抗HBV S蛋白單克隆抗體的制備和生物學特性的研究.pdf

1、目的：乙型肝炎病毒感染危害巨大，慢性乙型肝炎至今仍缺乏有效的治療手段和解決方法，乙肝病毒感染機制的研究進展相對滯后是嚴重影響新型治療方法和藥物研發(fā)的重要原因之一。HBsAg是機體感染乙型肝炎病毒(HBV)的標志，也是機體感染HBV后血清中首先出現(xiàn)的病毒標志物，在臨床上早期診斷乙型肝炎以及應用于HBV的科研方面，有重要意義。本研究擬通過制備抗HBV S蛋白的單克隆抗體，對抗體生物學特性進行鑒定，為進一步研究HBV奠定基礎。 方法：

2、 對購買的重組乙肝疫苗以SDS-PAGE進行初步鑒定，并以間接ELISA方法鑒定其所含HBV S蛋白的特異性和免疫活性。 以此重組乙肝疫苗免疫Balb/c小鼠，采用雜交瘤技術制備抗HBVS蛋白的單克隆抗體，用間接ELISA法篩選分泌抗HBV S蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株，采用間接ELISA方法和Western blot方法進行McAb特異性鑒定；同時采用間接ELISA方法鑒定McAb的Ig亞類，檢測McAb的效價及相對

3、親和力；并對雜交瘤細胞的染色體進行分析。 結果： 購買的重組乙肝疫苗所含的HBV S蛋白純度高，無降解，具有良好的特異性及免疫原性。 通過雜交瘤技術成功獲得1株可分泌特異性McAb的雜交瘤細胞4D2。其抗體亞類為IgGl；將生長良好的雜交瘤細胞接種到預處理的Balb/c小鼠腹腔中制備腹水型單抗，間接ELISA試驗證實腹水效價可達1:108，相對親和力在105以上。間接ELISA法和Western bolt檢測證明