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簡介：生物醫(yī)用高分子材料及應用POLYMERICBIOMATERIALSANDITSAPPLICATIONS,,生物醫(yī)用高分子材料定義,生物醫(yī)用高分子材料POLYMERICBIOMATERIALS是指在生理環(huán)境中使用的高分子材料,它們中有的可以全部植入體內,有的也可以部分植入體內而部分暴露在體外,或置于體外而通過某種方式作用于體內組織。,生物醫(yī)用材料分類,天然生物材料如豬心瓣膜、牛心包、羊膜等金屬材料如鈦及其合金、無機非金屬材料如羥基磷灰石、生物玻璃等高分子材料雜化生物醫(yī)用材料。,生物醫(yī)用高分子的發(fā)展,材料發(fā)展的第一階段始于1937年,其特點是所用高分子材料都是已有的現(xiàn)成材料,如用丙烯酸甲酯制造義齒的牙床。,,第二階段始于1953年,其標志是醫(yī)用級有機硅橡膠的出現(xiàn),隨后又發(fā)展了聚羥基乙酸酯縫合線以及四種聚醚氨酯心血管材料,從此進入了以分子工程研究為基礎的發(fā)展時期。該階段的特點是在分子水平上對合成高分子的組成、配方和工藝進行優(yōu)化設計,有目的地開發(fā)所需要的高分子材料。,,目前的研究焦點已經(jīng)從尋找替代生物組織的合成材料轉向研究一類具有主動誘導、激發(fā)人體組織器官再生修復的新材料,這標志著生物醫(yī)用高分子材料的發(fā)展進入了第三個階段。其特點是這種材料一般由活體組織和人工材料有機結合而成,在分子設計上以促進周圍組織細胞生長為預想功能,其關鍵在于誘使配合基和組織細胞表面的特殊位點發(fā)生作用以提高組織細胞的分裂和生長速度,醫(yī)用高分子分類及應用,1與血液接觸的高分子材料與血液接觸的高分子材料是指用來制造人工血管、人工心臟血囊、人工心瓣膜、人工肺等的生物醫(yī)用材料,要求這種材料要有良好的抗凝血性、抗細菌粘附性,即在材料表面不產(chǎn)生血栓．不引起血小板變形,不發(fā)生以生物材料為中心的感染。,,人工血管材料有尼龍、聚酯、聚四氟乙烯、聚丙烯及聚氨酯等。人工心臟材料多用聚醚氨酯和硅橡膠等。人工肺多用聚四氟乙烯、硅橡膠等材料人工腎材料除要求具備良好的血液相容性外,還要求材料具有足夠的濕態(tài)強度、有適宜的超濾滲透性等,可充當這一使命的材料有乙酸纖維素、銅氨再生纖維素、尼龍、聚砜及聚醚砜等。,,為提高人造器官的血液相容性,現(xiàn)階段的研究重點是對現(xiàn)有生物材料的表面進行改性和修飾,其方法有接枝親水性長側鏈引入生物活性物質抑制血液與外源材料的相互作用使材料具有微相分離結構聚合物表面種植內皮細胞等,2組織工程用高分子材料,細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術的日臻成熟和生物相容性材料的開發(fā)與研究,使得創(chuàng)造由活細胞和生物相容性材料組成的人造生物組織或器官成為可能。生物相容性材料的開發(fā)是組織工程核心技術之一。,,組織工程中的生物材料主要發(fā)揮下列作用提供組織再生的支架或三維結構調節(jié)細胞生理功能免疫保護，當完成自己的使命后,作為組織生長骨架的生物高分子材料則降解為無毒的小分子被機體吸收。作為這種材料使用的聚合物主要有聚乳酸PLA等。,3藥用高分子材料,作為藥用高分子必須具備下列條件本身及其分解產(chǎn)物應無毒,不會引起炎癥,無致癌性進入血液系統(tǒng)的藥物不會引起血栓具有水溶性,能在體內水解為具有藥理活性的基團能有效到達病灶處,并積累一定濃度口服藥劑的高分子殘基能通過排泄系統(tǒng)排出體外。,,藥用高分子可分為三類（１）具有藥理活性的高分子藥物。它們本身具有藥理作用,斷鏈后即失去藥性,是真正意義上的高分子藥物。天然藥理活性高分子有激素、肝素、葡萄糖、酶制劑等。合成藥理活性高分子如聚4乙烯吡啶N氧撐是較早研究的代用血漿。,,（２）低分子藥物的高分子化。低分子藥物在體內新陳代謝速度快,半衰期短,體內濃度降低快,從而影響療效,故需大劑量頻繁進藥,而過高的藥劑濃度又會加重副作用,此外,低分子藥物也缺乏進入人體部位的選擇性。將低分子藥物與高分子結合的方法有吸附、共聚、嵌段和接枝等。第一個實現(xiàn)高分子化的藥物是青霉素,,（３）藥用高分子微膠囊。將細微的藥粒用高分子膜包覆起來形成微小的膠囊是近年來生物醫(yī)藥工程的一場革命。藥物經(jīng)微膠囊化處理后可以達到下列目的延緩、控制釋放藥物,提高療效掩蔽藥物的毒性、刺激性和苦味等不良性質,減小對人體的刺激使藥物與空氣隔離,防止藥物在存放過程中的氧化、吸潮等不良反應,增加貯存的穩(wěn)定性,4醫(yī)藥包裝用高分子材料,包裝藥物的高分子材料大體上可分為軟、硬兩種類型。硬型材料如聚酯、聚苯乙烯、聚碳酸酯等,由于其強度高、透明性好、尺寸穩(wěn)定、氣密性好,常用來代替玻璃容器和金屬容器,制造飲片和膠囊等固體制劑的包裝。軟型材料如聚乙烯、聚丙烯、聚偏氯乙烯及乙烯醋酸乙烯共聚物等,常加工成復合薄膜,主要用來包裝固體沖劑、片劑等藥物。,5眼科用高分子材料,隱形眼鏡是最常見的眼科用高分子材料制品，它對材料有如下要求具有優(yōu)良的光學性質,折光率與角膜相接近良好的潤濕性和透氧性生物惰性,即耐降解且不與接觸面發(fā)生化學反應有一定的力學強度,易于精加工及抗污漬沉淀等。常用的隱形眼鏡材料有聚甲基丙烯酸Β羥乙酯等，發(fā)生病變的角膜和晶狀體也可用人工角膜和人工晶狀體替代。,6醫(yī)用粘合劑與縫合線,生物醫(yī)用粘合劑是指將組織粘合起來的組織粘合劑,醫(yī)用粘合劑可粘合各種組織,例如可進行牙齒粘合,血管、組織、肌肉粘合,腦動脈瘤表面補強、防止破裂粘合,及骨粘合等。常用的粘合劑有Α氰基丙烯酸烷基酯類,甲基丙烯酸甲酯苯乙烯共聚物等。,,手術用縫合線可分為非吸收型和可吸收型兩大類。非吸收類包括天然纖維如蠶絲、、馬毛等和合成纖維。可吸收類包括天然高分子材料如、骨膠原、纖維蛋白等和合成高分子材料如聚乙烯醇、聚乳酸等。其中,由聚乳酸制成的縫合線因性能優(yōu)越而倍受關注。這種縫合線強度可靠,對創(chuàng)口縫合能力強,又可生物降解而被肌體吸收,是一種理想的醫(yī)用縫合線。,7醫(yī)療器件用高分子材料,高分子材料制的醫(yī)療器件有一次性醫(yī)療用品注射器、輸液器、檢查器具、麻醉及手術室用具、血袋、尿袋等。血袋一般由軟PVC或LDPE制成。聚氨酯制的繃帶固化速度快,質輕層薄,不易使皮膚發(fā)炎,可取代傳統(tǒng)的固定材料石膏硅橡膠、聚四氟乙烯及聚乙烯醇等都是性能良好的矯形材料,已廣泛用于假肢制造及整形外科等領域。,總結,生物技術將是21世紀最有前途的技術,生物醫(yī)用高分子材料將在其中扮演重要角色,其性能將不斷提高,應用領域也將進一步拓寬。今后的發(fā)展趨勢將主要體現(xiàn)在以下幾個方面（１）醫(yī)用可生物降解高分子材料因其具有良好的生物降解性和生物相容性而受到高度重視,論是作為緩釋藥物還是作為促進組織生長的骨架材料,都將得到巨大的發(fā)展。,,（２）復制具有人體各部天然組織的物理力學性質和生物學性質的生物醫(yī)用材料,達到高分子的生物功能化和生物智能化,是醫(yī)用高分子材料發(fā)展的重要方向。此外,用生物技術合成高分子的反應條件更溫和、產(chǎn)物的生物降解性能更好,因而具有誘人的前景。,,（３）人工代用器官在材料本體及表面結構的有序化、復合化方面將取得長足進步,以達到與生物體相似的結構和功能,其生物相容性將大大提高。,,THANKYOU,

簡介：CHAPTER10GENEMUTATION,SEVEREACUTERESPIRATORYSYNDROMESARS,,H1N1流感病毒,流感的啟示,問題,1、為什么每一次大流行的流感病毒的類型都不一樣2、為什么如此猖狂和恐怖的流感病毒不能像天花病毒一樣被“消滅”為什么不能通過接種疫苗進行有效的預防,血凝素（HA）,神經(jīng)氨酸酶（NA），,SARS的S蛋白質和M蛋白質的變異點位達到31個，這說明SARS病毒具有極強的變異能力，這意味著研究SARS疫苗可能會同研究流感疫苗一樣困難重重,1、WHATAREMUTATIONS,4、WHATCAUSESMUTATIONS,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONS,5、HOWTODETECTTHEGENEMUTATION,2、FEATURESOFGENEMUTANTION,OUTLINE,CHAPTER10GENEMUTATION,1、WHATAREMUTATIONS,★ANYHERITABLECHANGEINTHEDNA（RNA）SEQUENCEOFANORGANISMISAMUTATION★MUTATIONSCANBEDIVIDEDINTOTHREEMAINTYPES1CHROMOSOMEMUTATIONS（染色體突變）2GENOMEMUTATIONS（基因組突變）3GENEMUTATIONS（基因突變）RELATIVELYSMALLCHANGESINDNASTRUCTURETHATOCCURWITHINAPARTICULARGENE,★GENEMUTATION（基因突變）CHANGESINONEORAFEWNUCLEOTIDES★POINTMUTATION點突變AREMUTATIONSOFASINGLENUCLEOTIDEINCLUDESTHEDELETION,INSERTION,ORSUBSTITUTIONINAGENE（堿基的增加及缺失、堿基替換）,替換,增加及缺失,,ATRANSITION轉換ISACHANGEOFAPYRIMIDINEC,TTOANOTHERPYRIMIDINEORAPURINEA,GTOANOTHERPURINEATRANSVERSION顛換ISACHANGEOFAPYRIMIDINETOAPURINEORVICEVERSA,轉換和顛換的相互關系示意圖,,MUTATIONSMAYALSOINVOLVETHEADDITIONORDELETIONOFSHORTSEQUENCESOFDNA,,5’AACGCTAGATC3’3’TTGCGATCTAG5’,5’AACGCTC3’3’TTGCGAG5’,,DELETIONOFFOURBASEPAIRS,ADDITIONOFFOURBASEPAIRS,MUTATIONSDUETOTRINUCLEOTIDEREPEATS（DYNAMICMUTATION）,MUTATIONSHAPPENREGULARLYMUTATIONRATEFORWARDBACKWARDORREVERSEMUTATIONMULTIPLEORIENTATIONSBENEFICIALDELETERIOUSMUTATIONSIMILARITYBETWEENTHERELATEDSPECIES,2、FEATURESOFGENEMUTANTION,MUTATIONSHAPPENREGULARLY,THEREFORE,THEMUTATIONCANBEPASSEDONTOFUTUREGENERATIONS,,THESIZEOFTHEPATCHWILLDEPENDONTHETIMINGOFTHEMUTATION,THEEARLIERTHEMUTATION,THELARGERTHEPATCH,ANINDIVIDUALWHOHASSOMATICREGIONSTHATAREGENOTYPICALLYDIFFERENTFROMEACHOTHERISCALLEDAGENETICMOSAIC,THEREFORE,THEMUTATIONCANNOTBEPASSEDONTOFUTUREGENERATIONS,MUTATIONRATE,THEFREQUENCYWITHWHICHAPARTICULARMUTATIONAPPEARSINAPOPULATION,FORWARDBACKWARDORREVERSEMUTATION正突變回復突變,A,,A,,FORWARD,REVERSE,通常從一個野生型基因變成突變性的頻率總是高于回復突變率，如何解釋,一突變型回復成野生型，可能機制是什么（預習基因重組）,,A,,A1,,A2,,A3,,,,,,,,,,MULTIPLEORIENTATIONS（多向性）,BENEFICIALDELETERIOUS,,HARMFUL,ALMOSTALLMUTATIONSARENEUTRAL,BENEFICIAL,,SOMETERMS,LETHALMUTATION（致死突變）MUTATIONTHATEVENTUALLYRESULTSINTHEDEATHOFANORGANISMCARRYINGTHEMUTATIONNEUTRALMUTATION（中性突變）AMUTATIONTHATHASNOSELECTIVEADVANTAGEORDISADVANTAGECONDITIONALMUTATION（條件突變）AMUTATIONTHATISONLYEXPRESSEDUNDERCERTAINENVIRONMENTALCONDITIONS,MUTATIONSIMILARITYBETWEENTHERELATEDSPECIES（突變的平行性）,,,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONS,MUTATIONSINTHECODINGSEQUENCEOFASTRUCTURALGENECANHAVEVARIOUSEFFECTSONTHEPOLYPEPTIDE,MUTATIONSINNONCODINGSEQUENCESAFFECTGENEEXPRESSION,,,,,,,INSERT,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONSCODINGSEQUENCE,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONSCODINGSEQUENCE,SILENTMUTATIONSORSILENTMUTATION（同義突變）BASESUBSTITUTIONSTHATDONOTALTERTHEAMINOACIDSEQUENCEOFTHEPOLYPEPTIDEMISSENSEMUTATIONS錯義突變ARETHOSEBASESUBSTITUTIONSINWHICHANAMINOACIDCHANGEDOESOCCURNONSENSEMUTATIONS（無義突變）ARETHOSEBASESUBSTITUTIONSTHATCHANGEANORMALCODONTOATERMINATIONCODONFRAMESHIFTMUTATIONS（移碼突變）INVOLVETHEADDITIONORDELETIONOFNUCLEOTIDESINMULTIPLESOFONEORTWO,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONSCODINGSEQUENCE,,如果你所研究的基因發(fā)生了突變，你將如何從遺傳學角度判斷他是錯義突變、無義突變還是移碼突變,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONSNONCODINGSEQUENCE,為什么操縱子區(qū)（OPRATOR）和啟動子PROMOTER突變總是順式顯性和反式隱形突變而編碼阻抑蛋白基因突變，則是順式還是反式顯性呢,MUTATIONSCANOCCURSPONTANEOUSLYORBEINDUCEDSPONTANEOUSMUTATIONS自發(fā)突變RESULTFROMABNORMALITIESINCELLULAR/BIOLOGICALPROCESSESFOREXAMPLEERRORSINDNAREPLICATIONINDUCEDMUTATIONS（誘發(fā)突變）CAUSEDBYENVIRONMENTALAGENTSAGENTSTHATAREKNOWNTOALTERDNASTRUCTUREARETERMEDMUTAGENSTHESECANBECHEMICALORPHYSICALAGENTS,4、WHATCAUSESMUTATIONS,1、WHATAREMUTATIONS,4、WHATCAUSESMUTATIONS,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONS,2、FEATURESOFGENEMUTANTION,SUMMARY,

