胞器分離二、細(xì)胞化學(xué)技術(shù)二、細(xì)胞化學(xué)技術(shù)DNADNA原位顯示原位顯示福爾根反應(yīng)的原理福爾根反應(yīng)的原理酸水解可以去除RNA，僅保留DNA，并除去DNA上嘌呤脫氧核苷酸鍵的嘌呤，使脫氧核糖的醛基暴露。所暴露的自由醛基與希夫試劑反應(yīng)呈紫紅色。免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)熒光素異硫氰酸熒光素、羅丹明免疫電鏡技術(shù)免疫電鏡技術(shù)免疫酶標(biāo)技術(shù)辣根過氧化物酶免疫膠體金技術(shù)金膠體顆粒定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)1流式細(xì)胞儀原理原理包在鞘液中的細(xì)胞通過高頻振蕩控制的噴嘴，形成包含單個細(xì)胞的液滴，在激光束的照射下，這些細(xì)胞發(fā)出散射光和熒光，經(jīng)探測器檢測，轉(zhuǎn)換為電信號，送入計算機處理，輸出統(tǒng)計結(jié)果，并可根據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度的細(xì)胞亞群，分離純度可達(dá)99。包被細(xì)胞的液流稱為鞘液，所用儀器稱為流式細(xì)胞計2顯微光譜分析技術(shù)顯微分光光度測定技術(shù)（主要有紫外光顯微分光光度測定法和可見光顯微分光光度測定法）原理利用細(xì)胞中有一些成分具有特定的吸收光譜的特性，測定細(xì)胞中某些物質(zhì)的含量。DNA含量50A33細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)一動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)1原代培養(yǎng)2原代細(xì)胞3細(xì)胞貼壁4接觸抑制5傳代培養(yǎng)6傳代細(xì)胞7細(xì)胞系度8轉(zhuǎn)化細(xì)胞9細(xì)胞株二細(xì)胞工程細(xì)胞工程細(xì)胞融合細(xì)胞融合應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)（過程過程單個B淋巴細(xì)胞→抗體（單一物質(zhì)→專一性）

簡介：細(xì)胞生物學(xué)（翟中和）配套習(xí)題細(xì)胞生物學(xué)（翟中和）配套習(xí)題第一章緒論第一章緒論1、填空題1、細(xì)胞生物學(xué)是細(xì)胞整體、超微結(jié)構(gòu)和分子水平上研究及其規(guī)律的科學(xué)。、2、名詞解釋1、細(xì)胞學(xué)說（CELLTHEORY）3、選擇題1、現(xiàn)今世界上最有影響的學(xué)術(shù)期刊是。ANATUNEBCELLCPNASDSCIENCE2、自然界最小的細(xì)胞是（A）病毒（B）支原體（C）血小板（D）細(xì)菌4、是非題1、現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)的基本特征是把細(xì)胞的生命活動和亞細(xì)胞的分子結(jié)構(gòu)變化聯(lián)系起來。（）5、問答題1當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究的熱點課題哪些2細(xì)胞學(xué)說的基本要點是什么細(xì)胞學(xué)說在細(xì)胞學(xué)發(fā)展中有什么重大意義3細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展可劃分為哪幾個階段各階段的主要特點是什么第二章細(xì)胞基本知識概要第二章細(xì)胞基本知識概要1、名詞解釋1血影（GHOST）2通道形成蛋白（PORIN）3纖維冠（FIBROUSCORONA）2、選擇題1、立克次氏體是（A）一類病毒（B）一種細(xì)胞器（C）原核生物（D）真核生物2、原核細(xì)胞的呼吸酶定位在（A）細(xì)胞質(zhì)中（B）質(zhì)膜上（C）線粒體內(nèi)膜上（D）類核區(qū)內(nèi)3、最小的細(xì)胞是3為什么說支原體可能是最小最簡單的細(xì)胞存在形式4說明真核細(xì)胞與原核細(xì)胞在遺傳裝置，基因表達(dá)及調(diào)控方面的區(qū)別。5真核細(xì)胞在亞顯微結(jié)構(gòu)水平可以劃分為哪三大基本結(jié)構(gòu)體系（據(jù)說在國內(nèi)，這是翟中和先提出來的）6細(xì)胞與病毒在起源上的關(guān)系有哪幾種假說你比較同意哪一種為什么（必須同意生物大分子→細(xì)胞→病毒這種，論據(jù)P26）7請簡要說明病毒的增殖過程。