簡介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文N乙酰半胱氨酸防治糖尿病性白內(nèi)障的動物和細胞生物學(xué)實驗研究姓名張曙申請學(xué)位級別碩士專業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師嚴宏20070401第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文2N乙酰半胱氨酸防治糖尿病性白內(nèi)障的乙酰半胱氨酸防治糖尿病性白內(nèi)障的動物和細胞生物學(xué)實驗研究動物和細胞生物學(xué)實驗研究碩士研究生張曙導(dǎo)師嚴宏教授主任醫(yī)師第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院眼科，西安710038摘要摘要目的目的通過觀察N乙酰半胱氨酸（NACETYLCYSTEINE，NAC）滴眼液對鏈脲佐菌素（STREPTOZOTOCIN，STZ）誘導(dǎo)的糖尿病性白內(nèi)障大鼠的晶狀體混濁程度進展的影響以及NAC對高糖（HIGHGLUCOSE，HG）誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細胞凋亡的作用，來探討NAC對糖尿病性白內(nèi)障的作用及其機制。方法方法1對85只大鼠行裂隙燈檢查，排除晶狀體病變。隨機抽取10只大鼠作為正常對照組，其余大鼠接受1％STZ（65MGKG）枸櫞酸緩沖液（20MMOLL，PH45）腹腔注射，72H后血糖值＞14MMOLL的大鼠作為糖尿病大鼠。治療組大鼠分別給予NAC（001％和005％）磷酸鈉緩沖液（25MMOLL，PH74）滴眼，3次D；其余組相應(yīng)給予磷酸鈉緩沖液（25MMOLLPH74）滴眼，3次D。英國國際合作研究項目基金NO070667Z03國家教育部留學(xué)回國人員啟動基金HG2507陜西省科技攻關(guān)項目2004K16G72

簡介：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文反義P44探討P44XPD亞復(fù)合物對人肝癌細胞SMMC7721的生物學(xué)影響姓名熊高飛申請學(xué)位級別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師熊向陽張吉翔20080101ABSTRACTOBJECTIVETOINVESTIGATETHEEFFECTSOFP44ONTHECELLCYCLEANDITSINTERACTIONWITHXPD，CDK7，CDK2，CDC25AC‘MYCMETHODSANTISENSEOLIGONUCLEOTIDESOFP44GENEWASTRANSFECTEDINTOSMMC7721CELLS；CELLLINESFORCOMPARISONWEREMATCHEDONTHESAMEGENETLCBACKGROUNDANDPASSAGETHEEXPRESSIONOFWILDTYPEXPD，CDK7，CDK2，CDC25AANDCMVCWEREDETECTEDBYRTPCRANDWESTERNBLOTTHECELLGROWTHANDTHECELLCYCLEWEREEXAMINEDBYMTFANDFLOWCYTOMETRYRESULTSAFTERTRANSFECTIONOFSMMC一7721WITHANTISENSEOLIGONUCLEOTIDESOFP44，THEEXPRESSIONOFXPDMRNAWASDECREASEDSIGNIFICANTLYTHEREWERERELATIVECHANGESWITHMOLECULARNETWORKINHEPATOMA；THEEXPRESSIONOFCELLCYCLEREGULATORYGENESINCLUDINGCDK7，CDK2，CDC25AANDCMYCWEREINCREASED；THEINHIBITORYEFFECTSOFXPDONCELLGROWTHWEREDECREASEDANDTHEHEPATOMACELLSGROWFASTCONCLUSIONXPDGENEISREGULATEDBYITSUPSTREAMREGULATORYGENE，P44，ANDITSFHNCTIONREQUIRETHEINTERACTIONOFXPDWITHP44，WHICHCOULDRESULTINTHECHANGEOFCDK7，CDK2，CDC25AANDCMYCGENESEXPRESSIONKEYWORDSHEPATOMA；P44；XPD；CELLCYCLEREGULATORYGENES111

簡介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文12號染色體三體慢性淋巴細胞白血病的臨床及生物學(xué)特征研究姓名裘哲君申請學(xué)位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（血液?。┲笇?dǎo)教師王健民20080401獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本人承擔本聲明的法律責任。學(xué)位論文作者簽名裘哲君彰一再簽字日期方年』一月1日學(xué)位論文使用授權(quán)書聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)第二軍醫(yī)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書連、伽靂學(xué)位論文作者簽名裘哲君蘇‘々盧導(dǎo)師簽名王健民簽字日期，礦年R月∥／日簽字日期年月日