簡介：REPLICATIONDAMAGEREPAIR第二章DNA的復制、損傷和修復第一節(jié)DNA的復制REPLICATIONDNABIOSYNTHESIS指DNA雙鏈在細胞分裂以前進行的復制過程。哺乳動物的細胞周期（一）半保留復制DNA在復制時，以親代DNA的每一股作模板，合成完全相同的兩個雙鏈子代DNA，每個子代DNA中都含有一股親代DNA鏈，這種現(xiàn)象稱為DNA的半保留復制SEMICONSERVATIVEREPLICATION。意義半保留復制說明DNA在代謝上的穩(wěn)定性。經(jīng)過許多代的復制，DNA鏈仍可保持完整，這在生物的遺傳上是十分重要的。一、DNA復制特征DNA以半保留方式進行復制，是在1958年由MMESELSON和FSTAHL所完成的實驗所證明。該實驗首先將大腸桿菌在含15N的培養(yǎng)基中培養(yǎng)約十五代，使其DNA中的堿基氮均轉變?yōu)?5N。將大腸桿菌移至只含14N的培養(yǎng)基中同步培養(yǎng)一代、二代、三代。分別提取DNA，作CSCL密度梯度離心半保留復制證據(jù)（以原核生物大腸桿菌為例）原料DNTP，MG雙鏈DNA模板引物（PRIMER），常是RNA，有游離的3’OH。引物酶（PRIMASE，DNAG），用于合成復制所必需的RNA引物解螺旋酶HELICASEDNAB由DNAA和DNAC協(xié)助在復制的起始點（IC）上解開雙螺旋。與復制有關的酶和因子復制的起始點與方向親代DNA開鏈，復制起始點呈叉型移動復制起始點（I）DNA復制要從DNA分子的特定部位開始，此部位稱復制起始點原核一個起始點，約245BP特殊的重復序列真核多個起始點IECOLI復制起始點IC跨度為245BP，包括兩個關鍵序列13BP的序列和9BP序列它是決定和控制ECOLI染色體復制的唯一片段。13BP序列區(qū)，每一個順序都由GATC開始，富含A和T，有助于螺旋解開，控制復制何時開始。9BP重復序列，重復出現(xiàn)4次，能與起始蛋白DNAA特異結合，當DNAA蛋白（約20種）結合于I的4個部位上時復制開始。DNAA蛋白（一種專一的蛋白）和I結合后，雙螺旋解開形成復制叉。故DNAA蛋白與啟動解鏈有關DNAA蛋白是起始的關鍵成分。大腸桿菌復制起點成串排列的重復序列復制方向DNA合成的方向單向、雙向1個起始點復制中的大腸桿菌染色體放射自顯影圖CAIMS實驗將3H胸苷標記大腸桿菌DNA，經(jīng)過近兩代的時間，3H胸苷摻入大腸桿菌DNA。用溶菌酶把細胞壁消化掉，使完整的大腸桿菌染色體DNA釋放出來，放射自顯影，得到上圖。非復制部分（C）銀粒子密度較低，由一股放射性鏈和一股非放射性鏈構成。已復制部分站整個染色體的三分之二，其中一條雙鏈（B）僅有一股鏈是標記的，另外一股雙鏈（A）的兩股鏈都是標記的，銀粒子密度為前二者的兩倍。染色體全長約為1100微米。雙向復制復制子真核生物兩個相鄰復制起始點之間的DNA片段以起始點為中心，向兩個方向進行復制多個起始點二、DNA復制的酶學1模板解開成單鏈的DNA母鏈3DNA聚合酶，DNAPOL2底物DNTPDATP，DGTP，DCTP，DTTP4引物（PRIMER）RNA引物5其他酶和蛋白質因子一、復制的化學反應生成磷酸二酯鍵DN2TPPPIDNAPOL3’TAGAAGACCTATTGGCC5’5’ATCTTCTGGATAACCGG3’二、解鏈相關酶類1解旋酶HELICASE2拓撲異構酶（TOPOISOMERASEI、II）3單鏈DNA結合蛋白SSBDNA解旋酶HELICASE（解鏈酶）功能DNA的雙螺旋解鏈（解DNA雙鏈），解開一對堿基，需2分子ATP，作用點DNA上局部單鏈處，向雙鏈方向解鏈。種類ECOLI有四種解螺旋酶，I、II、III和REP蛋白。I、II、III中任一種沿模板53方向移動，REP蛋白沿模板35方向移動。2拓撲異構酶（TOPO）DNA正超螺旋與負超螺旋負超螺旋正超螺旋DNA雙螺旋拓撲異構酶首先在大腸桿菌中被發(fā)現(xiàn)，它可使DNA的一條鏈發(fā)生斷裂和再連接，反應無需供給能量。另外，DNA復制時負超螺旋的消除，亦由拓撲異構酶Ⅰ來完成，但它對正超螺旋無作用。Ⅰ型拓撲異構酶由兩個A亞基和兩個B亞基組成，即A2B2。它能使DNA的兩條鏈同時發(fā)生斷裂和再連接，當它引入負超螺旋以消除復制叉前進帶來的扭曲張力時，需要由ATP提供能量。兩種拓撲異構酶在DNA復制、轉錄和重組中均發(fā)揮重要作用。Ⅱ型拓撲異構酶拓撲異構酶I抑制劑喜樹堿類拓撲異構酶II抑制劑依托泊苷，多柔比星，阿霉素類等3單鏈DNA結合蛋白（SSB）作用防止單鏈DNA重新形成雙鏈，防止單鏈DNA被核酸酶水解SSB三、DNA聚合酶（DNAPOL）即依賴于DNA的DNA聚合酶（DDDP）真核生物有多種DNAPOL、、、、原核生物有3種DNAPOLⅠ、Ⅱ、ⅢDNA聚合酶功能53聚合作用53外切酶35外切酶活性大腸桿菌三種DNA聚合酶比較DNA聚合酶Ⅱ分子量每個細胞的分子統(tǒng)計數(shù)53聚合酶作用35核酸外切酶作用53核酸外切酶作用轉化率主要功能活性（NTMIN）DNA聚合酶ⅠDNA聚合酶Ⅲ（復合物）109，0004001校讀修復1000120，00040005400，000102050復制100000特性不清填補缺口50四、引物酶PRIMASE和引發(fā)體催化RNA引物合成的酶叫引物酶，它是一種特殊的RNA聚合酶DNA合成需在RNA引物的基礎上進行DNAA引發(fā)體（PRIMOSOME）包括解螺旋酶、DNAC、引物酶及DNA復制的起始區(qū)域小結主要成員主要作用DNAA識別復制起始位點解螺旋酶解開DNA雙鏈SSB維持已解開單鏈DNA的穩(wěn)定引物酶合成RNA引物TOPO使打結、纏繞、正超螺旋的DNA松馳DNAPOLⅢDNA復制DNAPOLⅠ水解引物、填補空隙、修復作用DNA連接酶催化雙鏈DNA中單鏈缺口的連接第三節(jié)DNA生物合成過程1復制的起始2鏈的延長3復制的終止一復制的起始一DNA解成單鏈由特定蛋白質識別復制起始位點（I），在解螺旋酶、TOPO酶及單鏈DNA結合蛋白的共同作用下，DNA解鏈，解旋，形成復制叉倒Y二引發(fā)體的生成解旋酶解開雙鏈后引物酶進入形成引發(fā)體（三）RNA引物的合成參與復制起始的蛋白因子名稱功能DNAA蛋白辨認起始點解螺旋酶（DNAB，REP）解開DNA雙鏈DNAC協(xié)助解螺旋酶引物酶（DNAG）催化RNA引物生成SSB穩(wěn)定解開的單鏈拓撲異構酶理順DNA鏈ICECOLI復制起始點領頭鏈的合成復制過程簡圖隨從鏈上不連續(xù)性片段的連接二、真核生物DNA生物合成（一）DNA的復制只發(fā)生在S期（二）多復制子（三）真核細胞含有5種DNA聚合酶（四）端粒復制染色體兩端DNA子鏈上最后復制的RNA引物，去除后留下空隙。5335533553333551端粒TELEMER指真核生物染色體線性DNA分子末端的結構。2結構特點（1）由末端單鏈DNA序列和蛋白質構成。（2）末端DNA序列是多次重復的富含G、C堿基的短序列。3功能（1）維持染色體的穩(wěn)定性（2）維持DNA復制的完整性4端粒酶由RNA和蛋白質組成（1）RNA發(fā)揮模板作用（2）蛋白質發(fā)揮逆轉錄酶活性端粒酶的催化延長作用爬行模型DNA聚合酶復制子鏈進一步加工引物合成后，由DNAPOLⅢ（在真核細胞為DNA聚合酶和催化，按堿基配對原則，將DNTP逐一添加到引物3’末端，形成磷酸二酯鍵，使新合成的鏈不斷延長二復制的延長3’AAGACCTATT5’5’TTCTGGATAA3’DNAPOLIIIIII延長岡崎片斷（三）終止階段原核生物基因是環(huán)狀DNA，雙向復制的復制片段在復制的終止點TER處匯合。半不連續(xù)復制SEMIDISCONTINUOUSREPLICATION領頭鏈連續(xù)復制而隨從鏈不連續(xù)復制，就是復制的半不連續(xù)性。領頭鏈LEADINGSTR隨從鏈LAGGINGSTR基因組能獨立進行復制的功能單位稱為復制子REPLICON，每個復制子都含有控制復制起始的起點IGIN，可能還有終止復制的終點TERMINUS。每個起始點產(chǎn)生兩個移動方向相反的復制叉，復制完成時，復制叉相遇并匯合連接。習慣上把兩個相鄰起始點之間的距離定為一個復制子。（2）復制子DNA復制時，以復制起始點為中心，向兩個方向進行復制但在低等生物中也可進行單向復制（如滾環(huán)復制）①原核細胞染色體和質粒固定起點雙向復制，②真核生物染色體DNA，復制時多個起始點。（3）復制方向三、需要引物DNA聚合酶不能直接聚合游離的DNTP，必須由一段核酸片段提供3’OH末端作為引物PRIMER，才能開始聚合子代DNA鏈。RNA引物的大小，在原核生物中通常為50～100個核苷酸，而在真核生物中約為10個核苷酸。RNA引物的堿基順序，與其模板DNA的堿基順序相配對。四、雙向復制DNA復制時，以復制起始點為中心，向兩個方向進行復制。但在低等生物中，也可進行單向復制（如滾環(huán)復制）。五、半不連續(xù)復制（SEISCONTINUOUSREPLICATION）由于DNA聚合酶只能以5’→3’方向聚合子代DNA鏈，即模板DNA鏈的方向必須為3’→5’。因此，分別以兩條親代DNA鏈作為模板聚合子代DNA鏈時的方式是不同的。定義在DNA復制過程中，親代DNA分子中以3’→5’方向的母鏈作為模板指導新的鏈以5’→3’方向連續(xù)合成另一股以5’→3’為方向的母鏈則指導新合成的鏈以5’→3’方向合成10002000個核苷酸長度的許多不連續(xù)的片段（崗崎片段）。這種復制方式稱之為半不連續(xù)復制。PPPOHDNA合成方向不可能是3′→5′的解釋5’5’3’3’5’5’3’3’5’5’3’3’前導鏈隨從鏈崗崎片段半不連續(xù)復制以3→5方向的親代DNA鏈作模板的子代鏈在復制時基本上是連續(xù)進行的，其子代鏈的聚合方向為5→3，這一條鏈被稱為領頭鏈LEADINGSTR。而以5→3方向的親代DNA鏈為模板的子代鏈在復制時則是不連續(xù)的，其鏈的聚合方向也是5→3，這條鏈被稱為隨從鏈LAGGINGSTR。前導鏈在引物的3’端按5’→3’方向連續(xù)不斷地合成的DNA鏈。隨從鏈在引物的3’端按5’→3’方向不連續(xù)合成的DNA鏈。岡崎片段隨從鏈上不連續(xù)合成的DNA短片段（不包括引物）由于親代DNA雙鏈在復制時是逐步解開的，因此，隨從鏈的合成是一段一段的。DNA在復制時，由隨從鏈所形成的一些子代DNA短鏈稱為岡崎片段OKAZAKIFRAGMENT。岡崎片段的大小，在原核生物中約為1000～2000個核苷酸，而在真核生物中約為100個核苷酸。五、DNA聚合酶（DNAPOLYMERASE）聚合酶III主要的復制酶，兼有校讀、糾錯的功能有從5’3’延伸多核苷酸鏈的聚合酶活性，有模板依賴性，其延伸的方式是依據(jù)堿基互補配對的原則，將原料DNTP與末端核苷酸游離的3’OH以3’5’磷酸二酯鍵連接，同時釋出一個PPI。DNA聚合酶延伸多核苷酸鏈的方向總是5’3’有從3’5’外切酶的活性，以切除可能錯配的核苷酸聚合酶I用于切除引物RNA并填補留下的空隙有從5’3’延伸多核苷酸鏈的聚合酶的活性；有從3’5’外切酶的活性，以切除可能錯配的核苷酸；有從5’3’外切酶的活性，其作用是切除引物聚合酶II活性弱作用與聚合酶III相似有從5’3’延伸多核苷酸鏈的聚合酶活性；有從3’5’外切酶的活性323個氨基酸小片段5核酸外切酶活性大片段KLENOW片段604個氨基酸DNA聚合酶活性5核酸外切酶活性N端C端DNAPOLⅠKLENOW片段是實驗室合成DNA，進行分子生物學研究中常用的工具酶。六、DNA連接酶（LIGASE）將不連續(xù)的DNA片段以3’，5’磷酸二酯鍵連接起來，原核生物通過分解NAD為NMN和PI提供能量，真核生物則消耗ATP復制的終止由DNA聚合酶I完成切除引物，并且填補空隙，由DNA連接酶將DNA片段連接起來。一個復制子只含有一個專一的復制起點和復制結束的終點。一個完整的復制子在一個細胞周期只復制一次真核。原核生物染色體和質粒都是獨立（只有單一個）復制子；真核細胞染色體中有多個復制子組成。（七）真核生物端粒的形成端粒TELOMERE是指真核生物染色體線性DNA分子末端的結構部分，通常膨大成粒狀。其共同的結構特征是由一些富含G、C的短重復序列構成可重復數(shù)十次至數(shù)百次。線性DNA在復制完成后，其末端由于引物RNA的水解而可能出現(xiàn)縮短。故需要在端粒酶（TELOMERASE）的催化下，進行延長反應。端粒酶是一種RNA蛋白質復合體，它可以其RNA為模板，通過逆轉錄過程對末端DNA鏈進行延長。端粒（TELOMERE）染色體線性DNA分子末端通常膨大成粒狀共同的結構特征富含TG短重復序列維持染色體穩(wěn)定端粒酶（TELOMERASE）RNA蛋白質復合體逆轉錄酶延長末端DNA鏈進行在真核生物，由端粒酶（TELOMERASE）催化在真核線性DNA的末端形成一種特殊的結構并與蛋白質結合成端粒（TELOMERE）。端粒由成百個6個核苷酸的重復序列所組成（人為TTAGGG，四膜蟲為TTGGGG）。端粒的功能為穩(wěn)定染色體的末端結構，防止染色體間末端連接，并可補償滯后鏈5′末端在消除RNA引物后造成的空缺。復制可使端粒5′末端縮短，而端粒酶（TELOMERASE）可外加重復單位到5′末端上，結果使端粒維持一定的長度。4、DNA的幾種復制方式（1）、直線雙向復制單點雙向，T7多點雙向，真核染色體DNA（2）、Θ型復制環(huán)狀雙鏈DNA，對稱復制，單向或雙向（ECOLI）（3）、滾環(huán)復制環(huán)狀單鏈DNA，ΦX174（4）、D環(huán)復制（取代環(huán)復制）不對稱復制，線粒體、葉綠體DNA。兩條鏈的復制起點不在同一點上，一條鏈先復制，另一條鏈保持單鏈而被取代當一條鏈復制到一定程度時才暴露出另一條鏈的復制起點，另一條鏈才開始復制。三、滾環(huán)復制和D環(huán)復制滾環(huán)復制ROLLINGCIRCLEREPLICATION是某些低等生物的復制形式，如X174和M13噬菌體等。滾環(huán)復制的過程D環(huán)復制DLOOPREPLICATION是線粒體DNAMITOCHONDRIALDNA，MTDNA的復制形式。線粒體MITOCHODRIADNAMTDNA哺乳動物線粒體MTDNA是一個長度為165KB的緊密雙鏈閉合環(huán)狀分子，外環(huán)為重鏈（H鏈），內環(huán)為輕鏈（L鏈），以D環(huán)復制方式進行。第二節(jié)DNA的損傷一、DNA的損傷（突變）由自發(fā)的或環(huán)境的因素引起DNA一級結構的任何異常的改變稱為DNA的損傷，也稱為突變（MUTATION）。常見的DNA的損傷包括堿基脫落、堿基修飾、交聯(lián)，鏈的斷裂，重組等。（一）引起突變的因素1自發(fā)因素1自發(fā)脫堿基由于N糖苷鍵的自發(fā)斷裂，引起嘌呤或嘧啶堿基的脫落。每日可達近萬個核苷酸殘基。2自發(fā)脫氨基胞嘧啶自發(fā)脫氨基可生成尿嘧啶，腺嘌呤自發(fā)脫氨基可生成次黃嘌呤。每日可達幾十到幾百個核苷酸殘基。3復制錯配由于復制時堿基配對錯誤引起的損傷，發(fā)生頻率較低。2物理因素由紫外線、電離輻射、X射線等引起的DNA損傷。其中，X射線和電離輻射常常引起DNA鏈的斷裂，而紫外線常常引起嘧啶二聚體的形成，如TT，TC，CC等二聚體。這些嘧啶二聚體由于形成了共價鍵連接的環(huán)丁烷結構，因而會引起復制障礙。3化學因素1脫氨劑如亞硝酸與亞硝酸鹽，可加速C脫氨基生成U，A脫氨基生成I。2烷基化劑這是一類帶有活性烷基的化合物，可提供甲基或其他烷基，引起堿基或磷酸基的烷基化，甚至可引起鄰近堿基的交聯(lián)。3DNA加合劑如苯并芘，在體內代謝后生成四羥苯并芘，與嘌呤共價結合引起損傷。4堿基類似物如5FU等，可摻入到DNA分子中引起損傷或突變。5斷鏈劑如過氧化物，含巰基化合物等，可引起DNA鏈的斷裂。（二）DNA突變的類型堿基的轉換第三節(jié)DNA損傷的修復DNA損傷的修復方式可分為直接修復和取代修復兩大類?！蠬VUV→TT→光復活酶→修復TT（一）直接修復1光復活（LIGHTREPAIRING）這是一種廣泛存在的修復作用。光復活能夠修復任何嘧啶二聚體的損傷。其修復過程為光復活酶（PHOTOLYASE識別嘧啶二聚體并與之結合形成復合物→在300～600NM可見光照射下，酶獲得能量，將嘧啶二聚體的丁酰環(huán)打開，使之完全修復→光復活酶從DNA上解離。2轉甲基作用在轉甲基酶的催化下，將DNA上的被修飾的甲基去除。此時，轉甲基酶自身被甲基化而失活。3直接連接DNA斷裂形成的缺口，可以在DNA連接酶的催化下，直接進行連接而封閉缺口。（二）取代修復1切除修復EXCISIONREPAIRING這也是一種廣泛存在的修復機制，可適用于多種DNA損傷的修復。該修復機制可以分別由兩種不同的酶來發(fā)動，一種是核酸內切酶，另一種是DNA糖苷酶?！锌尚迯蚑T，電離輻射，某些化學誘變劑造成的DNA結構的破壞參加的酶有特異的核酸內切酶；外切酶；聚合酶；連接酶。2重組修復RECOMBINATIONREPAIRING這是DNA的復制過程中所采用的一種有差錯的修復方式。重組修復，復制后修復3SOS修復由DNA損傷或抑制復制的處理所引起的一系列復雜的誘導效應，稱為應急反應（SOS）。