簡介：在此基礎上該文從“腎藏精、主生殖”角度探討了“腎應冬”調控機制的理論內涵首次提出“腎藏精”的實質是腎臟對腎精的調節(jié)包括腎藏精、化精、泄精、腎調精以應冬等四個方面且腎調精是腎主生殖的關鍵并指出“腎藏精以應冬而生殖能力下降”的調控機制很可能是“腎調控精氣”功能適應性改變的結果腎所藏之“精”如果從調控角度來看還應包括“促進生殖之精的物質”和“抑制生殖之精的物質”它是先后天之精在腎臟氣化結合以后由于其所發(fā)揮的生理作用不同而劃分出來的在冬季腎臟的“調精”作用主要表現為腎藏精作用加強而化精、泄精作用減弱腎藏精作用加強主要是指腎中貯藏的“抑制生殖之精的物質”增多或功能加強因而生殖之精減少加之腎化精、泄精作用減弱因此表現為冬季生殖能力下降這是生物體長期適應自然環(huán)境所形成的一種保存自身生機、避免自然傷害的自我調節(jié)反應機制并指出中醫(yī)學腎臟調控理論研究在理論、方法和臨床上均具有重要的指導意義

簡介：該研究在國內率先采用基因工程技術克隆了全長的人ICOS基因和胞外段CDNA構建了ICOS轉基因細胞并在大腸桿菌中成功表達了具有生物學活性的ICOS可溶性重組蛋白對其生物學功能作了初步探討利用ICOS轉基因細胞作免疫原成功獲得兩株鼠抗人ICOS單克隆抗體并對其中一株的生物學特性作了鑒定在此基礎上分析了ICOSGL50在DC成熟與體液免疫中的作用并進一步研究了ICOSGL50信號對多發(fā)性骨髓瘤細胞體內外生物學行為的作用及其可能機制一、人ICOS分子的表達及其生物學活性研究綜合該研究結果我們成功地在大腸桿菌中表達出ICOS重組蛋白并構建了高表達膜型ICOS分子的轉基因細胞對其生物學功能研究表明ICOS轉基因細胞和重組蛋白均能直接并顯著地抑制惡性淋巴瘤DAUDI的體外增殖誘導其凋亡故重組ICOS蛋白在惡性B細胞腫瘤的生物治療中可能具有潛在的運用價值二、ICOSGL50在DC成熟及T細胞依賴性B細胞產生抗體中的作用綜上所述ICOS信號的激發(fā)可以上調不成熟的DC的CD40和CD83的表達在低劑量CD40MAB的作用下可以誘導產生成熟的DCICOSGL50信號在調節(jié)T細胞依賴性B細胞應答中的起著重要作用三、鼠抗人ICOS單克隆抗體的研制及生物學特性鑒定研究表明獲得一株穩(wěn)定分泌抗人ICOSMAB的雜交瘤細胞株2C7亞型分析2C7MAB的重鏈屬小鼠IGG1、輕鏈為K2C7MAB與標準對照MAB識別的抗原位點不完全相同能特異性識別活性T細胞表達的ICOS分子2C7MAB可以單獨促使CD4T細胞增殖也可與CD28MAB協同引起CD4T細胞進一步增殖2C7MAB協同刺激可顯著上調T細胞對IL10的分泌四、ICOSGL50信號轉導在多發(fā)性骨髓瘤生物學行為中的作用綜合所述抗人ICOS單抗2C7MAB能抑制表達ICOS分子的人多發(fā)性骨髓瘤細胞株XG1、XG2細胞的體外增殖誘導其凋亡ICOS重組蛋白能使XG2細胞上調趨化因子CSCR4、粘附分子CD54ICOSGL50在多發(fā)性骨髓細胞上共表達以及ICOS異常表達可能與腫瘤細胞的生長和生物學行為有關將GL50分子轉導于XG7細胞后能夠增強腫瘤免疫原性和激發(fā)T細胞的能力繼而成功地建立了SCID小鼠XG7和XG7GL50腫瘤模型并證實ICOSGL50信號能使荷瘤小鼠的腫瘤潛伏期延長、成瘤體積下降

簡介：蘇州大學碩士學位論文鼠抗人B71分子功能性單克隆抗體的研制及其生物學特性的研究姓名梁文飚申請學位級別碩士專業(yè)免疫學指導教師張學光邱玉華200251叢B71壁蘭墮笪壁塞壁苧竺墮堅堡墨苧苧量簦堡塑曼壅蔓墮’__O__。_O’。?！甇‘‘?！?。O‘?！甇‘’’’。。。。一。交癟技術，將免疫后小鼠的脾臟細胞與小鼠骨髓瘸細胞SP2／O進行雜交，采用聚乙二醇POLYETHYLENEGLYCOL，PEG為融合劑，經HAT選擇培養(yǎng)，以小鼠成纖維細胞轉人B71基因細胞株LB7為抗體篩選陽性細胞株，以轉基因細胞的母本細胞L作為陰性對照細胞株，經免疫熒光標記分析及抗體分泌陽性孔內細胞的反復篩選并經多次的克隆化培養(yǎng)，最終獲得4株持續(xù)、穩(wěn)定分泌鼠抗人B7ICD80單克隆抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為IFIL、3H8、6H2和7810。