抗人神經(jīng)生長因子（NGF）單克隆抗體的研制及生物學(xué)特性的研究.pdf

1、目的:制備抗人神經(jīng)生長因子(never growth factor, NGF)的單克隆抗體(monoclonal antibody, mAb),并對其生物學(xué)特性進(jìn)行初步鑒定,為臨床上的預(yù)防和治療提供研究基礎(chǔ).方法:以人盈盤提純的NGF作為免疫原,經(jīng)皮下、腹腔免疫6~8周雌性Balb/c小鼠.采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù),將免疫鼠的脾臟細(xì)胞與同系動物的骨髓瘤細(xì)胞sp2/0進(jìn)行融合.運用酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)對雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)上清進(jìn)行

2、特異性抗體的檢測.采用有限稀釋法對陽性分泌孔的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行多次篩選和克隆化培養(yǎng),獲取穩(wěn)定分泌特異性mAb的雜交瘤細(xì)胞株.取生長良好的雜交瘤進(jìn)行染色體的數(shù)目分析.快速定性試紙法鑒定單抗的類型.體內(nèi)誘生腹水法進(jìn)行單抗的制備.Protein G免疫親和層析法進(jìn)行單抗的純化.以PC12為靶細(xì)胞,觀察和分析抗人NGF單克隆抗體對該細(xì)胞生長狀態(tài)的影響.結(jié)論:該研究已制備兩株分泌抗人NGF功能性單克隆抗體的雜交瘤,該單抗的研制為深入研究NGF的生物

3、學(xué)功能提供了重要的手段.研制抗人NGF單克隆抗體的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是增強抗原的免疫原性、調(diào)整抗原的劑量、改變抗原的免疫途徑、保持骨髓瘤細(xì)胞sp2/0的活力、穩(wěn)定細(xì)胞融合溫度、避免細(xì)胞污染等.經(jīng)實驗表明,1F6和5E4單克隆抗體可降低NGF促進(jìn)PC12細(xì)胞突起伸長的作用,具有抗NGF的特性.NGF在神經(jīng)系統(tǒng)和非神經(jīng)系統(tǒng)中具有廣泛的生理作用,研制抗人NGF單克隆抗體,在臨床上具有重要的應(yīng)用價值.該文已在實驗室獲得抗人NGF單克隆抗體,并具有較好的生