這是一種在DNA分子受到較大范圍損傷并且使復制受到抑制時出現(xiàn)的修復機制，以SOS借喻細胞處于危急狀態(tài)。DNA分子受到長片段高密度損傷，使DNA復制過程在損傷部位受到抑制。損傷誘導一種特異性較低的新的DNA聚合酶，以及重組酶等的產(chǎn)生。由這些特異性較低的酶繼續(xù)催化損傷部位DNA的復制，復制完成后，保留許多錯誤的堿基，從而造成突變。DNA損傷與藥物評價1遺傳毒性試驗遺傳毒性研究在藥物研發(fā)中處于比較的重要位置。遺傳毒性試驗能檢出DNA損傷及其損傷的固定。以基因突變、較大范圍染色體損傷、重組和染色體數(shù)目改變形式出現(xiàn)的DNA損傷的固定，一般被認為是可遺傳效應的基礎，并且是惡性腫瘤發(fā)展過程的環(huán)節(jié)之一。在檢測這些類別損傷的試驗中呈陽性的化合物為潛在人類致癌劑和或致突變劑。由于在人體中已建立了某些化合物的暴露和致癌性之間的關系，而對于遺傳性疾病尚難以證明有類似的關系，故遺傳毒性試驗主要用于致癌性預測。實驗方法AMES試驗（污染物致突變性檢測）是檢測化學物質基因突變的常用方法。沙門氏菌回復突變試驗鼠傷寒沙門氏菌（SALMONELLATYPHIMURIUM）的組氨酸營養(yǎng)缺陷型（HIS－）菌株，在含微量組氨酸的培養(yǎng)基中，除極少數(shù)自發(fā)回復突變的細胞外，一般只能分裂幾次，形成在顯微鏡下才能見到的微菌落。受誘變劑作用后，大量細胞發(fā)生回復突變，自行合成組氨酸，發(fā)育成肉眼可見的菌落。在評價突變危害中常用的有特殊重要意義的試驗TK基因突變試驗TK基因突變試驗是一種哺乳動物體細胞基因正向突變試驗近年來其應用價值有明顯的提高。TK基因突變試驗的檢測終點是胸苷激酶（THYINEKINASE，TK）基因的突變。在人類，TK基因定位于17號染色體長臂遠端；在小鼠則定位于11號染色體。故TK基因的突變屬于常染色體基因突變。TK基因的產(chǎn)物胸苷激酶在體內催化從脫氧胸苷（TDR）生成胸苷酸（TMP）的反應。在正常情況下，此反應并非生命所必需，原因是體內的TMP主要來自于脫氧尿嘧啶核苷酸（DUMP），即由胸苷酸合成酶催化的DUMP甲基化反應生成TMP。但如在細胞培養(yǎng)物中加入胸苷類似物（如三氟胸苷，即TFTTRIFLUOTHYINE），則TFT在胸苷激酶的催化下可生成三氟胸苷酸，進而摻入DNA，造成致死性突變，故細胞不能存活。若TK基因發(fā)生突變，導致胸苷激酶缺陷，則TFT不能磷酸化，亦不能摻入DNA，故細胞在含有TFT的培養(yǎng)基中能夠生長，即表現(xiàn)出對TFT的抗性。根據(jù)突變集落形成數(shù)，計算突變頻率，以判定受試物的致突變性。試驗采用的靶細胞系主要有小鼠淋巴瘤細胞L5178Y以及人類淋巴母細胞TK6和WTK1等。其基因型均為TK。TK基因突變試驗可檢出包括點突變、大的缺失、重組、染色體異倍性和其他較大范圍基因組改變在內的多種遺傳改變。轉基因小鼠基因突變試驗轉基因小鼠基因突變試驗可在整體狀態(tài)下檢測基因突變比較不同組織包括生殖腺的突變率確定靶器官對誘發(fā)的遺傳改變作精確分析等。國外已陸續(xù)發(fā)展了多種用于突變檢測的轉基因動物其中3種已投入商品化生產(chǎn)MUTATM小鼠、BIGBLUETM小鼠和XENOMOUSE小鼠它們分別采用大腸桿菌乳糖操縱子的LACZ和或LACL作為誘變的靶基因。反向限制性酶切位點突變分析法INVERSERESTRICTIONSITEMUTATIONIRSMIRSM適用于快速檢測誘變劑所致體內外DNA的突變，這些突變的特點是使某一酶切位點變?yōu)榱硪幻盖形稽c。該方法建立者JENKINS等首先將IRSM應用于化學誘變劑所致動物體內P53基因的突變檢測小鼠分別口服N乙基N亞硝基脲ENU、2乙酰氨基芴2AAF和二甲基酰肼DMH3天后以IRSM方法相應地檢測小鼠脾、骨髓和肝組織P53基因第6內含子區(qū)域的APA→AVA位點反向突變。結果表明ENU誘發(fā)肝組織P53基因突變的發(fā)生率為33AF使肝組織突變的發(fā)生率為25這一陽性突變率反映出了不同誘變劑對相應組織的致突變強度進一步驗證了該方法的高靈敏度和準確性。它具有靈敏度高、快速、操作簡便、以及突變檢測部位明確等優(yōu)點是一種較具實用價值和生命力的突變檢測手段。但是IRSM的不足之處是僅能檢測誘發(fā)限制性酶切位點反向的DNA突變。根據(jù)文獻資料分析化合物致突的發(fā)生具有一定的規(guī)律性即結構類似的一組化合物常常引起一些特定序列較固定的堿基改變。例如烷化劑和芳香胺類雖易使一連串鳥嘌呤G3′端G發(fā)生突變1213這可能與該部位電荷密集有關多數(shù)活性氧生成物質的DNA致突作用也具有類似規(guī)律14CPG二核苷常常是DNA加成物致突變作用部位15所以CPG突變的檢測在化合物致突檢測中具有重要意義而CPG突變常引發(fā)某些固定酶切位點的變化。很顯然IRSM可較廣泛地應用于遺傳毒性化合物致突作用的檢測。檢測染色體和染色體組畸變微核試驗微核試驗是檢測染色體或有絲分裂器損傷的一種遺傳毒性試驗方法。是檢測化學物質染色體損傷的基本方法。方法最常用的是嚙齒類動物骨髓嗜多染紅細胞PCE微核試驗。以受試物處理嚙齒類動物，然后處死，取骨髓，制片、固定、染色，于顯微鏡下計數(shù)PCE中的微核。染色體畸變試驗染色體畸變試驗是檢測化學物質影響染色體數(shù)量和結構的基本方法。熒光原位雜交FISH技術熒光原位雜交最早由BAUMAN1980建立后由LUCAS1989首先應用于染色體畸變分析。其原理是按檢測目標準備恰當?shù)腄NA序列作為探針并用生物素標記對載玻片上待測標本中的DNA雜交最后通過雜交位點的熒光觀察染色體結構或數(shù)目的改變。應用特殊染色體和染色體某區(qū)域的熒光探針可在體內檢測4種類型的細胞遺傳學終點。1檢測中期細胞染色體畸變。2應用亞染色體區(qū)域的探針檢測間期染色體斷裂和非整倍體。3應用中心粒探針和或抗著絲點抗體檢測微核的形成。SCHRIEVERSCHWEMMET等利用CREST間接免疫熒光法以及小鼠次要和主要衛(wèi)星DNA探針在小鼠骨髓細胞證明了受試物引起微核的來源。4哺乳動物精子非整倍體檢測。徐德祥1999用雙色FISH方法對丙烯腈接觸男工精子性染色體數(shù)目畸變進行了檢測證明FISH技術用于檢測精子染色體數(shù)目畸變實驗結果穩(wěn)定可靠。檢測DNA原始損傷單細胞凝膠電泳技術單細胞凝膠電泳分析SINGLECELLGELELETROPHESISSCGE是OSTLING等1984首創(chuàng)的以后經(jīng)SINGH等1988進一步完善而逐漸發(fā)展起來的一種快速檢測單細胞DNA損傷的實驗方法因其細胞電泳形狀頗似慧星又稱慧星試驗COMETASSAY。SCGE是評價遺傳毒性損害非常敏感的實驗可以檢測到每16571037KG中01個DNA的斷裂。與經(jīng)典的染色體畸變、微核、SCE相比SCGE可以用于活細胞DNA的檢測也能用于死亡細胞DNA的分析使SCGE不僅可以研究低劑量下的生物效應也可用于研究高劑量下的生物效應同時SCGE又可提供DNA修復能力的信息這使得SCGE非常適用于評價受試物的遺傳毒性。

簡介：激光掃描共聚焦顯微鏡LSCM技術簡介HEXIAOHUISUMENG90513103LIWEI90513104INTRODUCTIONLSCM是一種高科技顯微鏡熒光顯微鏡成像為基礎，加裝了激光掃描裝置計算機進行圖像處理使用紫外或可見光激發(fā)熒光探針得到細胞或組織內部微細結構的熒光圖像。無損傷的“光學切片”細胞三維立體機構實時動態(tài)分析監(jiān)測光學顯微鏡部分激光發(fā)射器掃描裝置光檢測器計算機系統(tǒng)包括數(shù)據(jù)采集處理轉換應用軟件圖像輸出設備LSCM的基本組成LSCM的原理LSCM對生物樣品的觀察的優(yōu)越性連續(xù)掃描三維離子熒光標記同時多重物質標記LSCM的發(fā)展濾片式LSCM棱鏡狹縫分光式LSCMLSCM在醫(yī)學及生物學研究中的應用LSCM常用于生物細胞或組織內的分子原位鑒定和定量細胞及亞細胞結構形態(tài)學觀察以及活體細胞或組織功能的動態(tài)監(jiān)測在生命科學領域的分子水平細胞及組織水平的研究中得到廣泛應用一原位鑒定細胞或組織內生物大分子觀察細胞及亞細胞形態(tài)結構在細胞原位用特異探針標記出核酸蛋白質多肽酶激素磷脂多糖受體等分子并用激光掃描共聚焦顯微鏡成像從而實現(xiàn)上述大分子的定位定性及定量檢測一在細胞原位檢測核酸二原位檢測蛋白質抗體及其他分子三檢測細胞凋亡四細胞器觀察及測定五檢測細胞融合六觀察細胞骨架七檢測細胞間縫隙連接通訊八檢測細胞內脂肪一在細胞原位檢測核酸檢測核酸的熒光探針1碘化丙啶PI不能進入完整的細胞膜2HOECHST33342HOECHST33258和DAPI3AO吖啶橙二原位檢測蛋白質抗體及其他分子常用的熒光探針1熒光染料FITC藍光激發(fā)發(fā)出明亮綠色熒光2羅丹明比FITC光穩(wěn)定性好在生理條件下對PH變化不敏感熒光強度受細胞自發(fā)熒光的干擾較小3綠色熒光蛋白（GREENFLUESCENTPROTEINGFP）可對活細胞中的蛋白質進行準確定位及動態(tài)觀察三檢測細胞凋亡通常用的方法1細胞核形態(tài)觀察2脫氧核苷酸未端轉移酶介導的缺口末端標記法TUNEL3ANNEXINV試劑盒是檢測凋亡細胞膜損傷的新方法四細胞器觀察及測定不同實驗目的標記細胞器的方法也不同1線粒體MITOCHONDRIARODAMIN123MITOTRACKERGREENFMMITOTRACKERANGECMTMROSMITOTRACKERANGE2溶酶體LYSOSOME中性紅AOLYSOTRACKERGREENDND26BLUERED3內質網(wǎng)ENDOPLASMICRETICULUMDIOC64高爾基體GOLGIAPPARATUSNBDC6CERAMIE五檢測細胞融合根據(jù)不同細胞的特性將每一種細胞特有的物質用不同的熒光控針標記融合操作后確認不同的熒光信號是否發(fā)生共定位于同一細胞如在同一細胞中同時檢測到上述不同的熒光信號則說明已經(jīng)發(fā)生了細胞融合六觀察細胞骨架骨架微絲微管和中等纖維直標一抗熒光探針如肌動蛋白ACTIN間標二抗熒光探針如微管蛋白TUBLIN肌動蛋白ACTIN標記肌動蛋白是微絲的基本成分毒傘素鬼筆環(huán)肽與多聚體肌動蛋白微絲專一性結合起來且親和作用強烈微管蛋白TUBULIN標記七檢測細胞間縫隙連接通訊染料熒光黃LY黃色帶電荷的小分子強熒光物質不通過細胞膜但可以很容易通過GJIC從標記的細胞劃痕法傳輸?shù)洁徑毎^察LY向鄰近細胞的傳輸速率用以表示GJIC連接通訊功能漂白細胞箭頭標記熒光漂白前A及漂白后0B、2C和4DMIN時的熒光恢復情況經(jīng)瞬間漂白后細胞內熒光強度明顯變弱隨著時問的推移熒光逐漸恢復，至4MIN時D可見熒光強度明顯恢復FRAP法測定膀胱平滑肌細胞GJIC功能八檢測細胞內脂肪尼羅紅NILERED是一個理想的脂肪染色劑它只在疏水環(huán)境中顯示很強的熒光除了在所需顯示的脂質中被溶解外尼羅紅與組織不發(fā)生任何反應二活體細胞或組織功能的實時動態(tài)監(jiān)測利用相應的特異熒光控針標記后觀察單個細胞不同部位或不同組織區(qū)域接受刺激后的整個變化過程一實時定量測定細胞內CA2的變化二測定細胞內PH變化三檢測膜電位的變化四檢測細胞內活性氧物種的產(chǎn)生五檢測藥物等跨膜進入組織或細胞過程及其定位六檢測熒光共振能量轉移FRET七檢測熒光漂白恢復FRAPFLUO3較為常用基本原理A其乙酰羥甲基酯AM形式是FLUO3AM無熒光為不帶電荷的親脂性化合物易于滲透脂膜進入活細胞內B在胞內被非特異酯酶水解釋放出游離酸形式的熒光探針分子此游離態(tài)也無熒光不易漏出胞外C一旦與CA2結合后便形成復合物并有較強的熒光產(chǎn)生從而發(fā)揮其鈣探針的作用KCL誘導的細胞外CA內流測量培養(yǎng)分離的細胞20MFLUO3AM負載液3060MIN清洗、換液掃描二測定細胞內PH變化常用的熒光探針有BCECF和6COFDABCECF的激發(fā)光譜是PH依賴性的比例法即分別用490NM和440NM光激發(fā)BCECF所得到的發(fā)射熒光之比比例熒光與PH有很好的線性關系最大分辯率為04PH單位三檢測膜電位的變化快響應探針膜電位直接影響探針分子的電分布而改變其光譜響應快慢響應探針主要通過改變其在膜內外的分布來對膜電位的變化作出反應跨膜運動需要一定的時間所以反應慢依探針對電位變化響應速度將電位敏感探針分為快響應探針和慢響應探針四檢測細胞內活性氧物種的產(chǎn)生基本原理ADCFHDA進入細胞后B經(jīng)酯酶作用脫去二酯生成不發(fā)熒光的DCFHC被超氧陰離子過氧化氫等活性氧化生成發(fā)熒光的DCFD活性氧自由基的含量與熒光探針之熒光強度成正相關DCFHDA常用于直接測定細胞內活性氧自由基的動態(tài)變化五檢測藥物等跨膜進入組織細胞過程及定位為檢測藥物分子病毒細菌等外界物質能否跨膜進入細胞組織需利用這些物質特異性自發(fā)熒光對其進行熒光標記六檢測熒光共振能量轉移FRET由于熒光蛋白的獨特優(yōu)點其特定的熒光對理論上可用于活細胞中實時研究大分子間的相互作用熒光能量共振轉移FLUESCENCERESONANCEENERGYTRANSFERI熒光能量共振轉移受激態(tài)熒光素將其能量向另一個熒光素傳遞，使后者被激發(fā)，這一過程稱熒光能量共振轉移。能量的提供者叫供體熒光素，能量的接受者叫受體熒光素。供體熒光素受體熒光素1供體與受體間的距離10NM或17NM2供體的發(fā)射光譜與受體的吸收光譜有實質性的重疊II熒光能量共振轉移的條件488NM520NM650NM供體熒光素CY2受體熒光素CY3供體熒光素CY2受體熒光素CY3七檢測熒光漂白恢復FRAPFRAP是將待測細胞用熒光物質標記借助高強度脈沖式激光照射細胞的某一區(qū)域從而造成該區(qū)域熒光分子的光淬滅通過低強度激光掃描成像可以探測到該區(qū)域周圍的非淬滅熒光分子向受照射區(qū)域擴散的速率從理論上講凡是能夠標記待測分子并且能夠發(fā)生熒光淬滅的熒光物質都可以使用1熒光漂白恢復FLUESCENCERECOVERAFTERPHOTOBLEACHINGFRAP檢測細胞連接間的信息傳遞激光掃描共焦顯微鏡的發(fā)展趨勢多光子激光掃描顯微鏡MULTIPHOTONLASERSCANNINGMICROSCOPY在生物及醫(yī)學成像單分子探測三維信息存儲微加工等領域得到廣泛應用展示了廣闊的發(fā)展前景多光子激光掃描顯微鏡簡介多光子激光器波長從7001000NM連續(xù)可調雙光子波長350500NM連續(xù)三光子波長230330NM連續(xù)應用可直接清晰活體觀察某些非標記神經(jīng)遞質的分泌5HT或NADPH的分布雙光子激光掃描熒光顯微系統(tǒng)照射光波長大于熒光染料吸收峰波長2倍高能量2KW、超短脈沖兆分之一秒聚焦使聚焦點瞬間產(chǎn)生高密度光子出現(xiàn)雙光子吸收激發(fā)熒光雙光子吸收僅發(fā)生在聚焦點避免了焦點外激發(fā)而產(chǎn)生的漂白現(xiàn)象高能量、超短脈沖聚焦、穿透性更強50M500M488NM520NMFITC976NM多光子激光掃描顯微鏡優(yōu)點與局限優(yōu)點1對生物樣品的光損傷小2有效觀測時間長3穿透深度深4熒光收集率高5對探測光路的要求低6適合多標記復合測量局限1只能對熒光成像2樣品可能受到熱損傷若樣品含吸收激發(fā)光的色團如黑色素3超快激光器較為昂貴例4長時間觀察活體阿爾茨海默病模型小鼠－淀粉蛋白形成的狀況THANKSFYOURATTENTIONSANYQUESTIONS