簡介：中南大學(xué)博士學(xué)位論文IL24對上皮性卵巢癌SKOV3細胞株生物學(xué)的影響研究（臨床前研究）姓名馬水根申請學(xué)位級別博士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師朱付凡20080501博士學(xué)位論文中文摘要第一部分目的IL24真核表達載體PCDNA31MYCHISBIL廣24的構(gòu)建及鑒定。方法分離人外周血淋巴細胞，提取細胞總RNA，自行設(shè)計特異性引物，對II廣24編碼序列進行克隆，通過基因重組，連接到PCDNA31MYCHISB載體上，構(gòu)建IL24真核表達載體PCDNA31MYCHISBIL24，用PCR、酶切鑒定和序列狽定證實序列無誤后，大量擴增。結(jié)果1、正常人外周血淋巴細胞中提取的總RNA質(zhì)量檢測從正常人外周血淋巴細胞中提取的總RNA，經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳，可見28S、18S、5S三條帶，且28S的光密度值是18S的兩倍，表示該RNA樣品完整性好，降解少2、總RNA經(jīng)RTPCR擴增IL24基因以總RNA為模板，RTPCR擴增Ⅱ，24EDNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳擴增出約為600BP大小的特異性條帶，與預(yù)期設(shè)計的IL24EDNA大小相符。3、PCR鑒定以構(gòu)建的真核表達載體PEDNA31MYCHISBIL24為模板，PCR擴增II廠24DNA，經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳，擴增出約為600BP大小的特異性條帶，與預(yù)期設(shè)計的II廣24DNA大小相符。4、酶切鑒定經(jīng)藍白篩選后，挑取數(shù)個單菌落擴增，提取質(zhì)粒，用BAMHI和HINDIII雙酶切，1％瓊脂糖凝膠電泳，可見被酶切的質(zhì)粒出現(xiàn)兩條帶，約54KB、600BP大小，分別與PCDNA31一MYCHISB和II廣24基因片段大小一致。PCDNA31MYCHIS一B上有兩個XBAI酶切位點，用XBAI單酶切后，1％瓊脂糖凝膠電泳，可見被酶切的質(zhì)粒出現(xiàn)兩條帶，約54KB、600BP大小，分別與PCDNA31MYCHIS一B和兒24基因片段大小一致。5、質(zhì)粒的測序結(jié)果對經(jīng)上述鑒定后符合要求的質(zhì)粒交INVITROGEN公司進行序列測定，經(jīng)NCBI提供的BLAST程序分析對比，結(jié)果顯示本實驗獲得的IL24序列與GENEBANK公布的IL24基因序列完全一致，符合預(yù)期結(jié)果。

簡介：點擊查看更多正常人群與慢性肝病患者脂肪干細胞的生物學(xué)特性、可塑性及成肝分化的比較.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文5氮雜2′脫氧胞苷對人紅白血病K562細胞系生物學(xué)活性及DNA結(jié)合抑制因子4基因表達的影響姓名王利芳申請學(xué)位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（血液?。┲笇?dǎo)教師李登舉201105華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文3EFFECTOF5AZACDRONTHEBIOLOGICALACTIVITYINHIBITOFDNABINDING4ID4GENEEXPRESSIONOFHUMANERYTHROMYELOBLASTOIDLEUKEMIACELLLINEK562ABSTRACTOBJECTIVETOSTUDYTHEEFFECTOF5AZACDRONTHEBIOLOGICALACTIVITYOFHUMANERYTHROMYELOBLASTOIDLEUKEMIACELLLINEK562THEEXPRESSIONOFINHIBITOFDNABINDING4ID4TOSEARCHTHENEWTARGETOFGENETHERAPYMETHODS1TODETECTTHESITUATIONOFID4METHYLATIONINK562CELLLINEBYMETHYLATIONSPECIFICPCRMSPCR2TOANALYZETHEEXPRESSIONLEVELSOFID4MRNAINK562CELLLINEWITHTHETREATMENTOFDIFFERENTCONCENTRATIONSOF5AZACDR052510ΜMAFTER48HBYRQPCR3AFTERTREATEDBYDIFFERENTCONCENTRATIONSOF5AZACDR，K562CELLSWERESTAINEDWITHFITCLABELEDANNEXINVPROPIDIUMIODIDEANNEXINVFITCPITHECHANGEOFAPOPTOSISRATECELLCYCLEOFWEREANALYZEDBYFLOWCYTOMETRYRESULTSTHEK562CELLSEXISTID4GENEMETHYLATIONAFTER5AZACDRISADDEDTOTHEMEDIUMTHEREISADOSEDEPENDENTUPREGULATIONOFTHEGENEID4MRNAEXPRESSIONTHEDIFFERENCESOFTHEGENEID4MRNALEVELAMONGEXPERIMENTALGROUPSAREOBVIOUSP0015AZACDRCANALSOINDUCETHEAPOPTOSISOFK562THEAPOPTOSISRATESOFK562CELLSAREOFTIMEDOSEDEPENDENT5ΜM5AZACDRRESULTSIN15363K562CELLSAPOPTOSISAT24H48H72HRESPECTIVELYTHEAPOPTOSISRATESOFK562CELLSARE69663RESPECTIVELYAFTERTREATEDWITHDIFFERENTCONCENTRATIONSOF5AZACDR052510ΜMF48HOURSCOMPAREDWITHTHECONTROLGROUP0ΜMTHEREISASIGNIFICANTDIFFERENCEP005THECHANGEOFCELLCYCLEOFK562CELLSALSOAREOFDOSEDEPENDENTTREATMENTOFK562CELLSWITH5AZACDR25ΜMF48HCAUSEDA127FOLD154FOLDINCREASEINK562CELLSTHATARRESTING0G1PHASEINCOMPARISONWITHCONTROL