經快速定性試紙分析法鑒定，它們分泌的IG類別分別為IGGLIFLL、6H2、7810和IGM3H8。經體外長期傳代培養(yǎng)和液氮凍存后復蘇，雜交瘤細胞生長良好，分泌抗體的性能穩(wěn)定。MAB的生產及純化采用本室建立的腹水誘生和純化方案，腹水形成的陽性率為90％，腹水的產量平均為75ML／R小鼠。經PROTEING親和層析法和優(yōu)球蛋白沉淀法獲得純化抗體。腹水型MAB經純化后，單抗蛋白含量在06～100MG／RNL之間。免疫熒光法分析表明，腹水型單抗的效價為L1000以上，縭化后抗體蛋白用于間接免疫熒光分析的用量為O25～20UG／5105細Y胞。J為了研究單克隆抗體對B71分子表達細胞的識別和結合，選擇表達B71膜分子的惡性淋巴瘤細胞株RAJI、EBV轉化的人B淋巴母細胞株、體外誘導的DC和人扁桃體來源的淋巴細胞作為陽性表達細胞與單克隆抗體反應，并以人T淋巴自血病細胞株JURKAT以及人外周血T細胞作為陰性對照。經間接免疫熒光標記分析，結果顯示，4株單克隆抗體均能識別不同細胞表達的B71分子。|77在與法國IMMUNOTECH公司鼠抗人B71MABPE克隆號1976的競爭抑制實驗中，1F1L、6H2和7810不能完全阻斷陽性對照MAB與相應抗原的結合，提示該3株單抗與陽性對照MAB識別不同的抗原位點。采用氯氨T法將125I標記單克隆抗體，通過125I標記單抗與未標記單抗的配對競爭抑制法分析表明，1F11與6H2、7810所識別的抗原位點不同，6H2與7810所識別的抗原位點相同或相近。在此基礎上開展了用于檢測SCD80抗原試劑盒的研制工作，并初步建立了SCD80ELISA檢測方法，提示這些抗體可能具有潛IL

簡介：點擊查看更多宿主細胞對LPS刺激的應答機制中金屬蛋白酶結構域和解整合素結構域的表達及其分子生物學意義.pdf精彩內容。

簡介：目的應用分子生物學方法證實糖蛋白GPⅨ基因點突變G2113→A導致巨大血小板綜合征BSS深入探討該突變在BSS發(fā)病中的意義方法用限制性內切酶分析患者和其直系親屬以及40例正常人等位基因采用定點誘變技術構建含有GPⅨ點突變G2113→A的質粒PDⅨG2113A用含有GPⅠBΑGPⅠBΒ和GPⅨ或GPⅨ突變型全長編碼序列的質粒對中國倉鼠卵巢細胞CHO細胞共轉染流式細胞儀檢測轉染后CHO細胞表面糖蛋白的表達免疫染色和免疫印跡分析轉染后的CHO細胞胞漿中GPⅠBΑ和GPⅨ結果患者為純合子母親和兄長均為雜合子突變型CHO細胞膜上GPⅨ和GPⅠBΑ的表達顯著減少但大量存在于細胞胞漿中結論證明該例BSS患者的發(fā)病機理為GPⅨALA139GCC→THRACC突變該突變不影響GPⅠBⅨ在細胞內的合成與組裝但影響其在細胞膜表面錨定與表達

簡介：目的調查研究寧夏地區(qū)綿羊中的BDV的自然感染狀況。對陽性檢測樣本的核苷酸序列進行連接測序，比較分析BDVP24基因序列，建立病毒株的種系發(fā)生樹，闡明其在寧夏地區(qū)綿羊中的自然感染情況及其可能的種系來源；應用轉染的OL作進一步的病毒核蛋白的細胞內定位研究，初步探討病毒的感染和發(fā)病機制。方法應用巢式逆轉錄熒光定量PCRFQNRTPCR技術檢測中國寧夏地區(qū)綿羊腦組織和PBMC中的BDVP24和P40基因片段；對檢測BDVP24和P40基因片段均為陽性標本的P24基因片段進行連接、克隆、測序，并應用EMBL、DNASP40和MEGA40軟件分析核苷酸和氨基酸序列同源性相似度，構建NEIGHBJOINING基因系統發(fā)生樹并分析病毒感染的可能來源；對轉染的OL應用激光共聚焦顯微鏡技術和WESTERNBLOT的方法觀察病毒核蛋白在細胞內的表達定位。結果在寧夏地區(qū)163只綿羊腦組織和710只綿羊的PBMC中檢測到BDVP24和P40陽性基因片段，檢出率分別為368％6163和127％9710；對15例陽性檢出標本進行連接、克隆、測序，連同14例前期檢測序列基因聚合分析顯示核酸之間的同源相似度為965％～100％，氨基酸的同源相似度為953％～100％。與德國馬源性標準株HE80同源相似度較高。構建基因的系統發(fā)生樹發(fā)現寧夏的VE患者、抑郁癥患者、綿羊和同德國馬、綿羊、奧地利馬都各自形成了獨立的支系，其余陽性檢出序列形成混合支系，其中寧夏的VE患者、牛、綿羊同德國的馬、日本的綿羊形成了‘德國中國寧夏日本’的混合支系；在轉染BDVP40基因片段的熒光表達質粒的OL內激光共聚焦顯微鏡提示核蛋白存在于細胞漿和細胞膜中；WESTERNBLOT的結果顯示在細胞膜蛋白中存在核蛋白，而在細胞漿中未檢測到該蛋白。結論中國寧夏地區(qū)綿羊中可能存在BDV的自然感染；寧夏地區(qū)人和動物BDV的感染存在區(qū)域源性BDV獨立株和國外傳入基因保守株的多源性；在轉染的OL內穩(wěn)定表達了BDV核蛋白，并將其定位在細胞的結構蛋白中，尤其在細胞膜中含量更為豐富，推斷其可能在細胞的信號轉導或介導病毒感染入胞過程中發(fā)揮關鍵作用。