（今年SARS流行，而且陳建國和鄧宏魁現(xiàn)在都在研究SARS，還要看一下SARS病毒基本的結(jié)構(gòu)和增殖途徑）8在生命起源和進化過程中化學(xué)進化與生物進化的關(guān)系如何9MILLER實驗的方案是怎樣設(shè)計的有什么重要意義10微球?qū)W說和團聚體學(xué)說的主要內(nèi)容是什么11如何評價真核生物起源的內(nèi)共生假說和經(jīng)典假說12葉綠體可能起源于原核綠藻和藍(lán)細(xì)菌（藍(lán)藻）的觀點的根據(jù)是什么13HIV的分子結(jié)構(gòu)特征是什么HIV的英文全稱是什么14列出原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的主要差異。15蛋白質(zhì)組是什么1、RE走近蛋白質(zhì)組研究轉(zhuǎn)發(fā)自中華基因網(wǎng),非常謝謝PROTEOME（蛋白質(zhì)組），這個在各種字典里都還查不到的詞組，近幾年來開始在生命科學(xué)領(lǐng)域逐漸浮出水面，曝光頻率越來越高，蛋白質(zhì)組是什么它與我們有什么關(guān)系讓我們來揭開其神秘的面紗，一睹其迷人的風(fēng)采。一、什么是蛋白質(zhì)組研究基因，尤其是基因組研究形成了20世紀(jì)生命科學(xué)研究一道亮麗的風(fēng)景線，取得了巨大的成就。那么，知道了人類的全部基因組序列，就可以解決各種醫(yī)學(xué)問題嗎其實并不是這么簡單。僅憑基因組學(xué)這只單腳圓規(guī)，很難繪出完美的圓圈。隨著人類基因組計劃的逐步完成，科學(xué)家們又進一步提出了后基因組計劃，蛋白質(zhì)組研究是其中一個很重要的內(nèi)容。在人體內(nèi)真正發(fā)揮作用的是蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)扮演著構(gòu)筑生命大廈的“磚塊”角色，是生命活動的真正執(zhí)行者和體現(xiàn)者?；蚝帽纫粡堉圃祜w機和坦克的圖紙，蛋白質(zhì)就是根據(jù)圖紙制造的真正進行戰(zhàn)斗的飛機和坦克。雖然目前已完成了對人類基因的全部序列測定，但是單憑制造飛機和坦克的圖紙，不可能演繹出一場戰(zhàn)爭，也不會知道一場戰(zhàn)爭是如何發(fā)生、如何進行的。基因的主要功能是通過其表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)來實現(xiàn)的，而蛋白質(zhì)亦具有自身特有的活動規(guī)律，隨著生命活動的進程表現(xiàn)出極其動態(tài)的緊密協(xié)調(diào)的變化，蛋白質(zhì)在合成之后具有相對獨立的修飾、轉(zhuǎn)運和相互間作用能力，同時還具有對外界因素發(fā)生反應(yīng)的能力。因此，只有從蛋白質(zhì)組學(xué)的角度對所有蛋白質(zhì)的總和進行研究，即開展蛋白質(zhì)組學(xué)研究，才能更加貼近對生命現(xiàn)象和本質(zhì)的掌握，生命活動的本質(zhì)和活動規(guī)律才能找到答案。正是因為這樣，國際科學(xué)界預(yù)言，在21世紀(jì)，生命科學(xué)的熱點將從基因組學(xué)轉(zhuǎn)向蛋白質(zhì)組學(xué)，使后者成為新的前沿。蛋白質(zhì)組學(xué)研究不但對了解生命本質(zhì)有重要的意義，而且在疾病診斷治療、藥物篩選等有廣泛應(yīng)用前景。其中蘊藏著開發(fā)疾病診斷方法和新藥的線索。二、蛋白質(zhì)組能給我們帶來什么人體內(nèi)的每一細(xì)胞是由一萬余個不同蛋白質(zhì)的有機組合，不同蛋白質(zhì)的組合就構(gòu)成不同細(xì)胞的功能。要想把細(xì)胞內(nèi)部這些功能和信息全部展現(xiàn)出來，唯一的方法是利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，得到一張擁有各種蛋白質(zhì)點的“繁星圖“，利用現(xiàn)代科學(xué)分析技術(shù)，將此圖變成開發(fā)新藥的“探寶圖”，了解其藥物的細(xì)胞內(nèi)作用與運轉(zhuǎn)機制，成為藥物發(fā)現(xiàn)的“路標(biāo)”。蛋白質(zhì)組的研究不僅是探索生命奧秘的必須工作，也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑，為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益?，F(xiàn)在已經(jīng)知道，在疾病中只有一小部分是起因于基因突變，而各種疾病都有蛋白質(zhì)譜的動態(tài)變化，每種疾病在不同的發(fā)病階段，在任何癥狀出現(xiàn)之前，在蛋白質(zhì)水平方