簡介：肺癌是一種常見惡性腫瘤，發(fā)病率高，嚴重影響人們的生活質(zhì)量。20世紀80年代以來，肺癌的治療取得了較大的進展，手術(shù)、放療、化療和免疫治療的聯(lián)合應(yīng)用，大大提高了患者的5年生存率。但手術(shù)、放療和化療并發(fā)癥多、毒副作用大。尋找新的有效、簡便、毒副作用小的治療方法成為醫(yī)務(wù)工作者關(guān)注的焦點。目前方興未艾的基因治療可能成為很有前景的腫瘤治療方式之一，RNA干擾屬于基因治療的一種新的方式。RNA干擾RNAINTERFERENCERNAI現(xiàn)象發(fā)現(xiàn)于1995年，迅速引起研究者的重視。RNAI是由雙鏈RNA介導(dǎo)的、在轉(zhuǎn)錄后水平封閉或沉默相應(yīng)基因表達的基因阻斷技術(shù)，其原理是小片段RNASIRNA依據(jù)堿基互補的原理，特異性地結(jié)合癌基因的MRNA，干擾其翻譯、轉(zhuǎn)錄形成蛋白質(zhì)的功能，阻抑癌蛋白的生成，抑制癌細胞生長或誘導(dǎo)細胞凋亡，從而達到抑制腫瘤細胞增殖的目的。RNA干擾已經(jīng)廣泛應(yīng)用于基因功能和各種腫瘤的治療的研究中。腫瘤實質(zhì)上是一種細胞周期調(diào)控紊亂性疾病。細胞周期的調(diào)控是一個及其復(fù)雜的過程，涉及到多因子、在多層次上的作用，在細胞周期調(diào)控中正性調(diào)控因子和負性調(diào)控因子之間的平衡失調(diào)將導(dǎo)致細胞周期出現(xiàn)紊亂，而泛素蛋白酶體系統(tǒng)通過對多種類型的短壽命周期調(diào)控因子的降解，保持細胞周期運行中正負調(diào)控因子之間的平衡，保證細胞周期的順利運行，在細胞周期調(diào)控中發(fā)揮重要作用。SKP2屬于泛素蛋白酶體系統(tǒng)中FBOX蛋白家族中一員，在泛素化降解蛋白質(zhì)過程中負責對底物蛋白的特異性識別，通過對多種靶蛋白的泛素化降解參與細胞周期調(diào)控。S期激酶相關(guān)蛋白2SKP2是ZHANG等人于1995年發(fā)現(xiàn)的一種蛋白質(zhì)，因最初發(fā)現(xiàn)它在S期與細胞周期蛋白結(jié)合的一種蛋白質(zhì)，所以命名為S期激酶相關(guān)蛋白。SKP2是泛素蛋白連接酶SCFSKP2的特異性識別底物的亞單位，屬于FBOX的家庭成員。SKP2參與了對細胞周期依賴性激酶抑制因子P27、P21、P57、130PRB2、E2F1、CYCLINE和HCLP等細胞周期因子的泛素化降解過程。SKP2通過促進細胞周期蛋白酶抑制物P27、P21的降解，推動細胞周期從G期向S期轉(zhuǎn)換。研究發(fā)現(xiàn)SKP2過表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后密切相關(guān)，近年來許多研究表明SKP2蛋白在許多惡性腫瘤組織及腫瘤細胞的表達增高，而P27蛋白表達是降低的，兩者存在明顯的負相關(guān)。許多研究都證實SKP2具有癌基因的特性，SKP2的表達水平及活性與淋巴瘤，口腔鱗狀細胞癌，膠質(zhì)母細胞瘤，淋巴瘤，乳房癌，結(jié)腸癌，肺癌，胃癌的惡性程度、侵襲性、轉(zhuǎn)移、預(yù)后密切相關(guān)。SKP2雖與細胞周期密切相關(guān)，但它調(diào)控細胞增殖以及在腫瘤中的發(fā)病機制仍不清楚。通過抑制SKP2表達，研究其對腫瘤細胞生物學(xué)活性的影響，了解與細胞周期調(diào)控因子之間的關(guān)系，對于揭示SKP2在細胞周期中的功能、在腫瘤中的發(fā)病機制及作為腫瘤治療的靶點的可行性都具有重要意義。已有大量研究證實采用SIRNA表達載體的方法能達到高效、特異抑制目的基因表達的效果，并且能延長對靶基因的抑制作用時間。因此本研究采用與SIRNA表達載體相關(guān)的干擾技術(shù)，旨在探討SKP2SIRNA表達載體對肺癌細胞內(nèi)源性SKP2基因的沉默作用?；赗NA干擾技術(shù)原理，構(gòu)建SKP2SIRNA質(zhì)粒質(zhì)粒載體，采用脂質(zhì)體包裹技術(shù)，將構(gòu)建的SKP2SIRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SPCA1肺癌細胞系，通過沉默肺癌細胞內(nèi)SKP2基因的表達，采用不同技術(shù)方法檢測構(gòu)建的SKP2SIRNA干擾質(zhì)粒對肺癌細胞增殖、生長、凋亡的影響，以及對接種的裸鼠腫瘤生長的抑制情況，探討SKP2SIRNA表達載體作為肺癌基因治療新策略的可行性以及SKP2在肺癌發(fā)生、發(fā)展中的機制。實驗分三部分第一部分目的首先篩選出高表達SKP2基因的肺癌細胞，然后構(gòu)建SKP2SIRNA真核表達質(zhì)粒，為SKP2基因功能研究打下實驗基礎(chǔ)。方法首先篩選出高表達SKP2基因的肺癌細胞株，作為下一步RNAI基因沉默的研究對象。采用RTPCR和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測兩株A549、SPCA1肺癌細胞株和HELA細胞中內(nèi)源性SKP2基因及蛋白的表達，篩選出高表達SKP2基因的肺癌細胞株。