簡介：肝臟作為人體最大的實質性臟器，在維持體內新陳代謝中處于核心地位。肝組織的破壞，如慢性炎癥、纖維變等，往往造成全身性的、甚至是致命的代謝紊亂。但是，肝臟具有很強的再生能力，這可在一定程度上代償肝實質的破壞。然而致病因素的長期存在（如慢性肝炎），往往導致肝再生的異常，最終引起肝實質的結構異常和功能喪失，危及患者生命。因此，掌握肝臟再生的調控機制，不但具有重要的理論意義，而且具有緊迫的臨床需求。肝臟損傷或肝部分切除后，剩余肝臟會代償性再生，肝臟再生的實質是肝細胞的不斷增殖、擴增。肝細胞增殖主要依靠肝細胞生長因子（HEPATOCYTEGROWTHFACT，HGF）和白細胞介素6（INTERLEUKIN6，IL6）的作用，而這兩種細胞因子主要由一類肝臟非實質細胞肝血竇內皮細胞（LIVERSINUSOIDALENDOTHELIALCELL，LSEC）分泌。肝再生的過程伴有大量LSEC的增殖和更新。因此，LSEC對于維系肝細胞的功能狀態(tài)進而影響肝臟再生發(fā)揮著重要的作用。此外，LSEC所構成的肝血竇又是肝臟微循環(huán)的基礎結構，它的正常結構對于維系肝臟功能至關重要。本課題我們將著重通過研究LSEC以及肝血竇的結構和功能變化，來闡明其對于肝再生的基本作用和其中包含的分子調控機制。此外，既往研究已證實骨髓來源的干、祖細胞也參與到肝再生過程中。截至目前，尚無證據表明干、祖細胞可以直接分化為肝細胞進而促進肝再生。然而骨髓來源的內皮祖細胞（ENDOTHELIALPROGENITCELL，EPC）可以分化為成熟內皮細胞，這在多個組織、器官的損傷和修復過程中已被廣為證實。而肝再生過程中，骨髓來源的干、祖細胞也被證實參與LSEC的更新，它們可能直接分化為成熟的LSEC或通過旁分泌等途徑促進LSEC乃至肝細胞的增殖。由此看來，肝再生的進程可能是一個由肝細胞、LSEC等內源性因素和由骨髓來源EPC等外源性因素共同作用的結果。深入闡明肝再生的機制，我們需要從這兩個方面著手研究。NOTCH信號途徑是人體最重要的信號轉導通路之一，其分子廣泛表達于胚胎和成年個體組織中，主要由表達于相鄰細胞上的NOTCH配體和NOTCH受體、以及表達于細胞內的轉錄因子、下游分子和其他調節(jié)分子組成。RBPJ是激活NOTCH信號通路所必需的一個核心轉錄因子，它的缺失意味著NOTCH信號的完全阻斷。NOTCH信號途徑對細胞的分化、增殖、凋亡有重要的調控作用，它廣泛參與組織器官的發(fā)育、生長以及再生進程，其功能的異常與很多疾病及腫瘤發(fā)生有關。我們前期研究發(fā)現，肝再生的進程伴有NOTCH信號通路分子的廣泛變化。NOTCH信號途徑對于維持肝臟的穩(wěn)態(tài)具有重要作用。本課題我們首先利用小鼠肝部分切除模型模擬肝臟再生進程，并利用RBPJ條件性基因剔除模型，研究了RBPJ介導的NOTCH信號途徑在肝再生過程中的具體調控作用主要是NOTCH信號通路如何通過調節(jié)LSEC和肝血竇的結構和功能來調控肝細胞的功能狀態(tài)，進而影響到肝再生進程；以及NOTCH信號通路如何通過調節(jié)EPC的功能，從而影響LSEC、肝細胞的功能狀態(tài)，最終導致肝再生進程的改變；此外，我們還深入探討了這其中所包含的具體分子機制，特別是NOTCH信號通過VEGF受體分子對LSEC的調控，以及NOTCH通過CXCR4對EPC的調控。