簡介：農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位論文黃瓜花粉發(fā)育及細(xì)胞生物學(xué)特性研究STUDIEDONTHEPOLLENDEVELOPMENTANDCYTOBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFCUCUMBERCUCUMISSATIVUSL陳芬芬作物延邊大學(xué)學(xué)校代碼10184分類號分類號密級UDC學(xué)號2014050276延邊大學(xué)碩士學(xué)位論文黃瓜花粉發(fā)育及細(xì)胞生物學(xué)特性研究STUDIEDONTHEPOLLENDEVELOPMENTANDCYTOBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFCUCUMBERCUCUMISSATIVUSL研究生姓名陳芬芬培養(yǎng)單位延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱金東淳副教授學(xué)科專業(yè)作物研究方向植物生殖生物學(xué)論文提交日期2016年5月24日

簡介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文1英漢縮略語名詞對照英漢縮略語名詞對照英文縮寫英文縮寫英文全稱英文全稱中文全稱中文全稱RPMI1640ROSWELLPARKMEMORIALINSTITUTERPMI1640培養(yǎng)基PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液EDTAETHYLENEDIAMINETETRAACETICACID四乙酸二氨基乙烯PCRPOLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPCR反轉(zhuǎn)錄PCRRNARIBONUCLEICACID核糖核酸MRNAMESSENGERRNA信使RNADNADEOXYRIBONUCLEICACID脫氧核糖核酸CDNACOMPLEMENTARYDNA互補DNABPBASEPAIR堿基對G418GENETICIN遺傳霉素PMSFPHENYLMETHANESULFONYLFLUORIDE苯甲基磺酰氟SDSPAGEPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESIS聚丙烯酰胺凝膠電泳TMEDTETRAMETHYLETHYLENEDIAMINE四甲基乙二胺PVDFPOLYVINYLIDENEFLUORIDE聚偏二氟乙烯TBSTRISBUFFEREDSALINE三乙醇胺緩沖鹽水溶液ANNEXINVFITC/PIANNEXINVFLUORESCEINISOTHIOCYANATEPROPIDIUMIODIDE異硫氰酸熒光素標(biāo)記的膜聯(lián)素V/碘化丙啶CCK8CELLCOUNTINGKIT8細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒

簡介：分類號R73密級公開UDC610學(xué)校代碼10555碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文（專業(yè)學(xué)位）（專業(yè)學(xué)位）模擬不同照射模式對鼻咽癌細(xì)胞系模擬不同照射模式對鼻咽癌細(xì)胞系CNE2CNE2放射生物學(xué)效應(yīng)的影響放射生物學(xué)效應(yīng)的影響研究生姓名陳琛指導(dǎo)教師、職稱席許平主任醫(yī)師合作導(dǎo)師、職稱專業(yè)學(xué)位類別（領(lǐng)域）臨床醫(yī)學(xué)（腫瘤學(xué)）研究方向放射治療學(xué)所在學(xué)院湖南省腫瘤醫(yī)院二〇一五年五月一五年五月南華大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南華大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名年月日南華大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文是本人在南華大學(xué)攻讀（博/碩）士學(xué)位期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的學(xué)位論文。本論文的研究成果歸南華大學(xué)所有，本論文的研究內(nèi)容不得以其它單位的名義發(fā)表。本人同意南華大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保留學(xué)位論文；學(xué)校可根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文。同意學(xué)校將論文加入中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并按中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫出版章程規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。同意授權(quán)中國科學(xué)信息技術(shù)研究所將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。對于涉密的學(xué)位論文，解密后適用該授權(quán)。作者簽名年月日導(dǎo)師簽名年月日