然后依據(jù)RNA干擾原理，采用RNAIDNA載體技術(shù)，以SKP2基因為靶點，設(shè)計、構(gòu)建、篩選靶向SKP2基因的小干擾RNA。根據(jù)人SKP2基因序列及二級結(jié)構(gòu)特征，設(shè)計合成寡核普酸，將其插入PGENESIL質(zhì)粒載體，構(gòu)建針對SKP2基因的RNA干涉真核表達載體。電泳法初步篩選正確的重組克隆。DNA測序驗證重組克隆插入序列的正確性。用構(gòu)建好的SKPZSIRNA表達載體脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染高表達SKP2的SPCA1肺癌細胞系，熒光鏡下檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率，G418篩選出陽性細胞克隆。取穩(wěn)定建株的克隆細胞，RTPCR、WESTERNBLOT檢測轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的肺癌細胞內(nèi)SKP2MRNA及蛋白水平的變化。結(jié)果RTPCR、WESTEMBLOT檢測結(jié)果表明SPCA1肺癌細胞和HELA細胞高表達SKP2，而A549肺癌細胞未檢測到SKP2的表達。酶切電泳分析和DNA測序證實重組質(zhì)粒SKP2SIRNA構(gòu)建成功；SKP2SIRNA對內(nèi)源SKP2基因的表達有明顯的抑制作用，明顯高于對照組，抑制率達712±55％、653±48％；SKP2SIRNA對SKP2蛋白明顯抑制作用明顯，抑制率達741±63％、672±55％，與對照組及陰性質(zhì)粒對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論SPCA1肺癌細胞內(nèi)高表達SKP2；構(gòu)建的重組質(zhì)粒SKP2SIRNA能特異、高效抑制SPCA1細胞內(nèi)源性SKP2基因的表達，為下一步研究SIRNA對肺癌細胞生長的影響打下實驗基礎(chǔ)。第二部分目的探討采用RNAI技術(shù)抑制SKP2基因表達后，SKP2SIRNA重組質(zhì)粒對肺癌細胞生長、增殖的抑制情況，以及對細胞周期信號因子P27、P21的影響。方法MTT、流式細胞儀檢測SKP2SIRNA重組質(zhì)粒細胞組和對照組SPCA1細胞細胞增殖、細胞周期的變化。流式細胞學(xué)、TUNEL技術(shù)檢測細胞凋亡。免疫組化、激光共聚焦、WESTERNBLOT檢測肺癌細胞內(nèi)P27、P21蛋白的表達改變。RTPCR檢測P27MRNA基因變化。結(jié)果SKP2SIRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肺癌SPCA1細胞后，細胞生長、增殖明顯被抑制，細胞凋亡增多。細胞周期檢測結(jié)果提示轉(zhuǎn)染SKP2SIRNA重組質(zhì)粒的細胞進入S期的比例減少，而阻滯在G0G1期細胞比例增加。在轉(zhuǎn)染SKP2SIRNA重組質(zhì)粒的細胞細胞周期調(diào)控因子P27、P21蛋白表達增強，而對照組及陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的肺癌細胞增殖及P27、P21蛋白末見明顯改變。結(jié)論SKP2SIRNA重組質(zhì)粒對肺癌細胞SPCA1的增殖有明顯抑制作用，并可誘導(dǎo)細胞凋亡增加，抑制細胞內(nèi)SKP2表達后能上調(diào)細胞內(nèi)細胞周期調(diào)控因子P27、P21蛋白的表達。第三部分目的為探討構(gòu)建的SKP2SIRNA質(zhì)粒載體對體內(nèi)腫瘤生長的影響，采用轉(zhuǎn)染SKP2SIRNA質(zhì)粒肺癌細胞建立肺癌動物模型，觀察腫瘤生長情況。方法以BALBC裸鼠為研究對象，采用皮下注射轉(zhuǎn)染SKP2SIRNA質(zhì)粒的SPCA1細胞和對照組細胞懸液，建立肺癌細胞的裸鼠動物模型通過觀察腫瘤形成時間，測量腫瘤體積和重量方法觀察腫瘤形成和腫瘤的生長狀況；采用免疫組織化學(xué)染色、WESTERNBLOT檢測腫瘤組織SKP2蛋白的表達。結(jié)果轉(zhuǎn)染SKP2SIRNA質(zhì)粒的肺癌細胞接種裸鼠皮下后，腫瘤生長明顯減慢。與對照組相比，轉(zhuǎn)染SKP2SIRNA質(zhì)粒組腫瘤體積明顯縮小，SKP2蛋白下調(diào)7354±42％、673±32％，而腫瘤內(nèi)細胞周期調(diào)控因子P27、P21蛋白表達均明顯上調(diào)。結(jié)論RNAI技術(shù)沉默SKP2蛋白表達后，SKP2SIRNA明顯抑制了體內(nèi)腫瘤的生長，上調(diào)P27、P21蛋白的表達。SKP2有望成為肺癌基因治療的靶點。

簡介：分類號UDC不同來源間質(zhì)干細胞的分離及多種藥物因素對其生物學(xué)特性的影響ISOLATIONANDEFFECTSOFMULTIDRUGONTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFMESENCHYMALSTEMCELLSFROMDIFFERENTTISSUES作者姓名指導(dǎo)教師申請學(xué)位級別孫曉春許化溪教授、許文榮教授博士學(xué)科專業(yè)臨床檢驗診斷學(xué)論文提交日期2010年11月論文答辯日期2010年12月學(xué)位授予單位和日期江蘇大學(xué)2010年12月評閱人PI，I●嗡孵一魯晨Y瀅瀛強國，聲明并表示謝意。、作者簽名EL期夕P、Y∥