簡介：生物系宋彩霞DRUGDISCOVERYBEYONDTHE‘RULEOFFIVE’優(yōu)于“RULEOFFIVE”的藥物發(fā)現(xiàn)摘要“RULEOFFIVE”規(guī)則是小分子藥物設計的有效指導原則，但是在某種程度上被過分強調。“RULEOFFIVE”規(guī)則是針對口服藥物總結出的經(jīng)驗性規(guī)律，所以存在著一些局限性。本文在此討論了優(yōu)于“RULEOFFIVE”規(guī)則的藥物發(fā)現(xiàn)的方法如積極主動地發(fā)展與口服藥品平行的腸外藥物，發(fā)展與小分子藥物相平行的治療性抗體等生物制品。此外，更應努力研究開發(fā)天然藥物。新技術如合成生物就可以解決在基于天然藥物的藥物發(fā)現(xiàn)中存在的包括合成可行性和配基效力等方面的許多問題。INTRODUCTION（引言）ALBIOAVAILABILITYDRUGDISCOVERYPRODUCTIVITY（口服生物利用度和藥物發(fā)現(xiàn)效率）NATURALPRODUCTSDRUGDISCOVERYPRODUCTIVITY（天然產(chǎn)物和藥物發(fā)現(xiàn)效率）SYNTHETICBIOLOGYFNATURALPRODUCTDRUGDISCOVERY（用于天然藥物發(fā)現(xiàn)的合成生物學）CONCLUSIONS（結論）CONTENTINTRODUCTION（引言）“RULEOFFIVE”規(guī)則，也稱為LIPINSKI定性規(guī)則，主要用于檢驗藥物的口服生物利用度。內容一個藥物分子中①氫鍵供體數(shù)大于5，②分子量（MWT）大于500，③油水分配系數(shù)（LOGP）大于5，④氮和氧原子總數(shù)（即氫鍵受體數(shù)）大于10時，它的口服生物利用度更小?！癛ULEOFFIVE”規(guī)則優(yōu)點使藥物設計更加合理，提高了發(fā)現(xiàn)藥物過程中對藥物的ADME（吸收，分布，代謝和消除）和其物理化學性能的重視，并且有助于在藥物篩選前期就對其ADME和后ADME毒性進行檢測。缺點過分地強調“RULEOFFIVE”規(guī)則的局限是兩方面的一是它不僅過分強調藥物的口服生物利用度，二是它將許多藥物尤其是一些天然藥物排除在外。口服生物利用度和藥物發(fā)現(xiàn)效率生物利用度BIOAVAILABILITY是指藥物制劑中的活性藥物被全身利用的程度，包括進入全身血液循環(huán)的劑量和速度?？诜锢枚龋ˋLBIOAVAILABILITY）則是指藥物經(jīng)口服之后的生物利用度。口服生物利用度是口服藥物的一個重要指標，但是今天醫(yī)療實踐中的很多藥物是腸外給藥，而不是口服給藥。例如1204種美國FDA批準的小分子藥物中，803種是可口服給藥的，421種通過腸外給藥。在這1204種藥物中只有73％（885種）通過了“RULEOFFIVE”規(guī)則，其中70（619種）是口服給藥的。過分地強調“RULEOFFIVE”規(guī)則及口服生物利用度致使藥物發(fā)現(xiàn)效率很低。例如第一種可口服利用的青霉素（青霉素V）的發(fā)現(xiàn)比青霉素G的發(fā)現(xiàn)晚15年之多；在肝素發(fā)現(xiàn)80多年后的2003年，第一種可口服利用的凝血酶抑制劑XIMELAGATRAN才被批準通過，但在2006年因為其具有肝毒性就被撤出了市場。在此期間，用于腸外給藥的凝血酶抑制劑的發(fā)現(xiàn)很成功。如LEPIRUDIN（1998）、ARGATROBAN（2000）、和BIVALIRUDIN（2001），F(xiàn)ONDAPARINUX（2002）已用于臨床實踐，并顯著改善了皮下注射時的治療效果，對肝素禁忌的病患者的治療效果也得到了改善。因此，我們需要一個更有效的方法去發(fā)現(xiàn)新藥。開發(fā)一些注射藥ENFUVIRTIDE一種新型的HIV融合抑制劑，由皮下注射給藥的，但是很少有口服藥物的報道。ABT737是BCL2和BCLXL的一種有效低劑量抑制劑，但是ABT737MW803；13個NO和S等雜原子是不能口服利用的，且不符合“RULEOFFIVE”規(guī)則。ABT263一種可口服利用的BCL2抑制劑，但這種藥物不符合“RULEOFFIVE”規(guī)則。開發(fā)一些生物制品如一些治療性抗體（MABS），它不僅在發(fā)展單克隆抗體作為藥品方面很有效，而且也可引領小分子藥物的發(fā)展，早期，由一些MABS，如CETUXIMAB和TRASTUZUMAB產(chǎn)生的一些資料對于發(fā)展小分子抑制劑如GEFITINIBERLOTINIB和LAPATINIB是非常有利的發(fā)現(xiàn)新藥物時采取更有效的方法是明智的即①在將過多的人力和物力投入一種可口服利用的候選藥物之前，首先去開發(fā)一種腸外給藥的候選藥物；②在將過多的人力和物力投入一個小分子候選藥物之前，首先去發(fā)展一種不論在哪里起作用的治療性抗體（很可能是通過胃腸給藥的）以上的方法可能對于發(fā)現(xiàn)那些作用于蛋白酶或決定蛋白質相互作用的復雜靶標的新型藥物尤為重要?；谔烊划a(chǎn)物的藥物發(fā)現(xiàn)的高效率，可能歸因于它們與蛋白質靶標結合的化學結構已經(jīng)被選擇確定。研究人員將SCONP系統(tǒng)與PSSC系統(tǒng)相結合，將會選擇一個結構不很復雜，且能夠與復雜先導物的蛋白質靶點結合的天然產(chǎn)物結構框架。這個結構框架被用來作為一種新型化學模型或化學起始點，以建立目標化合物文庫。天然產(chǎn)物和藥物發(fā)現(xiàn)效率天然藥物的在藥物中占據(jù)很重要的地位。尤其在治療嚴重的或威脅生命的疾病，如癌癥和傳染性疾病時的顯得更加重要。例如所有在1981年到2006年間全球范圍內批準的所有小分子藥物中有34％是天然產(chǎn)物或是它們的直接半合成衍生物；在全部批準的155種小分子抗癌藥物中，有47％是天然產(chǎn)物或是它們的直接半合成衍生物；全部獲得批準的抗菌藥物中，超過75％的是天然產(chǎn)物或其半合成衍生物（即98種中有74種）。在2000年2006年間，高通量生物合成生產(chǎn)批準的藥品，這些批準的小分子藥物中大約有50％也都歸于天然產(chǎn)物。用于天然藥物發(fā)現(xiàn)的合成生物學基于天然產(chǎn)物的藥物發(fā)現(xiàn)的挑戰(zhàn)之一就是其結構的復雜性和合成的可行性。有機化學的進步和新技術如合成生物學（生物合成工程）的出現(xiàn)將有助于克服這一難題。合成生物學是一個新興的科學領域，它旨在了解和設計生物系統(tǒng)或其組成部分，以解決各種天然產(chǎn)物無法解決的問題。合成生物學很大程度上可以被認為是“代謝工程或生物合成工程”的代名詞，就是通過重組DNA技術來改變生活系統(tǒng)（如微生物系統(tǒng)）的遺傳信息以獲得期望的終產(chǎn)物。雖然天然產(chǎn)物的結構高度復雜多樣，但其生物合成可通過很少的且非常簡單的幾個類型的反應來完成。例如簡單聚酮化合物雷帕霉素生物合成（圖1）是混合催化I型的PKS非核糖體的肽合成酶（NRPS）系統(tǒng)催化的。廣泛的雷帕霉素類似物的生物合成有趣的是，當DNA上那些含有激活甲基轉移酶和單加氧酶（RAPKIJMNOQL）的后PKS（RAPIJMNOQ）基因區(qū)域被切斷時，產(chǎn)生的突變體SHYGROSCOPICUSMG210無法產(chǎn)生前雷帕霉素，除非用外源起始物34二羥基環(huán)己烷羧酸飼喂或者補充基因RAPK。這表明，RAPK的產(chǎn)物參與起始物的合成或調節(jié)。這樣，飼喂MG210突變體以外源起始物，同時選擇性表達POSTPKS（RAPIJMNOQ）就可使突變修復，使得生物合成雷帕霉素廣泛的類似物（圖3）成為了可能。雷帕霉素一種類似物BC210（圖4）具有不穩(wěn)定的C39甲氧基，去除C39甲氧基時，去甲基雷帕霉素（T1259MIN，PAPP29NMS）與雷帕霉素（T1240MIN，PAPP2NMS）相比顯著改善了其代謝穩(wěn)定性和滲透性。BC210體內和體外實驗顯示具有多種抗癌活性。經(jīng)過生物合成實現(xiàn)前體優(yōu)化能保持或增加配體效力，這一優(yōu)點也存在于其它案例中。例如，合成生物學方法對天然HSP90抑制劑雙氯西林Ⅰ優(yōu)化，得到NONQUINONE（KD0007ΜM，MW519），與先導物雙氯西林Ⅰ（KD024ΜM，MW559）相比，它對HSP90的親和力顯著增加，分子量得到減小（圖5）。相反，通過半合成法對另一種天然HSP90抑制劑格爾德霉素進行優(yōu)化，得到的17烯丙基化TANESPIMYCIN（KD13ΜM，MW586），它與先導物格爾德霉素（KD12ΜMMW561）相比，它對HSP90具有類似的親和力，但分子量卻增加了）（圖5）。生物合成的NONQUINONE與半合成的TANESPIMYCIN相比的另一個優(yōu)勢是，因其不進行氧化還原循環(huán)，對于靶點的毒性顯著降低，所以，治療前景更加廣闊。CONCLUSIONS（結論）“RULEOFFIVE”規(guī)則具有局限性為了提高藥物發(fā)現(xiàn)效率和解決未滿足的醫(yī)療需要這些問題，我們似乎應該接受一個綱領性的近似生物利用度的方法。藥物發(fā)現(xiàn)更應致力于天然藥物的研究。新型技術如合成生物學，將會解決許多基于天然藥物的藥物發(fā)現(xiàn)中存在的挑戰(zhàn)性問題，如結構的復雜性和合成的可行性。THANKYOU

簡介：及其稿件的相關要求中國獸藥雜志由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所主辦，農(nóng)業(yè)部主管，面向國內外公開發(fā)行的唯一的國家級獸藥綜合性、公益性的學術性科技期刊。本刊于1955年創(chuàng)刊，一直圍繞農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)獸藥的中心工作積極開展工作，宣傳國家獸藥監(jiān)管法律法規(guī)、解讀獸藥行業(yè)政策、宣傳獸藥檢驗新技術、新標準，介紹獸藥生產(chǎn)新工藝、新方法，推廣科學用藥、安全用藥、合理用藥的基本常識。本刊內容豐富，選材嚴謹，實用性強。讀者群涵蓋了從事獸藥藥政管理、獸藥研究開發(fā)、獸藥生產(chǎn)、檢驗、經(jīng)營、使用、教學，以及相關專業(yè)畜牧、醫(yī)藥、化工等專業(yè)技術、經(jīng)營、管理、監(jiān)督人員、教學科研人員以及廣大的獸醫(yī)工作者和規(guī)?；B(yǎng)殖者。本刊于2010年入選中國農(nóng)業(yè)核心期刊，2011年被評為第八屆中國畜牧獸醫(yī)學術類優(yōu)秀期刊，成為宣傳優(yōu)秀企業(yè)、優(yōu)秀產(chǎn)品的重要平臺，受到行業(yè)內各級部門廣泛關注，已成為獸醫(yī)獸藥領域內最具影響力的雜志之一。2011年，新版中華人民共和國獸藥典解讀專欄受到行業(yè)內的廣泛關注及好評。2012年，我們將以新的欄目、新的視角為行業(yè)發(fā)展做出貢獻。本刊新增“行業(yè)聚焦”和“獸藥經(jīng)營”2個新欄目。我們將圍繞GSP的實施及大家關心的熱點問題，約請有關專家撰寫文章連續(xù)進行深度解讀，敬請大家關注。您可直接登錄中國獸藥雜志網(wǎng)站ZGSYZZIVDC投稿或了解相關信息，敬請關注期待您來電、來訪，電話01062103602微生物與免疫欄目包括微生物相關的疫苗檢驗檢測、菌種分離鑒定、免疫原性或效力實驗、分子生物學技術等內容。2012年編輯部力邀企業(yè)在近兩年新批準的新獸藥研究方面的相關文章例如豬鏈球菌病滅活疫苗或研發(fā)的國家重點產(chǎn)品如偽狂犬疫苗與診斷試劑盒等。2012年重點強化欄目產(chǎn)品與工藝欄目包括獸藥或疫苗方面的產(chǎn)品開發(fā)、工藝技術研究類文章。2012年編輯部力邀企業(yè)在重大動物疫病疫苗、動物疾病診斷制劑、動物疾病治療制劑等新產(chǎn)品以及例如細胞系MDCK微載體懸浮、細胞系BHK21生物反應器懸浮培養(yǎng)等新工藝方面的文章。作者投稿錄用流程登陸ZGSYZZIVDC作者注冊上傳WD格式稿件初審后送專家外審1審稿專家結論為退稿2審稿專家結論為修改后發(fā)表3審稿專家結論為采用編輯做退稿處理把退稿信息反饋給作者結合審稿意見及批注稿編輯再次審讀作者稿件把編輯和審稿專家意見一起反饋給作者作者網(wǎng)上上傳修改稿填寫修改說明錄用稿件發(fā)交納版面費通知編輯擇期刊登主編終審需關注文稿的三個方面形式內容格式一、文稿的形式綜述型反映的是某一領域的概況研究型是針對具體問題的研究應用型是已知理論、原理、技術的新應用其他二、文稿內容（一）選題題材要新穎的、熱點的、實用的。所謂“新”，包括新發(fā)明、新發(fā)現(xiàn)、新應用、新產(chǎn)品、新技術、新工藝、新理論、新方法、新觀點、新規(guī)律等?；蛘咝卵芯繉ο?、新研究角度、新材料、刊正前人錯誤、解決爭議、補充和發(fā)展前人成果等。中國知網(wǎng)維普資訊萬方數(shù)據(jù)CNWWWNCBINLMNIHGOVPUBMED（美國國家醫(yī)學圖書館期刊文獻檢索系統(tǒng)）（二）科學性實驗動物的數(shù)量、等級、來源，陰性陽性對照的安排，實驗設計的科學性，文字與表格中數(shù)據(jù)的對應，結果與結論的統(tǒng)一等等。（三）邏輯性文章可根據(jù)不同的內容深度及相互的對應關系進行邏輯分層，結構層次要合理。同一級標題盡量做到平衡統(tǒng)一；不同層次的標題，在內容上應相互聯(lián)系?？萍颊撐膶哟我话悴怀^4級，各級統(tǒng)一用阿拉伯數(shù)字編寫。（四）語言文字語言要連貫通順，表達清晰，避免口語化。文字規(guī)范、術語準確。不同形式文稿內容的側重點綜述性文章要注重深度既要對國內外該領域研究的歷史和現(xiàn)狀進行科學的歸納和分析，也要對該領域存在的問題和發(fā)展趨勢提出自己的獨特見解，以對該領域下一步的研究方向起到指導作用。研究性文章應明確研究的創(chuàng)新點這類文章一定要是自己的研究。文章應明確界定自己提出了什么、解決了什么、改進了什么，說明研究在實驗、理論或研究成果方面具有的創(chuàng)新點，以及它的驗證結果，不能照搬參考文獻或是已知內容。應用性文章要側重于反映自己的具體工作這類文稿對已公知的基礎理論、相關技術一筆帶過或采用參考文獻的形式進行角注。三、文稿格式科學技術報告、學位論文和學術論文的編寫格式GB77131987指出，規(guī)范的科技論文應包含標題、作者署名、摘要、關鍵詞、引言、正文、結語、參考文獻。（一）題名能展現(xiàn)論文特定內容字數(shù)一般不超過20字。用詞要確切、簡明、嚴謹。詞語的安排要符合邏輯關系。盡可能包含論文的主題詞。采用肯定或否定的陳述句式。文題相符。常見的問題缺乏新意過于謙虛淺析、淺談、試論、初探，新解、新論、新思考表達不確切（小題大做、文不對題、存在歧義、繁瑣冗長）用詞不規(guī)范“韓士超能”在搶救瀕死仔豬中的應用（復合維生素葡萄糖）（二）作者署名作者多位作者不在同一單位，可在其名字的右上角加“1，2”角標單位單位的名稱、所在地、郵政編碼第一作者簡介在注腳處注明第一作者相關信息注意事項單位必須用全稱標注，不得用簡稱。中科院、農(nóng)科院多位作者不同單位時，作者、單位、角標必須準確對應中英文對應（三）摘要摘要是以提供文獻內容梗概為目的，不加評論和補充解釋，簡明確切地記述文獻重要內容的短文。摘要應有獨立性和自明性，擁有與文章同等量的主要信息。摘要的分類報道性摘要指明主題范圍及內容的簡明摘要，適用于創(chuàng)新性較多的文章。學術研究類文章需寫出報道性摘要。指示性摘要指明論題及取得成果的性質和水平的摘要，對研究的主要內容有一個輪廓性的了解。綜述類的文章需寫出指示性摘要。報道指示性摘要信息價值較高的部分采用報道格式，其他部分采用指示性格式。結構式摘要目的OBJECTIVEPURPOSEAIM、方法METHOD、結果RESULTS、結論CONCLUSION4個要素，以其層次清晰、內容完整、重點突出、觀點明確、條理分明的優(yōu)點在近幾年得到廣泛應用原則要素要齊全，字數(shù)一般不超過300字。一般不分段。避免使用“我們”、“本文”、“作者”作為主語。不加評論和注釋，尤其是自我評價。（本研究已達到國際先進水平）不引用文獻，除非你證實或否定了他人已出版的著作避免摘要的第一句話簡單重復題名或題名的一部分。排除本學科領域已成為常識的內容。不談或盡量少談背景信息，也不要包括作者對未來的計劃（有關XXX方面的研究有待進一步開展。）使用規(guī)范化的名詞術語和符號。結構嚴謹，語言精練，語義表達確切，做到摘要中每一句話都具備信息價值。英文摘要題名與中文一致，準確ACCURACY、簡練BREVITY、清晰CLARITY）。時態(tài)一般過去時，一般現(xiàn)在時。語態(tài)不強調必須用被動或主動語態(tài)應視具體情況可能情況下盡量使用動詞的主動語態(tài)注意意譯。符合英文的語法規(guī)和表達習慣。四關鍵詞關鍵詞是能反映論文主題概念的詞或詞組每篇論文選擇關鍵詞3～5個可從題名和摘要中選出關鍵詞按其重要性排列（五）前言前言（也稱引言）作為論文的開場白，主要圍繞“為什么研究”來寫。先簡短介紹寫作背景、相關領域前人所做的工作和研究的概況，提出文中要研究的問題，包括論文追求的目標、研究范圍和理論、技術方案的選取等，引導讀者閱讀和理解全文。原則一要開門見山，不繞圈子，避免大篇幅地講述歷史淵源和論題研究過程。二要突出重點，不應詳述同行熟知的及教科書上已有陳述的基本理論、實驗方法。三要實事求是，切忌用不適之詞來評價文章的意義。四要注意與結論相呼應，但避免雷同。