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簡介：細(xì)胞生物學(xué)復(fù)習(xí)要點第一章緒論1細(xì)胞生物學(xué)的主要研究內(nèi)容及其目前研究的一些重大問題是什么當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容大致可歸納為以下10個方面生物膜與細(xì)胞器；細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)；細(xì)胞骨架體系；細(xì)胞核、染色體及基因表達(dá)；細(xì)胞增殖及其調(diào)控；細(xì)胞分化及干細(xì)胞生物學(xué)；細(xì)胞死亡；細(xì)胞衰老；細(xì)胞工程；細(xì)胞的起源與進化。當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究的課題歸納起來包括3個根本性的問題①基因組是如何在時間與空間上有序表達(dá)的②基因表達(dá)的產(chǎn)物是如何逐級組裝成能行使生命活動的基本結(jié)構(gòu)體系及各種細(xì)胞器的這種自組裝過程的調(diào)控程序于調(diào)控機制是什么③基因及其表達(dá)的產(chǎn)物，特別是各種信號分子與活性因子，是如何調(diào)解諸如細(xì)胞的增殖、分化、衰老與凋亡等細(xì)胞最重要的生命活動過程的2概述細(xì)胞學(xué)說的主要內(nèi)容。①細(xì)胞是有機體，一切動植物都是由細(xì)胞發(fā)育而來，并由細(xì)胞和細(xì)胞產(chǎn)物所構(gòu)成；②每個細(xì)胞作為一個相對獨立的單位，既有它“自己的”生命，又對與其他細(xì)胞共同組成的整體的生命有所助益；③新的細(xì)胞可以通過已存在的細(xì)胞繁殖產(chǎn)生。3從細(xì)胞學(xué)發(fā)展簡史中，你如何認(rèn)識細(xì)胞學(xué)說建立的重要意義細(xì)胞學(xué)說的提出對生物科學(xué)的發(fā)展具有重大的意義。細(xì)胞學(xué)說是達(dá)爾文進化論和孟德爾遺傳學(xué)確立的“基石”，是對生物學(xué)、醫(yī)學(xué)及其各個分支進一步發(fā)展所不可缺少的。4了解細(xì)胞生物學(xué)分支學(xué)科的主要研究內(nèi)容。①細(xì)胞遺傳學(xué)從細(xì)胞學(xué)角度，特別是從染色體的結(jié)構(gòu)與功能，以及染色體和其他細(xì)胞器的關(guān)系來研究遺傳現(xiàn)象，闡明遺傳和變異的機制。其核心就是染色體基因?qū)W說。②細(xì)胞生理學(xué)細(xì)胞對其周圍環(huán)境的反應(yīng)，細(xì)胞生長與繁殖的機制，細(xì)胞從環(huán)境中攝取營養(yǎng)的能力，細(xì)胞的興奮性、收縮性、分泌性，生物膜的主動運輸和能量的傳遞與生物電等。③細(xì)胞化學(xué)對細(xì)胞成分，特別是核酸與蛋白質(zhì)的定性。定位、定量以及動態(tài)變化研究。第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法1細(xì)胞形態(tài)的基本觀察方法有哪些，其作用是什么①光學(xué)顯微鏡（普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡、相差顯微鏡和微分干涉顯微鏡、熒光顯微鏡、激光掃描共焦顯微鏡）研究細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能，特別是生物大分子在活細(xì)胞中的定位及其動態(tài)變化和相互作用等；②電子顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)部的精細(xì)結(jié)構(gòu)；③掃描隧道顯微鏡直接觀察DNA、RNA和蛋白質(zhì)等生物大分子及生物膜、病毒等結(jié)構(gòu)。2舉出34種細(xì)胞生物學(xué)的研究方法及它們的作用。①超離心技術(shù)分離細(xì)胞組分；②免疫熒光技術(shù)、免疫電鏡技術(shù)特異蛋白抗原的定位與定性；③原位雜交技術(shù)細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性；④流式細(xì)胞術(shù)定量細(xì)胞化學(xué)分析與細(xì)胞分選。3細(xì)胞工程包括哪些方面的技術(shù)①細(xì)胞融合與單克隆抗體技術(shù)；②顯微操作技術(shù)與動物的克隆。4簡述細(xì)胞/組織培養(yǎng)的主要步驟及其應(yīng)用。用植物的體細(xì)胞（二倍體細(xì)胞），先經(jīng)纖維素酶處理去掉細(xì)胞壁，去壁的細(xì)胞稱為原生質(zhì)體。原生質(zhì)體在無菌培養(yǎng)基中可以生長和分裂，經(jīng)過誘導(dǎo)分化最終可長成植株。