我們的主要研究成果如下1、成功構建了RBPJ條件性基因剔除的小鼠，即NOTCHRBPJ信號缺失的小鼠模型；2、我們發(fā)現NOTCH信號缺失會導致肝臟穩(wěn)態(tài)的喪失，具體表現為肝臟淤血樣改變，肝細胞、LSEC的異常增殖，正常肝小葉結構遭到破壞；3、我們發(fā)現阻斷NOTCH信號會導致肝再生功能的障礙，具體表現為肝細胞、LSEC增殖能力減弱，肝臟失代償性增大，LSEC去分化，肝血竇阻塞，肝細胞合成、分泌白蛋白能力減弱；4、通過體外實驗我們發(fā)現，NOTCH信號直接影響肝細胞、LSEC的細胞生物學活性，NOTCH信號缺失，會導致肝細胞、LSEC的異常增殖，還會造成LSEC分泌VEGF、HGF、IL6的功能障礙；5、NOTCH信號會影響到肝再生進程中，骨髓來源EPC向外周的動員和向肝臟的定向募集，阻斷NOTCH信號會增加EPC向外周血的動員，但動員出的EPC更難于募集到再生的肝臟；6、NOTCH信號缺失的骨髓細胞無法正常參與到肝臟再生并促進肝細胞、LSEC的增殖；7、NOTCH信號對于維持體外培養(yǎng)的骨髓EPC的細胞活性至關重要，阻斷該通路會導致EPC增殖、粘附、集落形成、遷移、成管腔能力的減弱；8、NOTCH信號對骨髓來源EPC的調控是通過CXCR4通路而實現的，外源性過表達CXCR4可以挽救NOTCH缺失后EPC喪失的成管腔能力。綜上所述，肝再生進程是一個多細胞共同參與并相互作用的過程。NOTCH信號通路在此過程中扮演著重要角色，它可以直接調控肝細胞、LSEC的生物學活性，也可以通過影響骨髓EPC的功能，而改變肝再生的進程。同時NOTCH信號途徑對于維持肝臟穩(wěn)態(tài)也至關重要。這些都為我們研究有關肝臟疾病的預防和治療奠定了重要的理論依據。

簡介：大連醫(yī)科大學碩士學位論文鼻咽癌CT征象的分子生物學基礎探討姓名劉丹申請學位級別碩士專業(yè)病理學與病理生理學指導教師呂申20050601蛋白陽性表達率分別為9231％與6364％，差異顯著PO05?？谘什壳旨敖M與無口咽部侵及組，PCNA蛋白陽性表達率分別為9333％與5556％差異顯著PO。05，NM23蛋白陽性表達率分別為4667％弓5556％，差異不顯著PO05。顱底骨質破壞組與無顱底骨質破壞組，PCNA蛋白陽性表達率分別為8000％與7857％，差異不顯著PO05，P53蛋白陽性表達率分別為8000％與1429％，差異顯著PO05。頸部淋巴結轉移組與無頸部淋巴結轉移組，PCNA蛋白陽性表達率分別為10000％與3750％，差異顯著P005，NM23蛋白陽性表達率分別為2500％與10000％，差異顯著PO05。結論CT征象可以反映鼻咽癌的蛋白分子表達情況1鼻咽癌CT檢查發(fā)現的鼻咽腔多側壁腫塊、莖突內軟組織腫塊、后鼻孔侵及、口咽部侵及、頸部淋巴結轉移與PCNA蛋白表達增高有關，提示這些征象可反映腫瘤增長速度快，惡性度高，預后不良。2鼻咽癌CT檢查發(fā)現的莖突內軟組織腫塊、后鼻孔侵及、顱底部骨質破壞與突變型P53蛋白表達增高有關。3鼻咽癌CT檢查發(fā)現的鼻咽腔多側壁腫塊、頸部淋巴結轉移與NM23蛋白表達降低有關，提示這些征象可反映腫瘤易發(fā)生轉移。關鍵詞鼻咽癌免疫組織化學CT征象腫瘤惡性程度

簡介：【目的】通過動物實驗模擬聚乙烯顆粒誘導假體周圍骨溶解觀察骨溶解的組織學反應和界膜內TNFΑOPG和OPGL等含量的變化了解TNFΑ、OPG和OPGL等在磨損顆粒誘導假體周圍骨溶解中的作用及其機理為人工關節(jié)無菌性松動的防治提供新的思路【方法】實驗選用SPF級雄性SD大鼠24只經雙側膝關節(jié)向股骨遠端植入鈦合金棒術后2468、10周分別向左側膝關節(jié)注入聚乙烯顆粒每次約10個顆粒平均直徑小于1ΜM右側注射同體積無顆粒生理鹽水作為空白對照術后12周處死動物取材觀察取材前抽取雙側膝關節(jié)液作細菌培養(yǎng)以排除感染動物處死后完整取出雙側股骨在同一條件下進行調線攝片制作不脫鈣硬組織切片和脫鈣石蠟切片觀察假體周圍界膜的組織學改變酶聯免疫吸附ELISA試劑盒測定假體周圍界膜組織中TNFΑ的濃度RTPCR半定量檢測假體周圍界膜組織中OPG和OPGL的MRNA含量變化所得數據選用配對T檢驗進行統計分析【結論】實驗結果證實聚乙烯顆?？梢疴伜辖鸢糁車喾N細胞參與的異物肉芽腫反應并引起炎性介質TNFΑ的分泌增加同時成骨細胞骨髓基質細胞對OPGL的合成增加而OPG的合成減少實驗結果提示OPGOPGLRANK系統可能參與磨損顆粒誘導的假體周圍骨溶解的發(fā)生與發(fā)展過程并可能以TNFΑ等細胞因于為介導