簡介：天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文人頰脂墊與傳統(tǒng)吸脂術(shù)脂肪干細胞生物學(xué)特性比較姓名張圣敏申請學(xué)位級別碩士專業(yè)口腔醫(yī)學(xué)；口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師陳剛201205天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文均呈陰性表達，結(jié)果顯示，ASCS具有間充質(zhì)干細胞的表型特征。3、經(jīng)成骨培養(yǎng)后，ASCS的增殖速度較未成骨培養(yǎng)前明顯減慢，經(jīng)成骨誘導(dǎo)后的兩組ASCS相比，在前3天，誘導(dǎo)后的ASCS的增殖速度與未誘導(dǎo)時ASCS差異不大；47天時，頰脂墊部位成骨誘導(dǎo)的ASCS的增殖速度顯著快于吸脂術(shù)來源的ASCS成骨誘導(dǎo)后的增殖速度。且PO05，兩者有統(tǒng)計學(xué)差異。4、人不同部位ASCS成骨培養(yǎng)3天后，堿性磷酸酶活性頰脂墊組為158125U／LOOML，吸脂術(shù)組為943165U／LOOML，ASCS成骨培養(yǎng)7天后，堿性磷酸酶活性頰脂墊組為3384744U／LOOML，吸脂術(shù)組為1866370U／LOOML，成骨培養(yǎng)14天時堿性磷酸酶活性頰脂墊組為6156543U／LOOM，吸脂術(shù)組為4503456U／LOOML，所有結(jié)果經(jīng)T檢驗，均具有統(tǒng)計學(xué)差異PO05。結(jié)論1、人頰脂墊部位來源的ASCS相比吸脂術(shù)來源的ASCS，單位體積組織內(nèi)可提取的ASCS密度更高；且頰脂墊來源ASCS增殖活性高于吸脂術(shù)來源ASCS，且具有更高的成骨活性。2、人頰脂墊脂肪易于獲得，供區(qū)提取造成的損傷小，無明顯術(shù)后并發(fā)癥；并且頰脂墊組織的血管豐富，不同人群頰脂墊組織的大小是相似的，它們獨立于體重和脂肪的分布，不會受到體重和脂肪分布的影響，是穩(wěn)定可靠的ASCS組織來源。3、頰脂墊有望成為未來口腔頜面部，乃至全身各處骨組織工程種子細胞的理想供源。關(guān)鍵詞脂肪干細胞頰脂墊細胞培養(yǎng)增殖潛能成骨II

簡介：1RNA干擾EPCAM基因表達對膽囊癌細胞生物學(xué)行為的影響研究生賈興勝指導(dǎo)老師劉會春中文摘要目的利用RNA干擾技術(shù)沉默膽囊癌GBCSD細胞中上皮細胞黏附分子EPITHELIALCELLADHESIONMOLECULEEPCAM）基因的表達，探討沉默EPCAM基因表達對GBCSD細胞形態(tài)、增殖、凋亡及侵襲力的影響，為膽囊癌的基因治療提供一定的理論基礎(chǔ)和試驗依據(jù)。方法1、根據(jù)GENEBANKACCESSIONNUMBERBC014785提供的基因序列，利用INVITROGEN公司的在線RNAI設(shè)計工具設(shè)計針對EPCAM基因不同位點的4個特異性MIRNA干擾序列；將選擇的序列和相應(yīng)的基因組數(shù)據(jù)庫進行BLAST序列比對，確信所選擇的序列與其他的基因不具有同源性；以鼠MIR155為骨架構(gòu)建4個針對EPCAM基因的特異性MIRRNAI表達質(zhì)粒，并進行DNA測序驗證。2、用LIPOFECTAMINE2000介導(dǎo)分別將PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM1、2、3、4轉(zhuǎn)染人膽囊癌GBCSD細胞株，試驗另設(shè)陰性對照組（轉(zhuǎn)染PCDNA62GWEMGFPMIRNEG）及空白對照組（未轉(zhuǎn)染組），瞬轉(zhuǎn)48H后分別用RTPCR和WESTERNBLOT檢測各組GBCSD細胞中EPCAM的MRNA及蛋白的表達情況，篩選出干擾效率最強的一個MIRRNAI表達質(zhì)粒。3、用干擾效率最強的PCDNA62GWEMGFPMIR–EPCAM1轉(zhuǎn)染GBCSD細胞作為干擾組，觀察GBCSD細胞的生物學(xué)行為變化①顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染前后細胞形態(tài)學(xué)的變化；②MTT法檢測細胞增殖的變化；③ANNEXINVPI雙染法流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡的變化；④TRANSWELL侵襲實驗檢測細胞侵襲力的變化。結(jié)果1、DNA測序分析證實，表達質(zhì)粒PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM1、PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM2、PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM3、PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM4中的插入片段序列均與設(shè)計的MIRNAOLIGO序列一致，4個針對EPCAM基因的MIRRNAI表達載體均構(gòu)建成功。