簡介：1細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)第一章第一章緒論緒論11細(xì)胞生物學(xué)的任務(wù)是什么它的范圍都包括哪些細(xì)胞生物學(xué)的任務(wù)是什么它的范圍都包括哪些（一）任務(wù)任務(wù)細(xì)胞生物學(xué)的任務(wù)是以細(xì)胞為著眼點，與其他學(xué)科的重要概念兼容并蓄，來闡明生物各級結(jié)構(gòu)層次生命現(xiàn)象的本質(zhì)。（二）范圍范圍（1）細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)；（2）細(xì)胞分子水平上的結(jié)構(gòu)；（3）大分子結(jié)構(gòu)變化與細(xì)胞生理活動的關(guān)系及分子解剖。22細(xì)胞生物學(xué)在生命科學(xué)中所處的地位，以及它與其他學(xué)科的關(guān)系。細(xì)胞生物學(xué)在生命科學(xué)中所處的地位，以及它與其他學(xué)科的關(guān)系。（1）地位地位以細(xì)胞作為生命活動的基本單位，探索生命活動規(guī)律，核心問題是將遺傳與發(fā)育在細(xì)胞水平上的結(jié)合。（2）關(guān)系關(guān)系應(yīng)用現(xiàn)代物理學(xué)與化學(xué)的技術(shù)成就和分子生物學(xué)的概念與方法，研究生命現(xiàn)象及其規(guī)律。33如何理解如何理解EBWILSONEBWILSON所說的“一切生物學(xué)問題的答案最終要到細(xì)胞中去尋找”。所說的“一切生物學(xué)問題的答案最終要到細(xì)胞中去尋找”。（1）細(xì)胞是一切生物體的最基本的結(jié)構(gòu)和功能單位。（2）所謂生命實質(zhì)上即是細(xì)胞屬性的體現(xiàn)。生物體的一切生命現(xiàn)象，如生長、發(fā)育、繁殖、遺傳、分化、代謝和激應(yīng)等都是細(xì)胞這個基本單位的活動體現(xiàn)。（3）生物科學(xué)，如生理學(xué)、解剖學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、胚胎學(xué)、組織學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、分子生物學(xué)等，其研究的最終目的都是要從細(xì)胞水平上來闡明各自研究領(lǐng)域中生命現(xiàn)象的機理。（4）現(xiàn)代生物學(xué)各個分支學(xué)科的交叉匯合是21世紀(jì)生命科學(xué)的發(fā)展趨勢，也要求各個學(xué)科都要到細(xì)胞中去探索生命現(xiàn)象的奧秘。（5）鑒于細(xì)胞在生命界中所具有的獨特屬性，生物科學(xué)各分支學(xué)科若要研究各種生命現(xiàn)象的機理，都必須以細(xì)胞這個生物體的基本結(jié)構(gòu)和功能單位為研究目標(biāo)，從細(xì)胞中研究各自研究領(lǐng)域中生命現(xiàn)象的機理。44細(xì)胞生物學(xué)主要研究內(nèi)容是什么細(xì)胞生物學(xué)主要研究內(nèi)容是什么（1）細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)；（2）生物膜與細(xì)胞器；（3）細(xì)胞骨架體系；（4）細(xì)胞增殖及其調(diào)控；（5）細(xì)胞分化及其調(diào)控；（6）細(xì)胞的衰老與凋亡；（7）細(xì)胞起源與進化；（8）細(xì)胞工程。55當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究中的基本問題以及細(xì)胞基本生命活動研究的重大課題是什么當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究中的基本問題以及細(xì)胞基本生命活動研究的重大課題是什么研究的三個根本性問題研究的三個根本性問題（1）細(xì)胞內(nèi)的基因是如何在時間與空間上有序表達(dá)的問題。（2）基因表達(dá)的產(chǎn)物結(jié)構(gòu)蛋白與核酸、脂質(zhì)、多糖及其復(fù)合物，如何逐級裝配行使生命活動的基本結(jié)構(gòu)體系及各種細(xì)胞器的問題。（3）基因表達(dá)的產(chǎn)物大量活性因子與信號分子，如何調(diào)節(jié)細(xì)胞最重要的生命活動的問題。