簡介：P53MDM2復合物的空間晶體結構已經清楚P53的17125位氨基酸是二者結構的關鍵該論文通過MDM2P53的復合物晶體結構剖析了二者的相互作用確定了藥效團模型該論文根據上述所得信息計算機輔助設計并合成了一系列的柔性骨架的小分子化合物用分子對接研究了目的化合物的設計依據該文共合成87個化合物其中69個未見報道包括38個目的化合物所有目的化合物和部分中間體的結構都經HNMRMS元素分析或HRMS分析確證該論文研究了在THFHO中過碘酸鈉可以在室溫或者較低溫度下脫去硅醚保護基的方法硅醚保護基包括TBDMSTIPSTMSTESTIBSTPS等對反應條件和底物適用范圍進行了研究進行試驗的底物包括TAXANE、Β內酰胺類化合物、含有Α羥基酮和鄰氨基醇的化合物以及含有酚羥基的芳香化合物發(fā)現此方法適用于脂肪羥基不能脫去芳香羥的保護基并對反應機理進行了探討結論過碘酸鈉脫除硅醚保護基是一種條件溫和、收率高、適用底物范圍廣的去硅醚保護的方法

簡介：復旦大學博士學位論文PI3KAKT信號通路對鈣蛋白酶6表達及生物學功能的調控及其分子機制姓名柳永蕾申請學位級別博士專業(yè)生物化學與分子生物學指導教師杳錫良20110409復旦大學博士學位論文發(fā)現P13KAKT通過GSK3B調控CAPN6的表達。為進一步研究P13KAKT信號通路對內源性CAPN6蛋白表達的分子機制。在第二部分，首先用P13K抑制劑LY294002處理細胞，后用蛋白質合成抑制劑CHX處理細胞，用WESTERNBLOT的方法檢測CAPN6蛋白水平發(fā)現LY294002能縮短內源性CAPN6的半衰期，降低其穩(wěn)定性。為研究AKT在蛋白質穩(wěn)定性中起的作用，穩(wěn)定下調AKT表達后的結果顯示AKT不影響CAPN6的穩(wěn)定性。用GSK3P抑制劑LICI或MTOR抑制劑RAPAMYEIN與CHX處理細胞作用不同時間點發(fā)現LICI能降低CAPN6半衰期。用LY294002、LICL或RAPAMYCIN與蛋白酶體抑制劑MGL32處理細胞后檢測CAPN6蛋白，發(fā)現LY294002與LICI可促進蛋白酶體介導的CAPN6降解，但RAPAMYCIN不影響此過程。上述結果說明P13KAKT可能通過提高CAPN6蛋白質的穩(wěn)定性和抑制蛋白酶體對其的降解而增加其表達。為深入研究P13KAKT信號通路調控CAPN6基因表達的分子機制，本文第三部分研究P13KAKT信號通路對CAPN6基因表達轉錄機制的調控。首先擴增一系列長度不同的CAPN6啟動子，將其克隆到熒光素酶報告質粒PGL3BASIC上游，經測序比對正確后，選擇構建成功載體進行下一步研究。用瞬時轉染方法及雙熒光素酶檢測系統研究啟動子質粒在7404、HELA和293T細胞中的CAPN6啟動子活性，發(fā)現93／200BP片段的啟動子活性最強。隨后觀察LY294002對該片段啟動子活性影響，發(fā)現LY294002能夠降低CAPN6啟動子活性；下調AKTL或AKT2能降低CAPN6基因啟動子活性。上述結果說明P13KAKT能在轉錄水平上調CAPN6基因的表達。為研究哪些可能的轉錄因子參與了CAPN6的轉錄調控，用啟動子預測軟件分析93／200BP片段的轉錄因子結合位點，從中選擇了一些轉錄因子結合位點并將其進行點突變，并構建點突變的啟動子熒光素酶報告質粒，將其瞬時轉染HELA和7404細胞中發(fā)現將APL、FOXD3、OCT1和HNF3P等結合位點突變后CAPN6基因活性下降。之后將93／200BP片段的啟動子質粒與APL、FOXD3或OCT1SIRNA共轉染后檢測啟動子活性，發(fā)現將下調上述轉錄因子表達后啟動子活性仍然下降，蛋白和MRNA水平都分別有不同程度下降，說明APL、FOXD3和OCT1都能在轉錄和轉錄后水平調控CAPN6的表達。應用CHIP的方法進一步證明了APL、FOXD3和OCT1能與CAPN6基因啟動子結合。本文第四部分研究CAPN6的一些細胞生物學功能。應用細胞克隆形成和細胞周期的實驗方法觀察CAPN6對腫瘤細胞增殖能力的影響，將下調CAPN6表達2

