人ICOS分子的表達(dá)與單克隆抗體的研制及其生物學(xué)功能的研究.pdf

1、該研究在國(guó)內(nèi)率先采用基因工程技術(shù)克隆了全長(zhǎng)的人ICOS基因和胞外段cDNA,構(gòu)建了ICOS轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,并在大腸桿菌中成功表達(dá)了具有生物學(xué)活性的ICOS可溶性重組蛋白,對(duì)其生物學(xué)功能作了初步探討.利用ICOS轉(zhuǎn)基因細(xì)胞作免疫原,成功獲得兩株鼠抗人ICOS單克隆抗體,并對(duì)其中一株的生物學(xué)特性作了鑒定.在此基礎(chǔ)上,分析了ICOS-GL50在DC成熟與體液免疫中的作用,并進(jìn)一步研究了ICOS-GL50信號(hào)對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞體內(nèi)外生物學(xué)行為的作用

2、及其可能機(jī)制.一、人ICOS分子的表達(dá)及其生物學(xué)活性研究.綜合該研究結(jié)果:我們成功地在大腸桿菌中表達(dá)出ICOS重組蛋白,并構(gòu)建了高表達(dá)膜型ICOS分子的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,對(duì)其生物學(xué)功能研究表明,ICOS轉(zhuǎn)基因細(xì)胞和重組蛋白均能直接并顯著地抑制惡性淋巴瘤Daudi的體外增殖,誘導(dǎo)其凋亡,故重組ICOS蛋白在惡性B細(xì)胞腫瘤的生物治療中可能具有潛在的運(yùn)用價(jià)值.二、ICOS-GL50在DC成熟及T細(xì)胞依賴性B細(xì)胞產(chǎn)生抗體中的作用.綜上所述,ICOS信

3、號(hào)的激發(fā)可以上調(diào)不成熟的DC的CD40和CD83的表達(dá),在低劑量CD40mAb的作用下,可以誘導(dǎo)產(chǎn)生成熟的DC.ICOS-GL50信號(hào)在調(diào)節(jié)T細(xì)胞依賴性B細(xì)胞應(yīng)答中的起著重要作用.三、鼠抗人ICOS單克隆抗體的研制及生物學(xué)特性鑒定.研究表明:獲得一株穩(wěn)定分泌抗人ICOSmAb的雜交瘤細(xì)胞株(2C7),亞型分析2C7mAb的重鏈屬小鼠IgG1、輕鏈為k.2C7mAb與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照mAb識(shí)別的抗原位點(diǎn)不完全相同,能特異性識(shí)別活性T細(xì)胞表達(dá)的IC

4、OS分子.2C7mAb可以單獨(dú)促使CD4<'+>T細(xì)胞增殖,也可與CD28 mAb協(xié)同引起CD4<'+>T細(xì)胞進(jìn)一步增殖,2C7mAb協(xié)同刺激可顯著上調(diào)T細(xì)胞對(duì)IL-10的分泌.四、ICOS-GL50信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在多發(fā)性骨髓瘤生物學(xué)行為中的作用.綜合所述:抗人ICOS單抗2C7mAb能抑制表達(dá)ICOS分子的人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株XG1、XG2細(xì)胞的體外增殖,誘導(dǎo)其凋亡;ICOS重組蛋白能使XG2細(xì)胞上調(diào)趨化因子CSCR4、粘附分子CD54.I