2、轉(zhuǎn)染48H后，RTPCR結(jié)果顯示，PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM1、PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM2、PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM3、PCDNA62GWEMGFPMIREPCAM4轉(zhuǎn)染組中EPCAMMRNA的相對表3EFFECTSOFEPCAMGENESILENCINGBYRNAINTERFERENCEONBIOLOGICALBEHAVISOFHUMANGALLBLADDERCANCERCELLSABSTRACTOBJECTIVETOOBSERVETHEEFFECTOFEPITHELIALCELLADHESIONMOLECULEEPCAM）GENESILENCINGBYRNAINTERFERINGTECHNOLOGYONTHESHAPEPROLIFERATIONAPOPTOSISINVASIVENESSOFGBCSDCELLSTOPROVIDETHEYEXPERIMENTALPROOFFGENETHERAPYOFGALLBLADDERNEOPLASMSMETHODS1ACCDINGTOTHESEQUENCEPROVIDEDBYGENEBANKACCESSIONNUMBERBC014785，F(xiàn)OURDIFFERENTPREMIRNAOLIGONUCLEOTIDESEQUENCESTARGETINGEPCAMWEREDESIGNEDBYUSINGINVITROGEN’SRNAIDESIGNERONLINE；THESESEQUENCESWHICHCRESPONDWITHMIRNAWEREBLASTANALYZEDTOMAKESURETHATTHEYWERENOTHOMOLOGYWITHGENOMEDATABASE；THEARTIFICIALMIRNAWHICHISBASEDONTHEMURINEMIR155WERECONSTRUCTEDTOPRODUCESILENCINGOFEPCAM2FOURRECOMBINANTPLASSTARGETINGHUMANEPCAMGENEWERERESPECTIVELYTRANSFECTEDINTOGBCSDCELLSBYLIPOFECTAMIM2000CELLSTRANSFECTEDWITHPCDNA62GWEMGFPMIRNEGWASASNCGROUPCELLSNONTRANSFECTEDWASASBLANKCONTROLGROUPRTPCRWESTERNBLOTWEREUSEDTODETECTTHEMRNAPROTEINEXPRESSIONOFEPCAMADOPTEDTOTHERECOMBINANTPLASWHICHSHOWEDTHEMOSTOPTIMALINHIBITIONEFFT3AFTERTRANFECTEDBYPCDNA62GWEMGFPMIREPCAM1WITHTHEHIGHESTINHIBITEDRATE①THECELLULARSHAPEOFGBCSDCELLWASOBSERVEDTHROUGHMICROSCOPY；②CELLPROLIFERATIONWASANALYZEDBYMTTASSAY；③CELLAPOPTOSISWASDETECTEDBYFLOWCYTOMETRY；④CELLINVASIVENESSWASDETERMINEDBYMATRIGELINVASIONASSAYSRESULTS1FOUREPCAMTARGETEDMICRNAMIRNA1234WERESUCCESSFULLYEDINTOTHEPLASVECTPCDNA62GWEMGFPMIR，THECODINGSEQUENCESOFTHEOBTAINEDMIRNAWERECONSISTENTWITHTHEDESIGNEDFRAGMENTS2THERECOMBINANTPLASSPCDNA62GWEMGFPMIREPCAM1、

簡介：目的通過制作良性膽管狹窄（BENIGNBILIARYSTRICTURE，BBS）兔動物模型，獲得膽管良性狹窄標本并體外分離和培養(yǎng)良性狹窄膽管成纖維細胞。通過內(nèi)毒素（LIPOPOLYSACIDE，LPS）刺激實驗，觀察LPS對體外培養(yǎng)的兔良性狹窄膽管組織中成纖維細胞的形態(tài)，增殖活性，Ⅰ、Ⅲ型膠原分泌和轉(zhuǎn)化生長因子Β（TRANSFMINGGROWTHFACT，TGFΒ1）、干擾素Γ（INTERFERONΓ，IFNΓ）分泌的影響，探討LPS在早期膽管瘢痕愈合中的影響和其可能的作用機制。方法通過鉗夾法建立新西蘭大白兔膽管良性狹窄動物模型1，造模后7天取出病變膽管，應(yīng)用胰蛋白酶消化法聯(lián)合組織塊法分離培養(yǎng)膽管成纖維細胞23，用含10％胎牛血清的改良培養(yǎng)基（DULBECCOMODIFIEDEAGLEMEDIUM，DMEM）進行培養(yǎng)并傳代。倒置顯微鏡下觀察成纖維細胞形態(tài)。選用第35代膽管成纖維細胞隨機分為對照組和內(nèi)毒素刺激組，應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽（METHYLTHIAZOLYLTETRAZOLIUM，MTT）法檢測不同濃度（005ΜGML，010ΜGML，025ΜGML，05％ΜGML，100ΜGML，200ΜGML）LPS溶液對兔膽管成纖維細胞增殖和活力的影響；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAY，ELISA）檢測不同濃度內(nèi)毒素作用后成纖維細胞Ⅰ型、Ⅲ型膠原分泌的變化。除了上述指標以外，還采用ELISA法檢測成纖維細胞培養(yǎng)上清液中TGFΒ1、IFNΓ的含量，探討LPS對成纖維細胞可能具有的作用機制。結(jié)果（1）鉗夾后的膽總管肉眼可見充血、水腫，術(shù)后7天再開腹取標本時可見膽管周圍組織有比較明顯的粘連。肝臟可見輕度淤膽表現(xiàn)。粘連組織疏松，容易分離，分離粘連后見膽管仍有淤血和腫脹，近端膽管擴張。（2）在倒置顯微鏡下觀察體外培養(yǎng)的細胞呈長梭形、多角形或不規(guī)則形，細胞質(zhì)透明；細胞核大，橢圓形，顏色淡。每個細胞通常含23個核。（3）LPS濃度在005050ΜGML時，促進成纖維細胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型膠原合成（P結(jié)論（1）兔膽總管鉗夾法可以作為一種獲取良性狹窄膽管成纖維細胞的方法。（2）胰蛋白酶消化法聯(lián)合組織塊法分離培養(yǎng)兔膽管成纖維細胞是一種較好的細胞培養(yǎng)方法。（3）在一定濃度的LPS刺激后對成纖維細胞的分裂和增殖等生物學(xué)特性有促進作用，濃度達到峰值后開始出現(xiàn)抑制。表明在一定的濃度的LPS存在時可能促進膽管損傷的修復(fù)，但是過度修復(fù)會造成膽管良性狹窄；過高的濃度可能會延遲甚至阻礙膽管損傷的修復(fù)。（4）LPS對良性狹窄膽管成纖維細胞作用機制可能與促進TGFΒ1的分泌和抑制IFNΓ分泌有關(guān)。