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文新生隱球菌分子生物學分類方法的研究姓名鄒先彪申請學位級別博士專業(yè)皮膚病與性病學指導教師廖萬清溫海200151論文新生隱球菌分子生物學分類方法的研究MI仃OCHONDRIMPREPARETIONBYDIFFERENTIALCENTRIFUGATION．THREEPELLETS，INCLUDINGYEASTCELL，PROTOPLASTS，MITOCHONDRIAL，WEREEXAMINEDBYTRANSMISSIONELECTRONICMICROSCOPY。20灶GMTDNAWEREOBTAINEDFROMC．NEOFORMANS，ANDITSPURITYWASENOUGH．ARAPIDANDSIMPLEMETHODFORTHEPREPARATIONOFTHEMITOCHONDRIALDNAOFC．NEOFORMANSISESTABLISHED．CDEVELOPMENTOFRAPIDMETHODSANDCOMPARISONOFDIFFERENTMETHODSTOEXTRACTDNAFROMC．NEOFORMANSDNAISANIMPORTANTFUNDAMENTALPREREQUISITETOFILRTHERDOWNSTREAMMOLECULARANALYSESINCLUDINGNUCLEICACIDAMPLIFICATIONTECHNIQUES．INTHISSTUDY，TWOSIMPLEANDRAPIDMETHODSFOREXTRACTINGGENOMICDNAWEREESTABLISHEDANDUSEDASTEMPLATEFORPCR．COMPARATIVESTUDIESOFFOURDIFFERENTDNAEXTRACTIONMETHODSWEREEVALUATEDINOURSTUDYINORDERTOASCERTAINWHICHMETHODWOULDBETHEMOSTSUITABLETOISOLATEDNA，WHICHCOULDBEUSEDFITRTHERINAMOLECULARANALYSIS，FROMC．NEOFORMANS．THESEMETHODSINVESTIGATEDWEREASFOLLOWS3％SDSLYSIS，CLASSICALLYRICENZYMETREATMENT，GLASSBEADSANDTHEBENZYLCHLORIDEMETHODS．INGLASSBEADSMETHOD，CELLSWEREBROKENBYVIGOROUSLYMIXINGWITILGLASSBEADSONAVOTOREX；IN3％SDSMETHOD，CELLSWEREHEATEDIN3％SDSEXTRACTIONBUFFERCONTAINING10RAMDTTFOR20MINUTES．THELYSATEWASEXTRACTEDWITLL5MKACANDISOPROPAN01．YIELDOFDNAWASCALCULATEDFROMTHEA260FORCLEANDNA．THERESULTSINDICATEDTHATGLASSBEADSMETHODWASTHEMOSTSENSITVE，REPRODUCIBLE，SIMPLEANDCOSTEFFECTIVEEXTRACTIONMETHOD．2MOLECULARANALYSISOFCAP64GENESEQUENCESFROMFIVESEROTYPESOFC．NEOFORMANSTHEEXTRACELLULARPOLYSACCHARIDECAPSULEPRODUCEDBYC．NEOFORMANSISESSENTIALFORITSPATHOGENICICTY．THESEROTYPINGOFC．NEOFORMANSHASBEENPERFORMEDIMMUNOLOGICALLYWITLLANTISERAAGAINSTTHEMUCOPOLYSACCHARIDECAPSULECOMPONENTOFTHEYEAST．THENUCLEOTIDESEQUENCEOFCAP64GENESFROMFIVESEROTYPESOFC．NEOFORMANSWEREANALYZEDFORTHEIRSIMILARITY．APPROXIMATELY550一BPGENOMICDNAFRAGMENTSOFTHECAP64GENEVCCREAMPLIFIEDFROMEACHISOLATEBYPCR，THEPCRPRODUCTSFROMEACHISOLATEWEREPURIFIEDANDCLONEDINTOPGEMTVECTORSRESPECTIVELY，AFTERTRANSFECTINGJML09STRAIN，THERECOMBINANTSWERESCREENEDANDIDENTIFIEDBYPCRANDSEQUENCED．ACOMPARISONOFCAP64SEQUENCESAMONGTHEFIVESEROTYPES，INDICATEDTHEPRESENCEOFTHECIDINGREGIONSVARINGINSIZEFROM67TO914