五要言簡意賅，不要用華麗的詞藻進行刻意的描述。（六）正文引言是提出問題“研究什么為什么研究”，正文則是分析問題和解決問題，主要回答“怎樣研究”。研究性論文一般包括材料、方法、結果、討論四部分。正文中涉及到的細節(jié)問題對實驗結果有影響或密切相關的實驗材料必須給出詳細信息，比如中藥的產(chǎn)地，化藥對照品或標準品的含量，生藥生產(chǎn)材料的來源、純粹性，實驗動物的級別等。非公知公認的名詞術語在首次出現(xiàn)時必須加括號注明原文?？萍颊撐氖褂玫牧亢蛦挝粦捎脟曳ǘǖ挠嬃繂挝弧２粦撛倮^續(xù)使用已經(jīng)被廢除的量名稱和非法定單位以及非標準單位符號4圖要精心設計和繪制，圖文清晰，大小適中，線條均勻，主輔線分明。圖應具有自明性，切忌與表及文字的表述重復。圖的橫、縱坐標要注明對應的量和單位（TH）。顯微鏡病理圖片應注明染色方法和放大倍數(shù)。5表格設計要科學，一般采用三線表的格式。表格內不能有空白項。表頭內項目因空間有限而縮寫某項要素名稱時，應在表格注釋中說明相關縮寫的名稱。6圖（表）一般隨文排，先文字后圖（表）。量和單位GB31003102－93列出了614個量和單位的名稱。我國法定單位包括5部分國際單位制（SI）基本單位、具有專門名稱的SI導出單位、我國選定的非SI單位、由以上單位構成的組合單位、由SI詞頭與以上單位構成的倍數(shù)單位。量的符號通常是單個拉丁或希臘字母，有時帶有下標或者其他說明性標記。一律用斜體只有PH例外。速度V、體積V、時間T、波長Λ、質量M、攝氏溫度T，熱力學溫度T、功率P、壓強P、VMAX量符號的書寫時一定要注意區(qū)分大小寫。圖表中量的數(shù)值采用“量單位”的標準化表示法，TH不要寫成TH單位符號必須正體書寫。M、S、MIN盡量使用單位的國際符號。24秒（24S）單位的選取應使量的數(shù)值處于011000之間。000394M394MM1401PA1401KPA組合單位符號的書寫，相乘的用ABC或ABC，相除的寫作ABC或ABC1不得寫成ABC或者ABC。不得把PPMPPBPPT等縮寫字作為單位使用。PPM（PARTSPERMILLION）106PPB（PARTSPERBILLION）109美、法等1012（英、德等）PPT（PARTSPERTRILLION）1012美、法等1018（英、德等）存在問題使用已經(jīng)廢棄的量名稱。如重量（質量）未使用國家規(guī)定的量符號。如質量未用M，而用W；或者用多個字母構成一個量符號。如臨界溫度CRITICALTEMPERATURE寫成CT正確的應該是TC使用已廢棄的非法定單位或者單位符號。如RMP轉每分，RMIN，M物質的量濃度MOLLMMHG壓強，PA非普及性期刊使用單位的中文符號。12天（12D）單位時而用中文符號，時而用國際符號。如天，D；10MG天不善于使用詞頭構成十進倍數(shù)或分數(shù)單位。如100000M000036A在圖、表中未采用“量單位”的標準化表示法。插圖插圖的分類線條圖和照片圖。線條圖又包括簡易函數(shù)圖、各種示意圖、流程圖等。照片圖一般分為彩色圖和黑白圖。函數(shù)圖的要素（體現(xiàn)各項規(guī)范化要求最為全面）圖序、圖題、坐標軸、標值線、標值、標目、曲線、圖注、圖例、注釋或說明由幾個分圖組成的插圖中，當橫坐標的標目、標值及標值線均相同時，以疊置為宜，此時分圖題所示的條件可直接標入圖中分圖題刪去。當一族曲線的線性比較接近，擠在一起影響閱讀時，可以共用一個坐標軸而分立另外一個坐標軸。當一幅圖上有兩條以上不同的函數(shù)關系曲線是，他們的縱坐標需要分立于圖的兩側。右側縱坐標的標目置于坐標外側，自下而上書寫，頂左底右。插圖中圖注符號的大小要適中圖例形狀或類型要有明顯區(qū)別，建議選用“■”“□”“●”“○”“▲”“△”，使曲線更加容易區(qū)分，便于閱讀。表格無線表項目和數(shù)據(jù)比較少，且內容簡單。不便于排版校對，也不利于閱讀時進行對比分析。系統(tǒng)表用于表述隸屬關系的多層次事項。卡線表功能比較齊全。缺點是橫線、豎線比較多，且欄頭還有斜線，顯得比較繁雜。三線表是由卡線表簡化和改造而成的。它以卡線表為基礎，欄頭取消了斜線，省略了橫豎分隔線（行線、欄線），通常只有三條線（注意沒有豎線），即頂線、底線和欄目線，三線表也由此得名。三線表其實不一定只有三條線，必要時可加輔助線，但無論加多少條輔助線，仍稱作三線表。對表格的要求項目欄中各欄標注應齊全。表中的術語、符號、單位等應與圖及文字表述所用的一致。若所有欄的單位相同，應將單位標注在表的右上角，不寫單位二字。欄目有單層次也有多層次的。多層次欄目需用輔助線隔開。表身內的數(shù)字一般不帶單位，可歸并在欄目中。相鄰欄或上下欄的內容相同，應重復寫出或采用共用欄的方式處理，不能用“同左”或“同上”。表身無數(shù)字的欄內代號應謹慎書寫，未測或者空白項一般用“”代表，未發(fā)現(xiàn)用“”代表（最好在表下方做注釋說明），實測結果為0時一定要寫出。統(tǒng)計符號統(tǒng)計學名詞及符號規(guī)定常用統(tǒng)計學符號一般用斜體樣本的算術平均數(shù)用英文小寫X不用大寫X也不用MEAN標準差用英文小寫S不用SDMEANSD標準誤用英文小寫SX不用SET檢驗用英文小寫TF檢驗用英文大寫F卡方檢驗用希文小寫Χ2相關系數(shù)用英文小寫R樣本數(shù)用英文小寫N概率用英文大寫P部分外文字母的編排物種的學名屬、種名包括亞種、變種要斜體，屬名首字母大寫屬以上用拉丁文正體BACILLUSSUBTILISESCHERICHIACOLISTAPHYLOCOCCUSAUREAUS限制性內切酶前3個字母用斜體后面的字母和編碼用正體如BAMHⅠ、ECⅠ、MSPⅠ、SAU3AI等氨基酸和堿基的縮寫氨基酸縮寫用3個字母表示時僅第一個字母大寫其余小寫正體GLU；堿基縮寫為大寫正體基因及表型產(chǎn)物的符號表示基因座名的英文縮寫用斜體一般為小寫字母基因位點用正體大寫，如大腸桿菌AROC基因。蛋白名稱的英文縮寫用正體，首寫字母大寫或全部大寫。（七）結論結論不是論文的必要組成部分，如果文中不可能明顯導出應有的結論，也可以沒有結論而進行必要的討論。結論一般應與引言相呼應，回答“做了什么”。但不應寫成正文中各段小結的簡單重復。結論應完整、準確、簡潔地指出以下內容試驗結果所揭示的原理及其普遍性；研究中有無發(fā)現(xiàn)例外或本論文尚難以解釋和解決的問題；與先前已發(fā)表過的研究工作的異同；本論文在理論上和實用上的意義和價值；進一步深入研究本課題的建議。（八）參考文獻著錄參考文獻既能方便地把論文作者的成果與前人的成果區(qū)分開來，是對他人勞動的尊重，也會起到索引作用。凡引用已發(fā)表文獻中的方法、論點及數(shù)據(jù)等，都要對它們在正文中出現(xiàn)的地方予以標明，并在文末列出參考文獻表。引用文獻采用“順序編碼制”，應按出現(xiàn)的次序用阿拉伯數(shù)字在引用處右上角用肩碼注明，文后所列出的參考文獻序號應與正文中標注的序號一致。112，140。文獻要避免集中引用，如16，要選擇已公開發(fā)表的、最必要、最權威、最新的文獻（未發(fā)表的不能列入?yún)⒖嘉墨I）。綜述類文章參考文獻要多為近3～5年內新文獻，數(shù)量一般不少于10篇。著錄參考文獻應齊全、規(guī)范。參考文獻類型標識碼期刊文章J、學位論文D、報告R、論文集C、專著M、報紙文章N、網(wǎng)上期刊JOL、專利P、標準S、數(shù)據(jù)庫DB、網(wǎng)上電子公告EB。ROBBEAUSTERMANSSTABELJRPALMERMVEVALUATIONOFTHEGAMMAJJVETDIAGNINVEST2006182189194中國動物疫病預防控制中心狂犬病防控知識問答EBOL2009061220090702WWWCADC陰健中藥現(xiàn)代研究與臨床應用M北京中國古籍出版社199530姜錫洲一種溫熱外敷藥制備方案中國881056073P19890726謝希德創(chuàng)造學習的新思路N人民日報1998122510值此新年來臨之際，預祝大家新年快樂中國獸藥雜志編輯部

簡介：核苷酸代謝METABOLISMOFNUCLEOTIDES五年制臨床醫(yī)學CHAPTER8JIANJUNXIEMDPHDDEPARTMENTOFBIOCHEMISTRYMOLECULARBIOLOGYMEDICALCOLLEGEOFSHANTOUUNIVERSITYSHANTOUCHINA為什么要學習核苷酸代謝一般發(fā)作部位為大母趾關節(jié)，踝關節(jié)，膝關節(jié)等。長期痛風患者有發(fā)作于手指關節(jié)，甚至耳廓含軟組織部分的病例。急性痛風發(fā)作部位出現(xiàn)紅、腫、熱、劇烈疼痛，一般多在子夜發(fā)作，可使人從睡眠中驚醒。痛風（代謝性關節(jié)炎）一、疾病患者在發(fā)病時會毀壞自己的容貌用各種器械把臉弄得猙獰可怕。這種疾病患者常常被束縛在床上或輪椅上。自毀容貌癥患者大多死于兒童時代很少活到20歲以后。自毀容貌癥嚴重聯(lián)合免疫缺陷病多于出生后3個月內開始感染病毒、真菌、原蟲和細菌反復發(fā)生肺炎慢性腹瀉、口腔與皮膚念珠菌感染及中耳炎等。核酸是人體細胞中的關鍵物質，補充外源核酸，就能延年益壽，乃至“長壽不老”；補充DNA，則細胞生長加快，人體機能就充滿活力。我們所研究出的生命核酸采取更為科學的提取方法，直接從動物臟器中提取。DNA含量高，純度高，與人體同源性高。加上產(chǎn)品是口服液，更易被人體腸胃所吸收和利用。珍奧核酸2000年核酸是營養(yǎng)必需品一部曾經(jīng)轟轟烈烈的鬧劇二、生活世界上曾有38位科學家因研究核酸而獲得諾貝爾獎。1998年4月開始建廠，同時其產(chǎn)品被列入“98年國家級火炬計劃”，“確定為全國基因工程重大成果轉化項目”。在短短兩年時間內，“珍奧”獲得了“全國第十二屆發(fā)明展覽金獎”，中國保健科技協(xié)會“向消費者推薦產(chǎn)品”，衛(wèi)生部“2000年中老年保健國際學術論壇暨中國保健品國際博覽會唯一金獎”，遼寧省政府“醫(yī)藥行業(yè)科技進步一等獎?！?001年2月底，“衛(wèi)生部中國保健科技學會”，召開了一個“聽證會”，得出“核酸保健品有益于健康”的結論。珍奧核酸聲稱世界衛(wèi)生組織呼吁成年人每天要補充外源核酸1至5克。難道珍奧核酸真的能夠“包治百病，長生不老”“核酸營養(yǎng)是個商業(yè)大騙局”。2001年1月，方舟子于新語絲人體不需要補充外源核酸，直接服用核酸產(chǎn)品對改善健康并沒有幫助?！八^核酸食品在營養(yǎng)價值上和米粉沒有太大的差別。中國“人類基因組計劃”項目負責人楊煥明2001年3月1日，英國自然雜志（國際上最權威的科學雜志之一）刊登了一篇題為中國的希望與炒作的社論，評論中國科技界的現(xiàn)狀，其中提到了中國的“核酸營養(yǎng)”騙局。文章指出“那些懷疑DNA是有益食品的批評則被忽視或掩蓋?！贝筮B醫(yī)科大學崔秀云教授核酸是人體細胞中的關鍵物質，補充外源核酸，就能延年益壽，乃至“長壽不老”。人包括老年人，孕婦，嬰兒都不需要補充核酸或是核甘。首先，人體日常所需的營養(yǎng)物質可分為，而且只分為八大類蛋白質，糖類，脂類，無機元素，維生素，水，氧和纖維素。纖維素嚴格地說不是營養(yǎng)物質，因為人體不能消化和吸收纖維素。但是食物中缺少纖維素會導致某些疾病發(fā)病率的增高。有些物質是人體日常所需，但是不需要補充，如銅。如果明天有個珍奧銅公司賣給你銅錠當營養(yǎng)品，你吃不吃如果沒有任何外源核甘酸，人體可以自己合成。以嘌呤為例，嘌呤環(huán)上的四個氮五個碳是從四個氨基酸人體從蛋白質中獲得和二氧化碳獲得的。上海生物化學研究所研究員陸長德又退了一步說“核酸不是必需營養(yǎng)，并不一定要補充核酸。但吃核苷、核苷酸比從頭合成容易利用，在一定范圍內有益無害”。這位研究員連最基本的醫(yī)學或生物常識都沒有。就算人體不能自己合成核甘，也不必額外補充外源核酸。每天每個人都要進食。我們的食品無非就是動物和植物。每個動植物細胞里都有DNA和RNA。粗略的估計，每天的食物濕重就可提供等重的人體細胞的“外源核甘酸”。人類，無論是誰，不管是窮人或是富人，不管是普通人或是孕婦，只要他她食人間煙火就已經(jīng)有足夠的“外源核酸”，再吃核苷、核苷酸只能會有害無益。核苷酸是核酸的基本結構單位，人體內的核苷酸主要由機體細胞自身合成，因此核苷酸不屬于營養(yǎng)必需物質。核苷酸及其水解產(chǎn)物均可被細胞吸收，但它們的絕大部分在腸粘膜細胞中又被進一步分解。分解產(chǎn)生的戊糖被吸收而參加體內的戊糖代謝，嘌呤和嘧啶則主要被分解而排出體外。因此，實際上由食物來源的嘌呤和嘧啶很少被機體利用。生物化學第8版191頁（周愛儒主編）機體可以利用一些小分子化合物合成核酸，所以人體不需要靠外界供給核酸。核酸不屬于營養(yǎng)素之列。中等教育統(tǒng)一教材生物化學第99頁（馬如駿主編）世界衛(wèi)生組織在2000年底發(fā)布的建立世界范圍的人類營養(yǎng)需求方案報告中，列出了人類所需的全部營養(yǎng)物質名稱，包括蛋白質、脂肪和碳水化合物、維生素、微量元素等，其中并沒有核酸一項。WEWILLDESCRIBE核苷酸有哪些重要生理功能食物中核酸如何消化、吸收體內核苷酸如何代謝合成與分解核苷酸代謝障礙對機體有什么影響核苷酸代謝類似物有何臨床作用核酸基本組成單位核苷酸（NUCLEOTIDE磷酸核苷酸戊糖核糖，脫氧核糖核苷嘌呤腺嘌呤（ADENINEA）堿基鳥嘌呤（GUANINEG）嘧啶胞嘧啶（CYTOSINEC胸腺嘧啶（THYMINET尿嘧啶（URACILU知識回顧核酸和核苷酸的基本知識核酸分為兩大類DNA和RNAADENINEAGUANINEGBASEPURINEBASEPYRIINECYTOSINECURACILUTHYMINETBASESNUCLEOSIDESNUCLEOTIDESBASENUCLEOSIDENUCLEOTIDEADENINEDEOXYADENOSINEDEOXYADENOSINE5’TRIPHOSPHATEDATPAPOSTROPHE第一節(jié)核苷酸的生物學功能BIOLOGICALFUNCTIONSOFNUCLEOTIDES核酸的消化與吸收食物核蛋白蛋白質核酸RNA及DNA核苷酸胰核酸酶堿基戊糖核苷酶戊糖代謝排出，很少被吸收NUCLEOTIDESAMPGMPUMPCMPMMOLDAMPDGMPDCMPDTMPMOLNUCLEOSIDESADENOSINEGUANOSINECYTIDINEURIDINEDEOXYADENOSINEDEOXYGUANOSINEDEOXYCYTIDINETHYINEBASESADENINEGUANINECYTOSINETHYMINEURACILNOTES核苷酸的生物學功用作為核酸合成的原料最主要功能體內能量的利用形式ATP主要形式；GTP蛋白質合成；UTP糖原合成；CTP磷脂合成參與信號轉導、代謝和生理調節(jié)CAMPCGMP信號轉導第二信使ADP誘導血小板的聚集，導致血栓形成；腺苷調節(jié)冠狀動脈血流量等。組成輔酶NAD，F(xiàn)AD，COA的組成成分活化中間代謝物活化中間代謝物的載體SAM（S腺苷甲硫氨酸，甲基的載體）；UDP葡萄糖（合成糖原、糖蛋白的原料）。參與酶活性的快速調節(jié)變構抑制劑或者變構激活劑谷氨酸脫氫酶ADPGDPATPGDP；在酶的磷酸化修飾中提供磷酸基。NO與細胞信號轉導鳥苷酸環(huán)化酶磷酸二酯酶血管收縮核苷酸代謝圖解核苷酸的合成代謝從頭合成途徑DENOVOSYNTHESISPATHWAY是指利用磷酸核糖、氨基酸、一碳單位及CO2等簡單物質為原料，經(jīng)過一系列酶促反應，合成核苷酸的途徑。補救合成途徑SALVAGESYNTHESISPATHWAY利用體內游離的堿基或核苷，經(jīng)過簡單的反應過程，合成核苷酸的途徑。核苷酸的從頭合成概況5磷酸核糖PRPPASPCO2GLN氨基甲酰磷酸乳清酸UMPDTMPUTPCTPGTPATPAMPGMPIMPGLNGLYGLN一碳單位一碳單位CO2ASP第一節(jié)嘌呤核苷酸代謝METABOLISMOFPURINENUCLEOTIDES肝、小腸和胸腺的胞液，并不是所有細胞都具有從頭合成嘌呤的能力。（一）嘌呤核苷酸的從頭合成合成部位一、嘌呤核苷酸的合成代謝嘌呤堿合成的元素來源CO2天冬氨酸甲?；ㄒ惶紗挝唬└拾彼峒柞；ㄒ惶紗挝唬┕劝滨０罚０坊└拾庇抑姓竟鹊鴥蛇呑笊咸於鳖^頂二氧碳二八倆葉酸1IMP（次黃嘌呤核苷酸，重要的中間產(chǎn)物）的合成1從頭合成途徑磷酸核糖焦磷酸GPATPRPPK磷酸戊糖途徑從頭合成途徑的特點參與從頭合成途徑的酶均在胞液中多以多酶復合體的形式存在。以磷酸戊糖途徑中合成的5磷酸核糖（5PR）為原料，經(jīng)11步反應生成次黃嘌呤核苷酸（IMP）。