簡介：博士學(xué)位論文學(xué)校代碼學(xué)號L0023B2009003中國地區(qū)2371例淋巴組織腫瘤分布特點的分析及原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特點的研究所院北京協(xié)和醫(yī)院似姓名孫健指導(dǎo)教師陳杰導(dǎo)師小組崔全才，盧朝輝學(xué)科專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)臨床型研究方向淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特點完成日期2011年5月”圜醫(yī)學(xué)科學(xué)院、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文2中文摘要第一部分中國地區(qū)2371例淋巴組織腫瘤分布特點的分析為了研究中國地區(qū)淋巴組織腫瘤的分布特征，我們收集了4家大型醫(yī)院20042008年明確診斷為淋巴組織腫瘤的2371例病例，對其按WHO組織學(xué)類型、性別、年齡及發(fā)生部位進行了詳細分類及分析。在這2371例病例中，成熟B細胞腫瘤占6820％，成熟T／NK細胞腫瘤占2117％，霍奇金淋巴瘤占742％，前驅(qū)淋巴組織腫瘤占321％。依據(jù)WHO分型，所收集的病例中最常見的組織學(xué)類型為彌漫大B細胞淋巴瘤3568％，其他常見的類型依次為結(jié)外邊緣區(qū)淋巴瘤9。62％，經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤72L％，B細胞淋巴瘤，未分類582％，外周T細胞淋巴瘤，非特殊類型553％，T／NK細胞淋巴瘤，未分類544％及結(jié)外N科T細胞淋巴瘤502％。在大多數(shù)組織學(xué)類型的腫瘤中，男性所占比例明顯較女性高。所有腫瘤總的男／女為162。大多數(shù)成熟非霍奇金淋巴瘤發(fā)生于成年人，平均年齡為522歲，而前驅(qū)淋巴組織淋巴瘤則多發(fā)生于年輕人，平均年齡為253歲。綜上，我們的結(jié)果顯示，中國地區(qū)的淋巴組織腫瘤有著獨特的分布特點，這些特點多與西方國家不同，但與遠東地區(qū)其他國家的分布特點相類似。第二部分原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特點在西方國家，原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤的發(fā)生多與乳糜瀉相關(guān)，稱為經(jīng)典型腸病相關(guān)T細胞淋巴瘤I型EATL。乳糜瀉在亞洲地區(qū)罕見，此地區(qū)原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤見諸報道的組織學(xué)類型多為II型EARI，、原發(fā)性腸道NK細胞淋巴瘤、外周T細胞淋巴瘤等。為了研究中國地區(qū)原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特征，我們收集了北京協(xié)和醫(yī)院病理科19992009年間原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤病例38例，通過BIOMED2TCR基因重排、EBER原位雜交、免疫組化及對相關(guān)I臨床病理特點進行評估的方法，將此38例原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤病例進行詳細分型，并比較各類型間的臨床病理差異?；贐IOMED2TCR重排檢測結(jié)果及其他指標，我們首先將38例原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤病例分為NK細胞淋巴瘤組N6及T細胞淋巴瘤組N_32。NK細胞淋巴瘤組病人的平均年齡為37歲，所有的NK細胞淋巴瘤的腫瘤細胞EBER原位雜交均彌漫陽性且BIOMED2TCR重排陰性。與T細胞淋巴瘤組病例相比，NK細胞淋巴瘤組病人總體預(yù)后明顯較差且具有統(tǒng)計學(xué)意義P00247。通過對乳糜瀉病史的采集及對腫物周邊腸黏膜是否存在腸病的組織形態(tài)的評估，32例T細胞淋巴瘤組病例被進一步細分為II型EATL117，外周T

簡介：蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人承擔本聲明的法律責任。論文作者簽名聾贊塑ET期型L二壘二＆蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致蘇州大學(xué)有權(quán)向國家圖書館、中國社科院文獻信息情報中心、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所含萬方數(shù)據(jù)電子出版社、中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在年一月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文口論文作者簽名疊彰礁ET期拙二竺二壁導(dǎo)師簽名