簡介：目的應用評價4種分枝桿菌分子生物學快速檢測方法，同時比較2種分枝桿菌藥敏方法，旨在為臨床選擇最準確、快速的分枝桿菌鑒定及藥敏方法。方法收集204株臨床疑似分枝桿菌，接種于羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)37℃孵育，挑取陽性單個菌落進行抗酸染色和膠體金免疫層析法來初步區(qū)分結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌。同時以16SRRNA基因測序方法為標準，采用HSP65基因測序、HSP65PCRRFLP和HAIN基因分型等方法比較鑒定菌株；分枝桿菌的藥敏結果采用試管比例法和分格平板比例法兩種方法進行比較。結果羅氏培養(yǎng)基上204株臨床疑似分枝桿菌生長良好，抗酸染色均為陽性。膠體金免疫層析法結果顯示有113株結核分枝桿菌及91株非結核分枝桿菌。16SRRNA基因測序方法結果為113株結核分枝桿菌，40株胞內分枝桿菌，15株龜分枝桿菌復合群，8株偶發(fā)分枝桿菌，6株堪薩斯分枝桿菌復合群，5株鳥分枝桿菌，4株恥垢分枝桿菌，3株草分枝桿菌，2株瘰疬分枝桿菌，2株地分枝桿菌，2株不產色分枝桿菌，2株戈登分枝桿菌，1株金色分枝桿菌和1株新金色分枝桿菌。與16SRRNA基因測序相比較，HSP65PCRRFLP結果3株草分枝桿菌、1株偶發(fā)分枝桿菌及1株不產色分枝桿菌與其不符；其余菌株鑒定結果一致，符合率為975％199204；HSP65基因測序結果1株胞內分枝桿菌、1株愛爾蘭分枝桿菌及1株地分枝桿菌與16SRRNA測序結果不符，其余菌株鑒定結果與其一致，符合率為985％201204；HAIN基因分型結果除了6株菌株只能鑒定為分枝桿菌屬以外，其余198株分枝桿菌均能鑒定到種，鑒定符合率為971％。試管比例法結果顯示113株結核分枝桿菌中耐異煙肼耐藥率7876％89113，利福平耐藥率6549％74113，乙胺丁醇耐藥率4159％47113，鏈霉素耐藥率5752％65113；其中泛耐藥株百分比5487％62113，多重耐藥株百分比1681％19113，敏感株百分比僅為1239％14113。13種非結核分枝桿菌對常見一線抗結核藥物都有一定程度的耐藥。與試管比例法相比，分格平板瓊脂比例法異煙肼耐藥符合率為9663％8689，利福平耐藥符合率為9729％7274，鏈霉素耐藥符合率為100％，乙胺丁醇耐藥符合率為9787％4647。1株胞內分枝桿菌及1株堪薩斯分枝桿菌分格平板瓊脂比例法藥敏結果不符合，其余非結核分枝桿菌結果均符合，符合率9780％8991。結論1、膠體金免疫層析法能初步快速區(qū)分結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌。2、16SRRNA基因測序不能進一步鑒定部分臨床常見菌株如堪薩斯分枝桿菌復合群和龜分枝桿菌復合群，不推薦為臨床首選方法。3、推薦HAIN基因分型作為臨床最常見分枝桿菌鑒定的首選方法；對于HAIN基因分型不能鑒定的少見非結核分枝桿菌，HSP65和16SRRNA基因測序可進一步鑒定；HSP65PCRRFLP可作為其他分子生物學方法的驗證方法及補充新型酶切條帶指紋圖譜。4、首選試管比例法作為分枝桿菌藥敏方法。分格平板瓊脂比例法藥敏結果符合率較高、操作方便，可以批量生產用于臨床分枝桿菌藥敏試驗。