在合成IMP過程中，由氨基酸，CO2，一碳單位逐步提供元素或基團，在5磷酸核糖分子上完成嘌呤堿基的合成。從IMP出發(fā)再合成AMP和GMP。包括3個階段A合成激活階段第1步反應。B合成咪唑環(huán)的階段26步反應。C合成IMP階段711步反應。AMP和GMP的合成PRA2AMP和GMP的生成AMPADPATPADPATP激酶ADPATP激酶GMPGDPGTPADPATP激酶ADPATP激酶嘌呤核苷酸是在磷酸核糖分子上逐步合成嘌呤環(huán)的。而不是分別合成，然后結合，這與嘧啶的合成過程不同。先合成IMP，再轉變成AMP或GMP。PRPP是5磷酸核糖的活性供體。嘌呤核苷酸從頭合成特點2從頭合成的調節(jié)需要消耗大量的能量，在機體精確的調節(jié)之下進行。調節(jié)方式反饋調節(jié)和交叉調節(jié)。正性調節(jié)指促進嘌呤核苷酸合成的調節(jié)（）；負性調節(jié)是指抑制嘌呤核苷酸合成的調節(jié)（）。正性調節(jié)兩個關鍵酶的促進作用。PRPP合成酶和酰胺轉移酶，底物ATP、5’磷酸核糖和PRPP促進其活性，增加IMP的合成；后端正性調節(jié)由ATP促進GMP合成酶，由GTP促進腺苷酸代琥珀酸合成酶增加GTP和ATP的合成。負性調節(jié)6個長反饋調節(jié)由AMP，GMP和IMP分別反饋抑制PRPPK和GPAT這兩關鍵酶的活性；2個短反饋調節(jié)由AMP反饋抑制腺苷酸代琥珀酸合成酶，由GMP反饋抑制IMP脫氫酶的活性所進行的反饋抑制來調節(jié)嘌呤核苷酸的從頭合成。IMPAMPSXMPAMPADPGMPGDPGTPATPATPGTP既滿足需要，又不致于浪費。維持ATP與GTP濃度的平衡（交叉調節(jié)）。調節(jié)的意義（二）嘌呤核苷酸的補救合成腺嘌呤磷酸核糖轉移酶ADENINEPHOSPHIBOSYLTRANSFERASEAPRT次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶HYPOXANTHINEGUANINEPHOSPHIBOSYLTRANSFERASEHGPRT腺苷激酶ADENOSINEKINASE參與補救合成的酶補救合成細胞利用現(xiàn)成的嘌呤堿或嘌呤核苷重新合成嘌呤核苷酸的過程。過程簡單，消耗能量少。補救合成過程補救合成的生理意義補救合成節(jié)省從頭合成時的能量和一些氨基酸的消耗。體內某些組織器官，如腦、骨髓等只能進行補救合成。因此，對這些組織器官來說，補救合成途徑具有更重要的意義。如果補救合成發(fā)生障礙，就會導致疾病，如LESCHNYHAN綜合征。LESCHNYHAN綜合征萊施尼漢綜合征，又稱雷尼綜合征、自毀容貌綜合征。LESCH與NYHAN與1964年首次報道并描述本病的臨床特點，本病的臨床特點是男孩發(fā)病、智力低下，舞蹈狀手足徐動、腦性癱瘓，強迫性自殘、攻擊性行為和高尿酸血癥等，多于12歲之前死亡，很少活過20歲。萊施尼漢綜合征屬于伴性隱性遺傳的先天性代謝病，SEEGMILLER于1965年證實本綜合征由次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶HGPRT缺陷致嘌呤代謝異常所致?；旧惓Ｊ荋GPRT的缺陷，多源于基因的點突變或者缺失。缺乏該酶使得次黃嘌呤和鳥嘌呤不能轉換為IMP和GMP，而是降解為尿酸，過量尿酸將導致LESCHNYHAN綜合癥。神經(jīng)癥狀的機制未明確，但患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)多巴胺能神經(jīng)元幾乎完全喪失，推測D1多巴胺拮抗因子可能與本病的神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)尤其是自殘行為有關。這種疾病患者常常被束縛在床上或輪椅上?，F(xiàn)有的醫(yī)療技術對此無計可施而只能寄希望于基因治療。HPRT基因已經(jīng)克隆，用特異性探針可檢出HPRT的突變基因用大量毛發(fā)濾泡檢測其酶活性以查出雜合子，用羊水細胞或胎盤絨毛檢出患病的男性胎兒上述雜合子的檢出和產(chǎn)前診斷，都已可能為本病的有效預防提供了可靠方法。確診的患病男性胎兒可做選擇性流產(chǎn)。（三）嘌呤核苷酸的相互轉變（四）脫氧核糖核苷酸的生成體內脫氧核糖核苷酸是通過相應的核糖核苷酸還原生成的。這種還原反應是由核糖核苷酸還原酶催化，在二磷酸核苷（NDP）水平上進行的。脫氧核糖核苷酸的生成過程核糖核苷酸還原酶的調節(jié)使得四種脫氧核苷酸控制在適當?shù)谋壤齊EVIEW核苷酸合成的途徑從頭合成和補救合成途徑從頭合成在戊糖的基礎上逐步合成嘌呤環(huán)，包括11步反應，先合成IMP；PRPP合成酶和酰胺轉移酶為關鍵酶。PRPP為活化的戊糖供體。從頭合成的調節(jié)反饋調節(jié)和交叉調節(jié)。補救合成利用現(xiàn)成嘌呤堿或者嘌呤核苷酸直接合成嘌呤核苷酸，多見于腦和骨髓。APRT和HGPRT參與補救合成途徑，HGPRT缺陷會導致自毀容貌綜合征。（五）嘌呤核苷酸的抗代謝物嘌呤核苷酸的抗代謝物是一些嘌呤、氨基酸或葉酸等的類似物。主要以競爭性抑制干擾或阻斷嘌呤核苷酸的合成代謝，從而進一步阻止核酸以及蛋白質的生物合成。腫瘤細胞的核酸和蛋白質的合成十分旺盛，因此這些抗代謝物可用于抗腫瘤。但是，這些藥物缺乏對腫瘤細胞的特異性，故對增殖速度較為旺盛的某些正常組織亦有殺傷性，有較大的毒副作用。次黃嘌呤H6巰基嘌呤6MP嘌呤類似物主要有6巰基嘌呤6MERCAPTOPURINE6MP等。與次黃嘌呤結構相似，1）變?yōu)?MP核苷酸，抑制IMP變?yōu)锳MP和GMP2）競爭抑制HGPRT，抑制補救合成途徑；3）反饋抑制PRPP酰胺轉移酶，使PRA生成減少。6MP6MP核苷酸從頭合成途徑補救合成途徑HGPRTPRPP酰胺轉移酶IMPAMP和GMP6MP核苷酸是IMP的類似物氨基酸類似物氮雜絲氨酸AS是GLN的類似物葉酸類似物C2及C8合成受抑制氨蝶呤AP和甲氨蝶呤MTXMTX二、嘌呤核苷酸的分解代謝嘌呤核苷酸的分解代謝包括3個基本步驟1核苷酸在核苷酸酶的作用下水解為核苷。2核苷在核苷磷酸化酶作用下分解為嘌呤堿基和1磷酸核糖。1磷酸核糖在磷酸核糖變位酶作用下轉變?yōu)?磷酸核糖。5磷酸核糖進入磷酸戊糖途徑進行代謝。3嘌呤堿基進一步代謝。一方面可以參加核苷酸的補救合成。另一方面可進入分解代謝，最終形成尿酸，隨尿液排出體外。地點肝、小腸和腎中進行。嘌呤堿的最終代謝產(chǎn)物AMPGMPH（次黃嘌呤）GX（黃嘌呤）黃嘌呤氧化酶黃嘌呤氧化酶有關尿酸人體嘌呤分解代謝的終產(chǎn)物；為三氧基嘌呤，其醇式呈弱酸性。各種嘌呤氧化后生成的尿酸隨尿排出。因溶解度較小，體內過多時可形成尿路結石或痛風。正常人血漿中尿酸含量為26MG；男性平均為45MG，女性為35MG。除了痛風，尿酸高還是許多疾病的危險指征。權威調查數(shù)據(jù)顯示，高尿酸血癥人群罹患冠心病死亡的幾率是尿酸正常人群的5倍。痛風痛風病是機體嘌呤代謝紊亂所致的一種代謝性慢性關節(jié)疾病。是由于嘌呤代謝產(chǎn)物尿酸在血液和組織中積聚，特別是在關節(jié)及其周圍的肌肉、韌帶。13～12病人有家族史，以中老年男性腦力勞動者多見。其臨床表現(xiàn)，無癥狀期僅血尿酸升高而急性關節(jié)炎期常于夜間發(fā)作，突感大腳趾、四肢關節(jié)、手指等處劇痛，關節(jié)有紅、腫、熱、痛炎性表現(xiàn)，持續(xù)數(shù)日可緩解或消退慢性期表現(xiàn)發(fā)作頻繁，持續(xù)時間長，受累關節(jié)增多，痛風結石侵蝕骨質可致骨骼畸形，病人還可伴慢性腎功能不全、冠心病及腦動脈硬化等癥。痛風病在任何年齡，都可以發(fā)生。但最常見的是40歲以上的中年男人。根據(jù)最新統(tǒng)計，男女發(fā)病比例是20∶1。腦力勞動者，體胖者發(fā)病率較高。痛風偏愛男性的原因是女性體內雌激素能促進尿酸排泄，并有抑制關節(jié)炎發(fā)作的作用。男性喜飲酒，喜食富含嘌呤、蛋白質的食物，使體內尿酸增加，排出減少。常吃火鍋者發(fā)病也多?；疱佋现饕莿游飪扰K、蝦、貝類、海鮮，再飲啤酒，自然是火上添油了。調查證明涮一次火鍋比一頓正餐攝入嘌呤高10倍。飲酒容易引發(fā)痛風，因為酒精在肝組織代謝時，大量吹收水份，使血濃度加強，使到原來已經(jīng)接近飽和的尿酸，加速進入軟組織形成結晶，導致身體免疫系統(tǒng)過度反應（敏感）而造成炎癥，古稱“王者之疾”。一瓶啤酒可使尿酸升高一倍。高血壓病人患痛風可能性會增加10倍。痛風與糖尿病一樣是終生疾病。關鍵是自己控制飲食，多食含“嘌呤”低的堿性食物，如瓜果、蔬菜，少食肉、魚等酸性食物，做到飲食清淡，低脂低糖，多飲水，以利體內尿酸排泄。男性為什么易患痛風藥物減少尿酸合成（別嘌呤醇）；增加尿酸排出（丙璜舒，抑制腎小管對尿酸的再吸收）。尿酸高（痛風）飲食控制痛風的防治限制高嘌呤食物，如肝臟、腎、胰、腦等動物臟器以及濃肉湯、雞湯、肉浸膏、沙丁魚、魚子等。限制蛋白質，以植物蛋白為主，而牛奶、雞蛋因無細胞核，嘌呤含量低，可隨意選用。大量提供B族維生素及維生素C等，使組織中沉積的尿酸鹽溶解。多吃一些堿性食品，如蔬菜、水果、礦泉水等，因為堿性環(huán)境中尿酸鹽易溶解，在酸性條件下易結晶。盡量多飲水，每日攝入量可在3000毫升以上，以促進尿酸鹽排出。嚴禁酗酒。別嘌呤醇痛風癥的治療機制鳥嘌呤次黃嘌呤黃嘌呤尿酸黃嘌呤氧化酶黃嘌呤氧化酶別嘌呤醇別嘌呤醇次黃嘌呤第二節(jié)嘧啶核苷酸的代謝METABOLISMOFPYRIINENUCLEOTIDES（一）嘧啶核苷酸的從頭合成主要是肝細胞胞液合成部位一、嘧啶核苷酸的合成代謝先合成嘧啶環(huán)，再與磷酸核糖相連。先合成UMP，再轉變成DTMP和CTP。特點定義嘧啶核苷酸的從頭合成是指利用磷酸核糖、氨基酸、一碳單位及CO2等簡單物質為原料，經(jīng)過一系列酶促反應，合成嘧啶核苷酸的途徑。嘧啶合成的元素來源氨基甲酰磷酸用同位素標記實驗證明CO2、谷氨酰胺和天冬氨酸是嘧啶堿基的元素來源（1）尿嘧啶核苷酸的合成1從頭合成途徑氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ和Ⅱ的區(qū)別（N乙酰谷氨酸）嘧啶核苷酸從頭合成的特點合成所需要的酶系大多在胞液內。真核細胞中，嘧啶核苷酸合成的前三個酶（氨基甲酰磷酸合成酶Ⅱ、天冬氨酸氨基甲酰轉移酶和二氫乳清酸酶）位于同一肽鏈上，是多酶復合體，有利于以均勻的速度參與嘧啶核苷酸的合成。合成從CO2和谷氨酰胺開始，經(jīng)6步反應先合成出尿嘧啶核苷酸（UMP）。由UMP出發(fā)再合成其它的嘧啶核苷酸。UMP的從頭合成分三個階段第一個階段是氨基甲酰磷酸的合成。第二個階段是氨基甲酰天冬氨酸的合成。第三個階段是嘧啶環(huán)的合成。（2）CTP的合成是在三磷酸水平上進行的。ATP尿苷酸激酶UDPUMP二磷酸尿苷激酶ADPUTPGLNATPGLUADPPIATPADPCTPCTP合成酶（3）DTMP或TMP的生成是在一磷酸水平上進行的。DCMPDUDPPINH3DUMPDTMPATP激酶DTDP激酶ADPDTTPATPADPDTMP2從頭合成的調節(jié)1）正性調節(jié)ATP磷酸核糖焦磷酸合成酶PRPP乳清酸磷酸核糖轉移酶嘌呤和嘧啶核苷酸從頭合成途徑有共同的正性調節(jié)。保證嘌呤和嘧啶核苷酸合成速度的同步化，以便合成出等量的嘌呤和嘧啶核苷酸。2）嘧啶核苷酸負性調節(jié)合成產(chǎn)物的反饋抑制進行調節(jié)。主要集中在對4個關鍵酶的反饋抑制上A氨基甲酰磷酸合成酶Ⅱ（CPSⅡ）由UMP反饋抑制。B天冬氨酸轉氨基甲酰酶由UMP和CTP反饋抑制。C磷酸核糖焦磷酸合成酶由ADP和GDP反饋抑制。DCTP合成酶CTPS，由CTP反饋抑制。CTP對天冬氨酸轉氨酶的反饋調節(jié)為變構調節(jié)CTP濃度升高時，CTP與調節(jié)亞基結合使調節(jié)亞基和催化亞基變構，酶由活性態(tài)轉為無活性態(tài)，實現(xiàn)反饋抑制調節(jié)。（二）嘧啶核苷酸的補救合成嘧啶PRPP嘧啶核苷酸PPI嘧啶磷酸核糖轉移酶尿嘧啶胸腺嘧啶乳清酸胞嘧啶尿嘧啶核苷ATPUMPADP尿苷激酶胸苷激酶TK與惡性腫瘤（三）嘧啶核苷酸的抗代謝物嘧啶類似物胸腺嘧啶5氟尿嘧啶5氟尿嘧啶5FU是胸腺嘧啶的類似物。5FU5FDUMP5FUTPDUMPDTMP合成RNA破壞RNA的結構胸甘酸合酶5FUMP氨基酸類似物（GLN）如氮雜絲氨酸抑制CTP的合成。如甲氨喋呤抑制DTMP的合成。葉酸類似物（FOLICACID）核苷類似物阿糖胞苷胞嘧啶核苷抑制CDP變?yōu)镈CDP氮雜絲氨酸阿糖胞苷氨甲碟呤氮雜絲氨酸二、嘧啶核苷酸的分解代謝嘧啶堿1磷酸核糖嘧啶核苷酸核苷核苷酸酶PPI核苷磷酸化酶尿素TAC乙酰輔酶A琥珀酰輔酶A嘌啶核苷酸與嘧啶核苷酸合成的比較相同點1合成原料基本相同嘌啶核苷酸嘧啶核苷酸2合成部位對高等動物來說主要在肝臟3都有2種合成途徑從頭和補救途徑4都是先合成一個與之有關的核苷酸然后在此基礎上進一步合成核苷酸不同點1在5PR基礎上合成嘌呤環(huán)2最先合成的核苷酸是IMP3在IMP基礎上完成AMP和GMP的合成1先合成嘧啶環(huán)再與5PR結合2先合成UMP3以UMP為基礎完成CTPDTMP的合成總結5PRPRPPIMPDAMPGMPDGMPAMPDADPGDPDGDPADPDATPGTPDGTPATPUMPCMPDUMPUDPCDPDUDPUTPCTPDUTPDTMPDCMPDTDPDCDPDTTPDCTPCO2GLNH2NCOPOMP核苷酸的從頭合成過程總結DCMP核苷酸代謝障礙引起的疾病臨床疾病缺陷的酶原因臨床特點遺傳類型1嘌呤核苷酸代謝障礙痛風①PRPP合成酶調節(jié)失常嘌呤產(chǎn)生和X染色體連②HGPRT酶排泄過多鎖，隱性遺傳LESCHNYHAN綜合征HGPRT酶遺傳缺陷嘌呤產(chǎn)生排泄X染色體連多腦性癱瘓鎖，隱性遺傳自毀容貌癥免疫缺陷癥①腺苷脫氨酶遺傳缺陷B細胞免疫缺陷常染色體隱性遺傳ADA缺乏脫氧腺苷尿癥②嘌呤核苷磷酸化酶PNP腎結石APRT酶遺傳缺陷2，8二羥基腺常染色體隱性遺傳嘌呤腎結石黃嘌呤尿黃嘌呤氧化酶遺傳缺陷黃嘌呤腎結石，常染色體隱性遺傳低尿酸血癥2嘧啶核苷酸代謝障礙先天性乳清乳清酸磷酸遺傳缺陷乳清酸排泄多常染色體隱性遺傳酸尿癥核糖轉移酶紅細胞性貧血乳清酸核苷酸遺傳缺陷乳清酸排泄較多常染色體隱性遺傳脫羧酶總結物質代謝的聯(lián)系與調節(jié)物質代謝的相互聯(lián)系代謝調節(jié)物質代謝的相互聯(lián)系METABOLICINTERRELATIONSHIPS一、在能量代謝上的相互聯(lián)系三大營養(yǎng)素共同中間產(chǎn)物共同最終代謝通路糖脂肪蛋白質乙酰COATAC2H氧化磷酸化ATPCO2三大營養(yǎng)素可在體內氧化供能。從能量供應的角度看，三大營養(yǎng)素可以互相代替，并互相制約。一般情況下，供能以糖、脂為主，并盡量節(jié)約蛋白質的消耗。任一供能物質的代謝占優(yōu)勢，常能抑制和節(jié)約其他物質的降解。例如饑餓時肝糖原分解，肌糖原分解肝糖異生，蛋白質分解以脂酸、酮體分解供能為主蛋白質分解明顯降低12天34周（一）糖代謝與脂代謝的相互聯(lián)系1攝入的糖量超過能量消耗時二、糖、脂和蛋白質之間的相互聯(lián)系葡萄糖乙酰COA合成脂肪（脂肪組織）合成糖原儲存（肝、肌肉）2脂肪的甘油部分能在體內轉變?yōu)樘侵嵋阴OA葡萄糖脂肪甘油甘油激酶肝、腎、腸磷酸甘油葡萄糖3脂肪的分解代謝受糖代謝的影響?zhàn)囸I、糖供應不足或糖代謝障礙時（二）糖與氨基酸代謝的相互聯(lián)系例如丙氨酸丙酮酸脫氨基糖異生葡萄糖1大部分氨基酸脫氨基后，生成相應的Α酮酸，可轉變?yōu)樘恰?糖代謝的中間產(chǎn)物可氨基化生成某些非必需氨基酸糖丙酮酸草酰乙酸乙酰COA檸檬酸Α酮戊二酸1蛋白質可以轉變?yōu)橹?氨基酸可作為合成磷脂的原料（三）脂類與氨基酸代謝的相互聯(lián)系但不能說，脂類可轉變?yōu)榘被帷?脂肪的甘油部分可轉變?yōu)榉潜匦璋被幔ㄋ模┖怂崤c糖、蛋白質代謝的相互聯(lián)系1氨基酸是體內合成核酸的重要原料2磷酸核糖由磷酸戊糖途徑提供葡萄糖、糖原丙酮酸乙酰COA脂肪草酰乙酸Α酮戊二酸琥珀酸延胡索酸代謝調節(jié)THEREGULATIONOFMETABOLISM代謝調節(jié)普遍存在于生物界，是生物的重要特征。主要通過細胞內代謝物濃度的變化，對酶的活性及含量進行調節(jié)，這種調節(jié)稱為原始調節(jié)或細胞水平代謝調節(jié)。單細胞生物高等生物三級水平代謝調節(jié)細胞水平代謝調節(jié)一、細胞水平的代謝調節(jié)細胞水平的代謝調節(jié)主要是酶水平的調節(jié)。細胞內酶呈隔離分布。代謝途徑的速度、方向由其中的關鍵酶KEYENZYME的活性決定。代謝調節(jié)主要是通過對關鍵酶活性的調節(jié)而實現(xiàn)的。（一）細胞內酶的隔離分布代謝途徑有關酶類常常組成多酶體系，分布于細胞的某一區(qū)域。多酶體系在細胞內的分布酶的隔離分布的意義避免了各種代謝途徑互相干擾。①速度最慢，它的速度決定整個代謝途徑的總速度，故又稱其為限速酶LIMITINGVELOCITYENZYMES。②催化單向反應不可逆或非平衡反應，它的活性決定整個代謝途徑的方向。③這類酶活性除受