生命活動研究的重大課題生命活動研究的重大課題（1）染色體DNA與蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系非組蛋白對基因組的作用。322細(xì)胞的基本共性是什么細(xì)胞的基本共性是什么（1）所有的細(xì)胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)構(gòu)成的生物膜；（2）所有的細(xì)胞都有DNA與RNA兩種核酸；（3）所有的細(xì)胞內(nèi)都有作為蛋白質(zhì)合成的機器核糖體；（4）所有細(xì)胞的增殖都是一分為二的分裂方式。33為什么說病毒不是細(xì)胞蛋白質(zhì)感染子是病毒嗎為什么說病毒不是細(xì)胞蛋白質(zhì)感染子是病毒嗎（1）病毒是由一個核酸分子（DNA或RNA）芯和蛋白質(zhì)外殼構(gòu)成的，是非細(xì)胞形態(tài)的生命體，是最小、最簡單的有機體。僅由一個有感染性的RNA構(gòu)成的病毒，稱為類病毒類病毒；僅由感染性的蛋白質(zhì)構(gòu)成的病毒稱為朊病毒朊病毒。病毒具備了復(fù)制與遺傳生命活動的最基本的特征，但不具備細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，是不完全的生命體；病毒的主要生命活動必須在細(xì)胞內(nèi)才能表現(xiàn)，在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖；病毒自身沒有獨立的代謝與能量轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，必須利用宿主細(xì)胞結(jié)構(gòu)、原料、能量與酶系統(tǒng)進行增殖，是徹底的寄生物。因此病毒不是細(xì)胞，只是具有部分生命特征的感染物。（2）蛋白質(zhì)感染子是病毒的類似物，雖不含核酸，其增殖是由于正常分子的構(gòu)象發(fā)生轉(zhuǎn)變造成的，這種構(gòu)象異常的蛋白質(zhì)分子成了致病因子，這不同于傳統(tǒng)概念上的病毒的復(fù)制方式和傳染途徑，所以蛋白質(zhì)感染子是病毒的類似物。44為什么說支原體可能是最小最簡單的細(xì)胞存在形式為什么說支原體可能是最小最簡單的細(xì)胞存在形式（1）支原體能在培養(yǎng)基上生長；（2）具有典型的細(xì)胞膜；（3）一個環(huán)狀雙螺旋DNA是遺傳信息量的載體；（4）MRNA與核糖體結(jié)合為多聚核糖體，指導(dǎo)合成蛋白質(zhì)；（5）以一分為二的方式分裂繁殖；（6）體積僅有細(xì)菌的十分之一，能寄生在細(xì)胞內(nèi)繁殖。55說明原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的主要差別說明原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的主要差別。要點原核細(xì)胞真核細(xì)胞細(xì)胞核細(xì)胞核無膜包圍，稱為擬核有雙層膜包圍染色體形狀染色體形狀數(shù)目數(shù)目組成組成DNADNA序列序列環(huán)狀DNA分子一個基因連鎖群DNA裸露或結(jié)合少量蛋白質(zhì)無或很少重復(fù)序列核中的為線性DNA分子；線粒體和葉綠體中的為環(huán)狀DNA分子兩個或多個基因連鎖群核DNA同組蛋白結(jié)合，線粒體和葉綠體中的DNA裸露有重復(fù)序列基因表達(dá)基因表達(dá)RNA和蛋白質(zhì)在同一區(qū)間合成RNA在核中合成和加工；蛋白質(zhì)在細(xì)胞質(zhì)中合成細(xì)胞分裂細(xì)胞分裂二分或出芽有絲分裂或減數(shù)分裂內(nèi)膜無獨立的內(nèi)膜有，分化成細(xì)胞器細(xì)胞骨架細(xì)胞骨架無普遍存在呼吸作用和光合作用酶的分部呼吸作用和光合作用酶的分部質(zhì)膜線粒體和葉綠體（植物）核糖體核糖體70S（50S＋30S）80S（60S＋40S）第三章第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法細(xì)胞生物學(xué)研究方法11透射電鏡與普通光學(xué)顯微鏡的成像原理有何異同透射電鏡與普通光學(xué)顯微鏡的成像原理有何異同透射電鏡與光學(xué)顯微鏡的成像原理基本一樣，不同的是（1）透射電鏡用電子束作光源，用電磁場作透鏡；（2）光學(xué)顯微鏡用可見光或紫外光作光源，以光學(xué)玻璃為透鏡。22放射自顯影技術(shù)的原理根據(jù)是什么為何常用放射自顯影技術(shù)的原理根據(jù)是什么為何常用H3、C1414、P3232標(biāo)記物做放射自顯影標(biāo)記物做放射自顯影（一）原理根據(jù)（一）原理根據(jù)放射性同位素發(fā)射出的各種射線具有使照相乳膠中的溴化銀晶體還原（感光）的性能。利