簡介：分類號UDC博士學位論文密級肝細胞癌分子標志物的篩選及其生物學功能研究。’?！瓵NDBIOL02ICA’FUNCTIONALSTUDIESOFSCREENINGAIIDBIOLOGICALIUNCTIONALSTUDIES一一●■J■●●●BIOMARKERSMNEPAT0CEUUIARCARCMOMA作者姓名喬兵兵學科專業(yè)外科學學院系、所中南大學湘雅三醫(yī)院指導教師葉啟發(fā)教授論文答辯日期型叁羔26答辯委員會主席中南大學二零一二年五月一奄一一，牛血月博士學位論文中文摘要肝細胞癌分子標志物的篩選及其生物學功能研究摘要第一章用蛋白質組學方法篩選肝癌特異性分子標志物目的采用二維凝膠電泳與基質輔助激光解吸／電離飛行時間質譜2DE／MALDITOFMS方法篩選并鑒定肝細胞癌組織HCC和癌旁無瘤組織的差異表達蛋白質，并分析其與臨床病理學特征的相關性。方法收集27對肝細胞癌組織和癌旁無瘤新鮮組織，用2DE技術分離各組蛋白質，考馬斯亮藍染色后用PDQUEST圖像分析軟件識別各差異蛋白質點，應用基質輔助激光解析／電離飛行時間質譜呲DITOFMS鑒定各差異蛋白質。分別抽提各組織的MRNA和蛋白質，用RTPCR和WESTEMBLOT法，對差異表達蛋白質PRDX3進行轉錄水平和蛋白質水平的驗證。收集119例肝細胞癌組織和36例癌旁無瘤組織病理標本，用免疫組織化學法檢測差異蛋白質過氧化物酶3PRDX3在各肝癌組織中的表達情況，進一步探討PRDX3的表達與臨床病理學特征之間的相關性。結果1采用2DE方法篩選到43個差異表達蛋白質點，并用MALDITOFMS鑒定了其中22個差異蛋白質，其中15個在HCC中表達上調，它們分別是亞胺甲基轉移酶環(huán)脫胺酶，線粒體醛脫氫酶，視網膜脫氫酶1，超氧化物歧化酶【CUZN，谷胱甘肽S轉移酶A1，鈣調磷酸酶B1，氨基?；?，T復合體蛋白11樣蛋白1，抑素，磺基轉移酶1A2，3巰基丙酮酸硫基轉移酶，硫氧還蛋白依賴性過氧化物還原酶，人腔鈣蛋白，果糖激酶。7個在HCC中表達下調，它們分別是CAPGLY結構域連接蛋白4，載脂蛋白AI，大同源物3，脯氨酰肽基異構酶A，二磷酸核昔激酶A，半胱氨酸蛋白酶抑制因子B。根據其功能，將上述蛋白質進行分類，其中與物質代謝相關的有9個9／22，409％，與抗凋亡相關的有4個4／22，182％，與信號轉導相關的有7個7／22，318％，與氧化還原調節(jié)相關的有5個5／22，227％，與細胞骨架相關的有3個3／22，136％，與解毒作用相關的有2個2／22，91％，分子伴侶有3個3／22，136％，與蛋白質水解相關的有1個1／22，45％，涉及DNA合成和細胞分化的有2個2／22，

簡介：中國協和醫(yī)科大學碩士學位論文子宮內膜樣卵巢癌與卵巢子宮內膜異位癥中PTEN基因的分子生物學研究姓名常青申請學位級別碩士專業(yè)病理學指導教師郭麗娜20000501中國醫(yī)學科學院、中國協和醫(yī)科大學碩士學位論文子宮內膜樣卵巢癌與卵巢子宮內膜異位癥中FRI斟基因的分子生物學研究’一一。____一“__4。FPTENPHOSPHAM∞AND咖如HOMOB舭DDE￡ED∞CHROMOSORNE10第10號染色體上缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物基因是人類迄今為IT發(fā)現的第個具有磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN還具有與兩種細胞骨架蛋白、即張力蛋白TENSIN和輔助蛋白婦JXILIN相類似的序列，通過使局部粘連激酶愉翻砌髑10NIDM溉FAK的去磷酸化作用，可抑制癌細胞的轉移及浸潤。在許多類胂宙及部分良性、／／一病變中均有不同程度的PTEN基因突變或缺失叫√本研究目的試圖結合組織學觀察，通過檢測子宮內膜樣卵巢癌EC及子宮內膜異位癥臥兩種病變中FRI斟基因的缺失和突變、PTEN蛋白的表達情況，探討EC與尉間有無共同的基固魏襲及其與臨床病理之間的關系。本研究對石蠟包埋的27例單純子宮內膜樣卵巢癌組織單純BC、12例伴子宮內膜異位病灶的子宮內膜樣卵巢癌EE及45例單純卵巢子宮內膜異位癥組織尉組4料，分別采用微衛(wèi)星標記檢測IOQ23部位的雜合性缺失，IKR、PCRSSCP方法檢測PT斟的突變熱點第5、第7外顯予的純臺性缺失與點突變，及免疫組織化學的方法檢濺三組病交中PT掰蛋白的表達情況。結果在27例單純EC中至少一個微衛(wèi)星標記位點檢測到LCH的占33％9／27，12例EAEA中為42％5／12，EAFA近旁的雕中為17％2／1245例單純剛中為9％4／45。在發(fā)生LOB的全部14例卵巢癌中，高分化癌顯著高于中低分化癌艫如回，早期I期癌明顯高于進展期癌艫O01。在單純卵巢踟、FAFA近旁的BF與B。三組病變組織中LCH的發(fā)生率呈現遞增關系，發(fā)生刪的2例EAEA近旁的BI與同例癌存在相同位點的基因改變，其中L例尉伴有不典型4