抗五種赤潮藻的單克隆抗體的制備和特性分析.pdf

1、　　目的：建立分泌抗海洋褐胞藻、卵圓褐胞藻、赤潮異彎藻、具齒原甲藻、尖刺擬菱形藻等五種藻的高特異性、高親和性單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株。若該類細(xì)胞株所分泌的單克隆抗體結(jié)合特定藻抗原,則可利用此類單克隆抗體鑒別此五種不同的藻,從而為赤潮藻的檢測(cè)、監(jiān)測(cè)和防治提供有效的工具。
　　方法：將五種藻混合免疫Balb/c小鼠,加強(qiáng)免疫三次后,取血清效價(jià)高的小鼠脾臟細(xì)胞按一定的比例與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞混合,加入PEG4000使兩者融合。用HAT,

2、HT等選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞,然后用間接血凝初步篩選出有抗體分泌的細(xì)胞克隆。進(jìn)一步采用間接ELISA法等,用海洋褐胞藻等五種赤潮藻細(xì)胞包被96孔酶標(biāo)板篩選分泌特異性單克隆抗體的克隆。擴(kuò)增陽性克隆并凍存,制備腹水,測(cè)定腹水效價(jià),用硫酸氨,protein-A等法純化腹水型抗體。
　　結(jié)果：所得雜交瘤細(xì)胞融合率為37.5%。經(jīng)反相間接血凝、間接ELISA法等篩選到能分泌抗藻單克隆抗體的細(xì)胞株,其中9AD2B2對(duì)海洋褐胞藻和卵圓褐胞藻

3、的特異性高；15CA7對(duì)赤潮異彎藻和尖刺擬菱形藻的特異性高；23BG2和23BG9對(duì)赤潮異彎藻、具齒原甲藻與尖刺擬菱形藻的特異性高。而獲得的M18號(hào)雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體可與以上五種藻產(chǎn)生高效價(jià)的明顯交叉反應(yīng),顯示此單抗可代替五種海洋藻的抗血清。在藻最佳包被濃度時(shí),9AD2A8腹水對(duì)五種藻的效價(jià)均可達(dá)到1：3200,23BG9E11腹水五種藻的效價(jià)可達(dá)1：1280,兩種腹水主要成分均為IgG1。
　　結(jié)論：利用雜交瘤技術(shù)能制