簡介：201977血培養(yǎng)VS分子生物學血流感染快速分子診斷分子診斷不受抗菌藥物使用的影響血培養(yǎng)陽性后分子診斷直接使用血標本進行分子診斷快速但不能提供藥敏結果血培養(yǎng)陽性瓶分子鑒定ANTIGONEKOTSAKIETALEXPERTOPINMEDDIAGN201263209陽性血培養(yǎng)－基于PCR的檢測PCR特異性檢測病原特異性PCR特定耐藥基因檢測葡萄球菌MECA腸球菌VAN細菌載量肺炎鏈球菌自溶毒A基因LYTA拷貝數(shù)廣譜檢測PCR擴增特定靶位多態(tài)性分析測序后續(xù)基因檢測種特異性REALTIMEPCREXPERTOPINMEDDIAGN201263209CURROPININFECTDIS2011242137QPCR鑒定血培養(yǎng)陽性瓶中銅綠假單胞菌5TARGETECFXGENE血培養(yǎng)系統(tǒng)BACTALERT，87瓶FA、13瓶FN，涂片均顯示GB對照方法氧化酶，API20EDNA提取05ML肉湯，離心后加裂解液，水煮法定量PCR擴增OLIGONUCLEOTIDEPRIMERS基因特異性檢測FLUESCENTLABELEDHYBRIDIZATIONPROBES，152BPFRAGMENTANNALCLINMICROBIOLANTIMICROB2010921QPCR鑒定血培養(yǎng)陽性瓶中銅綠假單胞菌633瓶PAE，敏感性和特異性均為1001瓶KPNPAE，由于PAE20CFUML≤KPN108CFUML，PCR檢測限將ATCC27853ECFX基因克隆至TOP10ECOLIANNALCLINMICROBIOLANTIMICROB2010921陽性血培養(yǎng)－基于PCR的檢測最常見病原體多重PCR電泳譜、ELISA雜交、多重REALTIMEPCRHYPLEXBLOODSCREENBAGLICHGERMANY多重PCRELISA456H完成PROVEITSEPSISMOBIDIAGHELSINKIFINL多重REALTIMEPCR微陣列分析，檢測多種病原及MECA，3H完成多重REALTIMEPCREXPERTOPINMEDDIAGN201263209血培養(yǎng)陽性－多重REALTIMEPCRNEWMICROBIOLOGICA3665742013血培養(yǎng)陽性－多重REALTIMEPCRNEWMICROBIOLOGICA3665742013血培養(yǎng)陽性－PNAFISH核酸熒光原位雜交10血培養(yǎng)陽性肉湯革蘭染色PNAFISH革蘭陰性菌商品化試劑盒ECOKPNPAEEFA其它腸球SAUSCNCALCGL其它念珠菌報道SALMONELLASPP90MINPNAFISH完成APPLENVIRONMICROBIOL2010764476JCLINMICROBIOL20135141301JCLINMICROBIOL200947247MALDITOFMS基質輔助激光解析電離（MALDI）原理將樣品分散在基質分子中形成結晶后直接進樣，當用激光照射結晶時，基質吸收了激光的大部分能量，使基質分子和樣品獲得能量投射到氣相并得到電離，成為帶電荷的離子?；|在樣品離子形成過程中起到了質子化或去質子化的作用，使樣品帶上正電荷或負電荷，成為帶電荷的離子基質會干擾被檢測分子質譜峰的大小和濃度；不同類型的分析物選擇不同的基質MALDITOFMS飛行時間（TOF）原理離子源產(chǎn)生的離子在加速電場獲得動能，當進入高真空無電場飛行管道并在此管道內飛行時，質量較輕的離子飛行速度快，早到達檢測器；質量較重的離子飛行速度慢，晚到達檢測器。因此依據(jù)離子的飛行時間與其質荷比平方根（MZ）成正比的關系，通過測定飛行時間，計算出相應離子的分子量。MALDITOFMS操作步驟MALDITOFMS快速鑒定陽性血培養(yǎng)14使用菌落、陽性血培養(yǎng)肉湯鑒定快速20分鐘從報警到鑒定出結果）MALDITOFMSBRUKERBACTECBD正確鑒定193213陰性菌（包括厭氧菌）9061，284319陽性菌8902809復數(shù)菌正確鑒定出一種，7株緩癥鏈球菌鑒定為SPNMALDITOFMSBRUKERBACTALERTBIOMRIEUX388個陽性瓶，種正確率91（包括念珠、厭氧菌）15瓶復數(shù)菌使用通用庫多鑒定出一種，革蘭染色后使用陰性或陽性庫分析，6瓶鑒定出第二種菌CLINMICROBIOLINFECT2010161631JCLINMICROBIOL2010481542MALDITOFMS15VITEKMSBIOMRIEUX以16S為金標準，980株臨床分離株，ID正確率腸桿菌科977非發(fā)酵菌92葡萄球菌屬943鏈球菌屬848HACEK84酵母菌852JCLINMICROBIOL201048900PCRESIMS廣譜PCR－ESIMS（電噴射質譜）189陽性血培養(yǎng)和45陰性血培養(yǎng)，一致率9876例SPN標本方法陰性提供定量結果－－評估病原體載量假陰性率24幾乎均由混合感染導致56H完成檢測結合PCR的敏感性和ESIMS特異性可以直接檢測標本，不需要培養(yǎng)PROCNATLACADSCI20051028012血標本分子檢測種特異性、屬特異性、廣譜、多重PCR、微陣列分析血培養(yǎng)陰性的苛養(yǎng)菌，如BARTONELLASPP巴爾通體COXIELLABURII伯氏考克斯體MYCOPLASMASPP支原體CHLAMYDIASPP衣原體RICKETSSIASPP立克次體，TROPHERYMAWHIPPLEI商品化分子生物學檢測方法血標本18SEPTIFASTROCHEMULTIPLEXREALTIMEPCR，種屬特異性熒光探針，檢測重要血流感染致病菌SEPSITESTTMMOLZYMEUBACTERIALPANFUNGALREALTIMEPCR，A16S18SRRNAGENEBASEDUNIVERSALPCRSEQUENCING，幾乎可以鑒定所有細菌、真菌VYOOSIRSLABMULTIPLEXPCR，檢測重要血流感染菌，電泳分離擴增片段PLEXIDABBOTTEUBACTERIALPANFUNGALPCR質譜，幾乎可以鑒定所有細菌、真菌INTENSIVECAREMED2011MAYPUBLISHONLINESEPTIFASTTEST檢測的病原譜BMJOPEN20122E000392INTENSIVECAREMED20103649–56SEPTIFASTTEST評估INTENSIVECAREMED20103649–56SEPTIFAST與PCT、CRP相關性LANGENBECKSARCHSURG2012397447–455VYOO檢測能力評估PLOSONE20127E38916SEPSIS非感染SIRS血培養(yǎng)陽性血培養(yǎng)陰性，其它標本培養(yǎng)陽性SEPSIS所有培養(yǎng)陰性VYOO與微生物學一致性為462仍需改進PLOSONE20127E389163種商品化PCR檢測系統(tǒng)比對MEDKLININTENSIVMEDNOTFMED20133種商品化PCR檢測系統(tǒng)比對MEDKLININTENSIVMEDNOTFMED2013分子生物檢測血標本26幾乎所有與血培養(yǎng)對照的研究，都顯示更高的敏感性，但并非所有血培養(yǎng)陽性菌一定能檢測出來不可替代血培養(yǎng)相較于血培養(yǎng)，其高敏感性可以更早地開始抗菌治療，或改變治療方案污染導致的假陽性無法排除評估血培養(yǎng)陰性的PCR陽性結果分析其它微生物檢查結果（如BALF，傷口拭子等）免疫反應指標INTENSIVECAREMED2011MAYPUBLISHONLINE小結BSI發(fā)病率逐年升高，尤其是革蘭陽性菌和真菌BSI病原菌耐藥率持續(xù)升高優(yōu)化血培養(yǎng)流程，提高陽性率，降低污染率結合臨床分析血培養(yǎng)結果分子生物學技術快速診斷BSI，MALDITOFMS、商品化多重PCR檢測平臺、PNAFISH成為未來發(fā)展方向血培養(yǎng)不可被分子方法取代

簡介：第二章電離輻射的分子生物學效應第一節(jié)DNA的電離輻射效應輻射所致DNA損傷的類型DNA鏈斷裂、DNA堿基損傷、DNA交聯(lián)一、DNA鏈斷裂單鏈斷裂（SINGLESTRBREAK，SSB雙鏈斷裂（DOUBLESTRBREAK，DSB一、DNA損傷的種類DNA鏈斷裂單鏈斷裂（SSB）雙鏈斷裂（DSB）DNA交聯(lián)DNA鏈交聯(lián)DNA蛋白質交聯(lián)DNA二級和三級結構的變化其中DSB是輻射所致生物學效應中最重要的原初損傷，而非重接性的DSB則被認為是細胞殺傷效應的最重要的損傷。DNA鏈斷裂（DNASTRBREAK單鏈斷裂（SINGLESTRBREAK，SSBDNA雙螺旋結構中一條鏈斷裂雙鏈斷裂（DOUBLESTRBREAK，DSBDNA雙螺旋結構中兩條互補鏈于同一對應處或相鄰處同時斷裂單鏈斷裂雙鏈斷裂1DNA鏈斷裂的分子機制（1）脫氧戊糖和磷酸二酯鍵的破壞（直接）三種自由基EAQ，OH，HDNA鏈斷裂主要與OH作用有關，從脫氧戊糖抽氫，形成了5中不同的反應產(chǎn)物。OH從脫氧戊糖中抽氫，主要作用于C3’，5’），C（3’上磷酸二酯鍵斷裂多余C（5’）端。OH攻擊糖基C1’、2’、4’形成堿不穩(wěn)定性位點（ALKALILABILESITESALS），這些位點在堿處理后發(fā)生鏈斷裂。堿不穩(wěn)定性位點（ALS）OH對C（1’），C（2’），C（3’），C（4’）攻擊后的產(chǎn)物，在與六氫吡啶供熱后都能導致DNA鏈的斷裂。所以，在DNA鏈上含有損失后經(jīng)堿處理后導致DNA鏈斷裂的位點，這些位點稱為堿不穩(wěn)定性位點（ALS）（2）堿基損傷BASEDAMAGE1、充氧溶液中堿基損傷嘧啶堿羥自由基攻擊5、6位腺嘌呤羥自由基攻擊8位鳥嘌呤羥自由基攻擊4、5、8位2、細胞中堿基損傷進展不大，用電子自旋共振儀酶敏感位點ENZYMESENSITIVESITES，ESS）堿基損傷可引起DNA雙螺旋的局部變性，特異的核酸內切酶能識別和切除這種損傷，并通過酶的作用，產(chǎn)生鏈斷裂。這種特異性酶敏感位點稱為ESS。無嘌呤或無嘧啶位點（APURINICAPYRIINICSITES，APS）DNA鏈上損傷的堿基可被特異的DNA－糖基化酶除去或由于N－糖基鍵的化學水解而丟失，形成APS。形成APS在內切酶的作用下形成鏈斷裂。2DNA鏈斷裂的主要特點1單鏈斷裂與雙鏈斷裂的比值DSB約為SSB的110120SSB由一個自由基攻擊引起。DSB必須由兩個以上自由基引起。一定能量的射線所產(chǎn)生的SSB和DSB有一個大致的比值，但比值不是恒定的。2）LET對鏈斷裂的影響各種射線對鏈斷裂效應的順序中子＞Γ射線、Χ＞紫外線SSB與DSB的比值與LET的高低有關。隨著LET的升高，SSB減少，DSB增多。3）氧效應對鏈斷裂的影響氧效應可增加鏈斷裂的程度主要原因是氧效應可增加羥自由基的產(chǎn)生。4）DNA鏈發(fā)生的部位劑量不同，DNA堿基發(fā)生斷裂的概率亦不同。當劑量＜10GY照射時，堿基斷裂順序G＞A＞T≥C。當劑量＞4080GY照射時，堿基斷裂順序T＞G＞A≥C。5）DNA鏈斷裂與細胞輻射敏感性DNA的斷裂程度與輻射敏感性有關。不同哺乳動物細胞對輻射的敏感性有很大差異，平均致死劑量（D0）亦不同。DNA自然斷裂的發(fā)生通常情況下DNA斷裂的本底水平可達總DNA的百分之幾。一般方法難以測量，常引入凝膠模塊的方法來解決。DNA交聯(lián)（DNACROSSLINKING交聯(lián)種類1、鏈間交聯(lián)DNA雙螺旋結構中，一條鏈上的堿基與其互補鏈上的堿基以共價鍵結合。2、鏈內交聯(lián)DNA分子同一條鏈上的兩個堿基相互以共價鍵結合3、DNA－蛋白質交聯(lián)（DNAPROTEINCROSSLINKING，DPC）DNA與蛋白質以共價鍵結合1DNAPROTEINCROSSLINKING（DPC1DPC存在的證據(jù)小牛胸腺脫氧核糖核蛋白DNP在UV或Γ射線照射后，其中DNA的不能被提取的部分隨著照射劑量的增加而增多，但如果用胰蛋白酶處理，則觀察到這部分DNA。這是因為UV和Γ射線照射導致了DNA與核蛋白的交聯(lián)，影響了DNP中DNA的提出，胰蛋白酶能夠裂解DNA與蛋白質之間的共價鍵，消化DNP中的蛋白質部分所以全部DNA都能被提取出來。2、DPC形成的分子機制羥自由基有關（OHDNA與蛋白質之間形成共價鍵的分子機制1）輻射后蛋白質中的含硫氨基酸形成了自由基。2）蛋白質中的芳香族氨基酸形成酚型或酚氧型自由基，這類自由基在DPC中起著主要作用。3、影響DPC形成的因素氧效應如紫外線＋O2→DPC↑Γ射線＋O2→DPC↓溫度孵育（45℃）＋照射→DPC↑特別是腫瘤細胞，已用于臨床染色質的狀態(tài)染色質結構愈緊，愈容易交聯(lián)。細胞的不同周期，DPC不同。S期交聯(lián)最多，G1G2期很少4、體內DPC形成時DNA和蛋白質的選擇性DNA的選擇性具有轉錄活性的DNA。此處易發(fā)生SSB單修復也快。蛋白質的選擇性組蛋白、非組蛋白、調節(jié)蛋白、拓撲異構酶以及與復制轉錄有關的核基質蛋白。組蛋白中H3H4H2AH2B2DNADNA鏈間交聯(lián)在放射生物學中研究DNADNA鏈間的交聯(lián)的報道較少。在干燥及含25水的DNA中鏈間斷裂占優(yōu)勢；隨著水分子的增加DNA鏈斷裂生成率上升，而鏈間斷裂下降。DAN鏈間交聯(lián)多見于化學損傷，如氮芥、硫芥等；放射損傷時較少見到。放射損傷時，DNA鏈間交聯(lián)與鏈斷裂相互競爭。3DNA鏈內交聯(lián)多見于紫外線照射，電離輻射較少二聚體形成是紫外線照射后胸腺嘧啶自由基加合而成；是紫外線照射引起DNA的特征性改變。在DNA接近其最大吸收波長260NM相鄰的嘧啶堿基共價交聯(lián)形成環(huán)丁烷四元環(huán)－嘧啶二聚體此反應是可逆的。分布是非隨機性的，相鄰的兩個T、或兩個C、或C與T間都連成二聚體，其中最容易形成的是TT二聚體DNA二級和三級結構的變化DNA變性DNA雙螺旋結構解開，氫鍵斷裂，克原子磷消光系數(shù)顯著升高，出現(xiàn)了增色效應，比旋光性和粘度降低，浮力密度升高，酸堿滴定曲線改變，同時失去生物活性。1增色效應和TM值TM將DNA克原子磷消光系數(shù)Ε（P）值達到最高值12時的溫度稱之為熔解溫度（TM增色效應隨DNA變性程度的增加，其克原子磷消光系數(shù)值增大，這種現(xiàn)象稱增色效應。R射線照射后的特點1、TM值↓2、增色效應有限，與鏈間交聯(lián)有關2旋光色散（OPTICALROTATYDISPERSIOND和圓二色性DNA的D光譜在228和229NM波段有高峰，在257NM有低谷。照射后，228和257NM發(fā)生與劑量呈線性的變化粘度隨劑量的增加，粘度降低。3粘度DNA溶液粘度的改變可反映出DNA結構的改變。二、DNA損傷的修復亞致死損傷修復（SUBLETHALDAMAGEREPAIRSLDR）將預定的照射劑量分次給予，生物效應明顯減輕，表明在兩次照射間隔中細胞有所修復，這種修復稱作SLDR。潛在致死性損傷修復（POTENTIALLYLETHALDAMAGEREPAIRPLDR照射后改變細胞所處的狀態(tài)和環(huán)境，如延長接種或給予不良的營養(yǎng)和環(huán)境條件，均能提高存活率。不同類型DNA損傷的修復1、DNA單鏈斷裂的修復絕大多數(shù)正常細胞都能修復單鏈斷裂DNA修復與時間呈指數(shù)關系，修復速率依賴于溫度與SLDR有關2、DNA雙鏈斷裂的修復斷裂后即刻，細胞內酶修復系統(tǒng)啟動。修復速率的快慢與水平的高低直接決定損傷的殘留以及細胞的轉歸。（部分修復早期修復快，隨后修復的慢）與PLDR有關3、堿基損傷的修復種類多，分析較困難以嘧啶二聚體為模型，能修復但只能部分修復。4、DNA修復合成DNA期外合成或程序外DNA合成（UNSCHEDULEDDNASYNTHESISUDS）DNA合成適于損傷后即刻，隨時間延長而增加，但與細胞周期沒有關系，是一種修復合成。DNA的損傷修復機制1、回復修復細胞對DNA的某些損傷可以用很簡單的方式加以修復在單一基因產(chǎn)物的催化下，一步反應就可以完成。