簡介：分類號R7351UDC密級重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目過表達過表達BECLIN1對食管癌對食管癌ECA109細胞生物學(xué)行為的影響細胞生物學(xué)行為的影響作者姓名洪斌申請學(xué)位級別碩士學(xué)科、專業(yè)名稱外科學(xué)外科學(xué)論文答辯年月2013年5月2013年4月指導(dǎo)教師姓名（職稱、單位名稱）吳慶琛吳慶琛教授教授重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文1英漢縮略語名詞對照英漢縮略語名詞對照英文縮寫英文縮寫英文全稱英文全稱中文全稱中文全稱AADENINE腺嘌呤APAMMONIUMPERSULFATE過硫酸銨BCABICINCHONINICACID二喹啉甲酸BPBASEPAIR堿基對CCYTOSINE胞嘧啶DDALTON道爾頓DAB33DIAMINOBENZIDINE二氨基聯(lián)苯胺DDH2ODOUBLEDISTILLEDWATER雙蒸水DEPCDIETHYLPYROCARBONATE焦碳酸二乙酯DMSODIMETHYLSULPHOXIDE二甲基亞砜ECLELECTROCHEMILUMINESCENCE電化學(xué)發(fā)光EDTAETHYLENEDIAMIETRAACETICACID乙二胺四乙酸GGUANINE鳥嘌呤H2O2HYDROGENPEROXIDE過氧化氫HRPHSERADISHPEROXIDASE辣根過氧化物酶KDKILODALTON千道爾頓MINMINUTE分鐘MLMILLILITER毫升NMNANOMETER納米ODOPTICALDENSITY光密度PAGEPOLYACRYLAEELECTROPHESIS聚丙烯酰胺凝膠電泳PCRPOLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈反應(yīng)PMSFPHENYLMETHANESULFONYLFLUIDE苯甲基磺酰氟PVDFPOLYVINYLIDENEFLUIDE聚偏二氟乙烯RNARIBONUCLEICACID核糖核酸RTPCRREVERSETRANIONPCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)

簡介：目的探究新生大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞ALVEOLARTYPEⅡEPITHELIALCELLATⅡ的原代培養(yǎng)方法。通過脂多糖LIPOPOLYSACIDELPS制造細胞炎癥模型芪蛭皺肺顆粒給藥干預(yù)觀察其對致炎ATⅡ細胞形態(tài)學(xué)、生長周期、線粒體活性、肺泡表面活性蛋白ASPA的影響。以探察其防治慢性阻塞性肺疾病CHRONICOBSTRUCTIVEPULMONARYDISEASECOPD的作用機制同時為開發(fā)研究芪蛭皺肺顆粒提供藥效學(xué)基礎(chǔ)。方法取SPF級新生WISTAR大鼠肺臟采用胰蛋白酶聯(lián)合膠原酶消化法分離ATⅡ細胞免疫黏附結(jié)合反復(fù)貼壁法純化細胞體外培養(yǎng)細胞透射電鏡鑒定細胞。細胞造模方法10組生長狀態(tài)及數(shù)目接近的細胞2組不加LPS2組加5UGML的LPS2組加10UGML的LPS2組加20UGML的LPS2組加40UGML的LPS干預(yù)1天。第二天向用5種濃度LPS干預(yù)過的細胞其中一組加入100UGML的芪蛭皺肺顆粒干預(yù)2天同濃度的另一組作對照。觀察并檢測各組ATⅡ細胞的形態(tài)學(xué)改變板層小體、線粒體和生長周期的變化以及SPA的表達。結(jié)果1原代培養(yǎng)的ATⅡ細胞生長狀態(tài)良好。2電鏡下觀察到板層小體。LPS組板層小體數(shù)目減少芪蛭皺肺顆粒干預(yù)組其數(shù)目有所增加。3MTT顯示LPS組ATⅡ細胞出現(xiàn)異常增殖情況且其增殖率隨LPS濃度的升高而加強。芪蛭皺肺顆粒干預(yù)后細胞增殖受到了抑制增殖率有所下降。4細胞周期檢測結(jié)果顯示LPS組ATⅡ細胞的細胞周期處于G2期和S期的百分比較高。其增殖百分比隨著LPS濃度的升高而上升。芪蛭皺肺顆粒干預(yù)后G2期和S期的百分比有所下降。5激光共聚焦顯微鏡觀察線粒體羅丹明123染色結(jié)果顯示空白組細胞的線粒體活性強熒光亮度高。LPS組隨著其濃度的升高熒光強度逐漸減弱。加入芪蛭皺肺顆粒干預(yù)后熒光強度有所恢復(fù)。6SABC免疫組化法檢測SPA顯示①DAB顯色空白組的ATⅡ細胞質(zhì)內(nèi)可以觀察到較多的棕黃色顆粒?？瞻准榆悟伟櫡晤w粒組細胞內(nèi)可見較空白組更多的棕黃色顆粒顏色較深。而LPS組細胞內(nèi)棕黃色顆粒明顯減少且LPS濃度越高其棕黃色顆粒越少、顏色越淺。芪蛭皺肺顆粒干預(yù)組的細胞內(nèi)棕色顆粒較之同濃度LPS誘導(dǎo)組有所增加且顏色有一定加深。②FITC熒光染色空白組的ATⅡ細胞熒光較強?？瞻准榆悟伟櫡晤w粒組細胞熒光強度較空白組更大。而LPS組細胞熒光強度減弱且隨著LPS濃度的增高熒光越來越淡芪蛭皺肺顆粒干預(yù)組細胞的熒光強度較之同濃度LPS誘導(dǎo)組有所增加。結(jié)論本次實驗提取的原代ATⅡ細胞符合體外實驗要求第2472H內(nèi)處于最佳生長狀態(tài)是進行實驗研究的理想時間段。LPS可以促使ATⅡ細胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)而異常增殖并減弱ATⅡ細胞的SPA表達降低該細胞的生物學(xué)活性。芪蛭皺肺顆粒對LPS誘導(dǎo)致炎肺泡Ⅱ型上皮細胞的異常增殖有抑制作用可改善細胞超微結(jié)構(gòu)促進SPA表達有助于提高ATⅡ細胞的生物學(xué)活性。