這種修復方式叫回復。1）酶學光復活光復活酶或DNA光解酶它的作用分成三個步驟①酶與DNA中的二聚體部位相結合；②吸收波長為260～380NM的近紫外光，酶被激活，使二聚體解聚；③酶從DNA鏈上釋放，DNA恢復正常結構。2）DNA單鏈斷裂重接DNA單鏈斷裂中有一部分是通過簡單的重接而修復的，只需要一種酶DNA連接酶LIGASE參加，因此也屬于直接回復。DNA連接酶能催化DNA雙螺旋結構中一條鏈缺口處的5’磷酸根與相鄰的一個3’羥基形成磷酸二酯健。連接所需的能量ATP如動物細胞。3）嘌呤的直接插入嘌呤插入酶受損嘌呤→APS→插入嘌呤（糖苷鍵）K糖基化酶嘌呤插入酶2、切除修復將損傷的部位（或連同其附近的一定部位）切除，然后用正確配對的、完好的堿基替代修復。有多種酶和基因參與過程識別（損傷位點→切除→修復（補）連接DNA連接酶酶和蛋白質DNA聚合酶兩個特點準確、正確修復。1堿基切除特點是切除受損傷的堿基。主要過程是水解受損傷的堿基與脫氧核糖磷酸鏈之間的N糖苷鍵。反應由一類糖基化酶催化。也即糖基化酶→APS→內、外切酶去除殘基。整個修復過程可分以下幾步。2）核甘酸切成（一段寡核苷酸）首先由一個酶系統(tǒng)識別損傷；然后在損傷兩側各水解一個磷酸二酯鍵；釋放出一段寡核苷酸；填補缺損區(qū)連接酶重新完成連接。3、多聚ADP核糖的作用ADP－核糖基多聚物的形成與存在是提高連接酶活性的重要因素，在DNA損傷修復過程中起著重要作用。4、損傷的“耐受”DNA分子的損傷有時不能立即修復。特別是在復制已經(jīng)開始，而損傷又在復制叉附近時，細胞會通過另一些機制，使復制能進行下去，待復制完成后，再通過某種機制修復殘留的損傷。復制時損傷并未消除，故稱“耐受”。包括重組修復（復制后修復）、SOS修復1）、重組修復當DNA雙鏈發(fā)生嚴重損傷時需要另一種機理來完成正確的修復。一種情況是兩條鏈同時受到損傷；另一種情況是單鏈損傷尚未修復時發(fā)生了復制，造成對應于損傷位置的新鏈缺乏正確模板；此時需要重組酶系將另一段未受損傷的雙鏈DNA移到損傷位置附近，提供正確的模板，進行重組。這便是重組修復。2）SOS修復細胞DNA受到損傷或復制系統(tǒng)受到抑制，產(chǎn)生一種調控信號，解除對許多基因的抑制，這些基因的產(chǎn)物參與修復過程。SOS修復過程是在損傷信號誘導下發(fā)生的，又稱可誘導的DNA修復。修復過程容易發(fā)生錯誤，故又稱易錯修復。4、錯配修復錯配修復是生物維持生命、保持物種穩(wěn)定的種重要功能。從細菌、酵母直至哺乳動物都普遍具有此修復機理。在修復、重組的過程中或外界損傷因子的作用下都有可能發(fā)生錯配。在修復過程中首先要識別錯配堿基對。然后需要分辨錯配的哪一側屬于母鏈，哪一側屬于新合成的錯誤鏈。最后修復。錯配糾正過程是很復雜的，至少需要10種活性因子參加。基因組修復的不均一性特點1）轉錄活性DNA修復優(yōu)于靜止的基因2）轉錄鏈優(yōu)于非轉錄鏈－修復與轉錄偶聯(lián)1、重復序列中的DNA修復靈長類細胞基因組中存在一種高度重復順序，在非洲綠猴細胞中此順序占總DNA的15％一20％，堿基組成與總DNA相近，長度為172BP，沒有轉錄功能。2、活性基因中的修復活性基因片段中二聚體的清除非?；钴S，如紫外線照射20J2M2后8小時，已清除47左右。3、活性基因中轉錄鏈的修復轉錄鏈優(yōu)先修復，其機制以轉錄修復偶聯(lián)因子的作用解釋。DNA修復基因1、原核細胞的修復基因占基因組總量1％。2、酵母有三組RAD基因（RADIATIONSENSITIVE的前三個字母）3、人類基因1）XRCC（XRAYREPAIRCROSSCOMPLEMENTING）基因；2）ERCC三、DNA損傷與修復的生物學意義DNA結構的完整與穩(wěn)定在生物學上有著特別重要的意義。在射線作用下，DNA堿基的損傷或脫落改變了密碼，引起基因的突變。導致細胞的突變或轉化。雙鏈DNASSB能迅速修復，DSB經(jīng)原位重接很少，重組修復則易發(fā)生染色體畸變。DNA交聯(lián)會影響核小體及更高層次的染色質結構，影響復制?；钚匀旧|的破壞影響基因的表達和調控。與DNA損傷修復有密切關系的另一個因素是真核細胞的染色質結構。而染色質包括DNA、組蛋白、非組蛋白及少量RNA。1染色質2核小體常染色質異染色質活性染色質非活性染色質Χ染色體四、染色質損傷對DNA輻射效應的影響一、染色質的輻射敏感性染色質（CHROMATIN真核細胞間期的核中DNA、組蛋白、非組蛋白以及少量RNA所組成的復合體。染色體（CHROMOSOME）有絲分裂期，染色質的細纖絲高度壓縮，濃集成為光學顯微鏡下能看到的深染的結構。染色質和染色體是細胞周期中不同的時期的兩種不同形態(tài)，化學本質是相同的。1、染色質的結構與分類染色質是由核小體的重復亞單位連接而成串珠狀結構。核小體由直徑為10NM55NM的組蛋白核心和盤繞于此核心之外的DNA構成組蛋白H2A，H2B，H3，H4各兩分子組成八聚體蛋白，外繞DNA長約200個堿基對140個堿基對形成超螺旋結構，60個為連接區(qū)。H1在連接區(qū)連接兩個核小體，起穩(wěn)定作用常染色質與異染色質（EUCHROMATINHETEROCHROMATIN）常染色質纖絲折疊疏松，在細胞分裂間期著色微弱，其中含有單一和重復順序的DNA，能進行轉錄。異染色質纖絲折疊緊密、在細胞分裂間期著色深，也含有重復和非重復順序的DNA，但都不能轉錄。隨體DNASATELLITEDNA）往往含有高度重復序列，聚集于異染色質區(qū)，靠近著絲點。常染色質和異染色質在化學性質上沒有什么差別，而可能是由于DNA核苷酸順序和折疊不同，導致染色質以兩種不同狀態(tài)存在。活性染色質ACTIVECHROMATIN具有轉錄活性的染色質非活性染色質INACTIVECHROMATIN不具有轉錄活性的染色質2、核小體連接區(qū)的輻射效應1、是合成RNA引物的起始部位，前者是DNA復制的起始步驟2、連接區(qū)DNA是組蛋白H1的結合部位，組蛋白H1的磷酸化與細胞分裂啟動有關。此區(qū)受輻射作用使H1的磷酸化受抑制，影響細胞分裂。3、連接區(qū)DNA易受DNASE的攻擊。受照后更易。4、DNA修復合成從連接區(qū)開始故連接區(qū)受到輻射后，意義更大3、染色質緊密程度對輻射敏感性的影響4、活性染色質與非活性染色質的輻射敏感性二、染色質的輻射降解1機制2組織的輻射敏感性與復賽中降解程度3蛋白酶在染色質降解中的作用4核酸酶在染色質自身消化中的作用三、染色質蛋白的輻射效應1組蛋白的輻射效應2非組蛋白的輻射效應第五節(jié)細胞通信和細胞信號轉導的電離輻射效應第五蛋白質和酶的輻射生物效應一、輻射對蛋白質和酶的結構和功能的影響1、蛋白質的一級結構（PRIMARYSTUCTURE肽鍵1、多肽鏈的氨基酸殘基的排列順序2、基因上遺傳密碼的排列順序決定的3、通過肽鍵連接即每一種蛋白質分子都有自己特有的氨基酸的組成和排列順序即一級結構，由這種氨基酸排列順序決定它的特定的空間結構，也就是蛋白質的一級結構決定了蛋白質的二級三級等高級結構，這就是榮獲諾貝爾獎的著名的ANFINSEN原理。蛋白質二級結構（SECONDARYSTRUCTURE）多肽鏈借助于氫鍵沿一維方向排列成具有周期性結構的構象，是多肽鏈局部的空間結構（構象），主要有Α－螺旋、Β－折疊、Β－轉角等幾種形式，它們是構成蛋白質高級結構的基本要素。三級結構（TERTIARYSTRUCTURE）主要針對球狀蛋白質而言是指整條多肽鏈由二級結構元件構建成的總三維結構，包括一級結構中相距遠的肽段之間的幾何相互關系骨架和側鏈在內的所有原子的空間排列。球狀蛋白質，側鏈基團的定位是根據(jù)它們的極性安排的蛋白質特定的空間構象是由氫鍵、離子鍵、偶極與偶極間的相互作用、疏水作用等作用力維持的，疏水作用是主要的作用力。有些蛋白質還涉及到二硫鍵。四級結構（QUATERNARYSTRUCTURE）四級結構是指在亞基和亞基之間通過疏水作用等次級鍵結合成為有序排列的特定的空間結構。亞基通常由一條多肽鏈組成，有時含兩條以上的多肽鏈，單獨存在時一般沒有生物活性。1、輻射對蛋白質結構和功能的影響一級結構主要是肽鍵斷裂，其次巰基氧化、二硫鍵還原、旁側羥基被氧化等。高級結構主要是肽鍵氫鍵、側鏈氫鍵、離子鍵和疏水鍵的改變。一級結構的改變必然影響高級結構，導致蛋白質的功能改變，酶活性改變。二、輻射對蛋白質和酶生物合成的影響DNA→→→MRNA→→→PROTEIN輻射對DNA復制和轉錄的影響均可不同程度的影響蛋白質合成，對其翻譯過程產(chǎn)生效應。抑制與激活并存三、輻射對蛋白質分解代謝的影響分解代謝增強IR→細胞溶酶體破壞→組織蛋白酶釋放→PR降解↑蛋白質代謝產(chǎn)物↑如尿中肌酸、牛黃酸、尿素等↑復習與思考了解2、4、5節(jié)熟悉3和6節(jié)掌握1節(jié)名詞解釋DNA鏈的斷裂與交聯(lián)，回復修復，重組修復，SOS修復，原癌基因，腫瘤抑制基因思考題1、試述輻射引起DNA鏈斷裂的特點及其分子機制。2、影響DNA－蛋白質交聯(lián)的因素有哪些3、試述輻射引起DNA損傷的生物學意義。4、試述回復修復的種類及機理。7、目前在輻射致癌的分子機制中，初步認識到的有哪幾點

簡介：HBV分子生物學陳忠斌博士軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所電磁與激光生物學研究室在國內因Ｂ型肝炎最為嚴重，加上會演變成慢性肝炎，肝硬化甚至肝癌，所以對人健康之威脅最大。HBV的危害性CLINICALEPIDEMIOLOGICCRELATIONSINHBVINFECTIONNENGLJMED3591486OCTOBER22008350MILLIONHBVCARRIERSWLDWIDEHBV350MILLIONHCV185MILLION乙肝病毒（HBV）與乙型肝炎乙肝病毒（HEPATITISBVIRUS，HBV）可引起肝臟急性、慢性感染，肝硬化和肝細胞癌（HEPATOCELLULARCARCINOMA，HCC）全世界HBV攜帶者數(shù)量已達到3億5千萬每年死于HBV導致的肝癌患者數(shù)量超過100萬我國大約有1億2千萬的HBV攜帶者慢性乙肝是一種潛在威脅生命的疾病。全球每年有超過50萬人死于原發(fā)性肝癌，而其中多達80％的原發(fā)性肝癌是由慢性乙肝引起的。在4億慢性乙肝患者中，有75％生活在亞洲，而中國是全球乙肝和肝癌負擔最沉重的國家。中國大陸的HBV流行率最高，這里的HBV病毒攜帶者占全球總數(shù)的13以上。據(jù)估計，中國大陸有1213億乙肝病毒攜帶者。中國臺灣的慢性HBV感染率為1520，估計有300萬乙肝病毒攜帶者。韓國約有225－227萬乙肝病毒攜帶者。印度的乙肝病毒攜帶者估計達3400萬。新加坡慢性HBV感染率為4％，約有15萬乙肝病毒攜帶者。菲律賓的慢性HBV感染率為516。泰國慢性HBV感染率為36，約有300萬乙肝病毒攜帶者。香港地區(qū)慢性HBV感染率為88，約有70萬乙肝病毒攜帶者。病毒學分類HEPADNAVIRIDAETHOHEPADNAVIRUSHBVWHVGSHVAVIHEPADNAVIRUSDHBV病毒結構和大小ENV（HBSAG大中小DANE’SPARTICLE42NMHBCAGCEDNAPHBVDNA乙型肝炎病毒乙肝病毒的結構HBVVIRIONSDANEPARTICLES20NMHBSAGPARTICLESSTRUCTUREOFHBSAGASSOCIATEDPARTICLESPHOSPHOTUNGSTICACID–NEGATIVESTAINHBV病毒學嗜肝DNA病毒科，基因長32KB4個開放讀碼框架PRESS、POLYMERASE、PRECECE、XCEPROMOTER和PRECE區(qū)變異X蛋白與肝癌的發(fā)生有關CCCDNA是HBV復制的模板大多數(shù)抗病毒藥物對CCCDNA的作用小或無作用HBVGENOMEPROTEOMESPRES1PRES2SPRES1PRES2PHSARSCPRECCFSHBCAGHBEAGPDNAPDNAPXXGENEHBXAG病毒的基因組HBV基因組又稱HBVDNA由3200BP組成為環(huán)狀部分雙股DNA分長L短S兩股L鏈含4個開放讀碼區(qū)OPENREADINGFRAMEF乙肝病毒的分生檢驗掌握血清中HBVDNA的提取方法及原理，HBVDNA實時熒光定量PCR的測定原理了解核酸測定引物設計原理，實時熒光定量PCR儀的工作原理及操作要求復習“生物大分子的分離純化”及“聚合酶鏈反應技術”章節(jié)病毒抗原抗體系統(tǒng)檢測結果分析介紹血清中病毒DNA的提取方法和原理學生分組提取血清中HBVDNA介紹實時熒光定量PCR的測定原理介紹一般核酸測定引物設計原理介紹HBVDNA測定引物設計思路1DNA提取方法有哪些2PCR原理是什么實時熒光PCR原理與普通PCR的什么不同乙型肝炎預防方法疫苗注射最有效是接受乙型肝炎疫苗注射疫苗一共需要注射三次，第一和第二次相隔一個月，第二和第三之相隔五個月。依時接受三次疫苗注射后，大約9095的人可以產(chǎn)生長期的免疫力。接受乙型肝炎預防疫苗之前，應該預先檢驗血液，只有從未被乙型肝炎感染過的人，才需要接受疫苗注射。乙肝病毒細胞模型和動物模型沒有可感染的細胞模型只有穩(wěn)定整合HBV基因組的細胞系HEPG2215細胞轉基因鼠；動物HBV土撥鼠肝炎病毒（WHBV）、鴨肝炎病毒（DHBV）抗乙型肝炎病毒治療①抑制病毒復制，減少傳染性；②改善肝功能；③減輕肝組織病變；④提高生活質量；⑤減少或阻止肝硬化和原發(fā)性肝細胞癌的發(fā)生?？共《局委煹哪康穆砸倚透窝卓共《局委熾y度慢性HBV感染難清除●嬰幼兒期感染免疫耐受性HBEAG–慢性乙型肝炎復發(fā)率很高HBVCCCDNA難消失●CCCDNA與肝細胞“共存亡”●只要CCCDNA存在復制不會停止●當前尚無藥物能直接作用于CCCDNA乙肝的綜合治療抗病毒治療免疫調節(jié)治療“保肝”治療中醫(yī)藥治療基礎治療及心理治療基因治療抗病毒藥物種類目前尚無一種能迅速、直接殺死清除乙肝病毒的藥物，最好的抗病毒藥物療效也僅能達到50％左右。目前國際醫(yī)學界公認的治療慢性乙肝有確切療效的抗病毒藥物主要有兩大類干擾素如賽若金（重組人Α1B干擾素）、進口及國產(chǎn)Α2A，Α2B干擾素等。核苷類似物拉米夫定、泛昔洛韋等。APPROVEDTREATMENTSFCHRONICHEPATITISBSTARDINTERFERONIFNPEGYLATEDIFNLAMIVUDINELAM拉米夫定ADEFOVIRDIPIVOXILADV阿德福韋ENTECAVIRETV恩替卡韋TELBIVUDINELDT干擾素1990年美國FDA正式批準干擾素Α2B（商品名甘樂能）治療慢性乙型肝炎1991年美國FDA正式批準干擾素Α2B（商品名甘樂能）治療慢性丙型肝炎1998年FDA批準干擾素Α2B（商品名甘樂能）聯(lián)合利巴韋林治療慢性丙型肝炎，成為慢性丙型肝炎的標準治療方案拉米夫定【別名】賀普丁拉米夫定【外文名】LAMIVUDINE，HEPTODIN賀維力阿德福韋酯HEPSERA葛蘭素史克公司出品的最新抗乙肝病毒新藥（賀維力片劑）制造商葛蘭素史性狀本品為類白色片恩替卡韋是一種有效的、選擇性抑制乙型肝炎病毒復制的脫氧鳥嘌呤核苷類似物由BRISTOLMYERSSQUIBB公司研究開發(fā)用于治療乙型肝炎。體外試驗表明恩替卡韋比其他核苷類似物更有效。動物模型和人體臨床研究結果顯示恩替卡韋具有極強的抑制乙型肝炎病毒復制降低血清病毒DNA水平的作用對耐拉米夫定的突變病毒株仍然有效且未見明顯的不良反應和線粒體毒性。2005年3月31日，美國FDA批準百時美施貴寶（BRISTOLMYERSSQUIBB）公司了恩替卡韋（ENTECAVIR）現(xiàn)有乙肝抗病毒藥物中，核苷類藥物初治患者4年的耐藥發(fā)生率分別為拉米夫定71，阿德福韋18，恩替卡韋1。NENGLJMED3591486OCTOBER22008NENGLJMED3591486OCTOBER22008NENGLJMED3591486OCTOBER22008SEROLOGICALSIGNSOFEMERGENCEOFADRUGRESISTANTMUTANTALANKAYFABIENZOULIMVIRUSRESEARCH1272007164–176HBVPOLYMERASEDRUGRESISTANTMUTANTSALANKAYFABIENZOULIMVIRUSRESEARCH1272007164–176HBV治療性疫苗目前有三大類1、乙肝病毒前S與S片段多肽治療性疫苗；2、細胞毒淋巴細胞表位多肽治療性疫苗；3、DNA疫苗。復習題簡述HBV基因組特征簡述HBV復制過程以及可能的阻斷病毒復制的位點簡述HBV治療藥物種類和應用中存在問題

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